調節性T細胞與淋巴瘤亞型生存率的研究進展

齊琦，劉愛春

哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院血液淋巴科，哈爾濱150000

CD4+CD25+T細胞由Sakaguchi等學者首次提出，因該細胞亞群具有免疫調節活性，所以被稱為調節性T細胞（regulatory T cell，Treg）[1]。小鼠和人體內均天然存在Treg細胞約占外周血CD4+T細胞的5%～10%，除天然存在的Treg外，還存在外周誘導的抗原特異性Treg[2]。Treg最特異性的標志是FOXP3的表達，也是其最可靠的生物標志物[3]。自19世紀70年代初抑制性T細胞被描述以來，在Treg細胞表征方面的研究已取得了相當大的進步。目前，人FOXP3+CD4+T細胞可以根據其細胞表面標志物（如CD45RA和CD45RO）的表達及FOXP3表達分為不同亞群。

研究顯示，FOXP3+Treg在細胞表型和功能上存在異質性，由抑制性和非抑制性亞群組成，根據FOXP3、CD25和CD45RA的表達水平，FOXP3+CD4+T細胞可分為3個亞群：①幼稚或靜止的Treg細胞，即FOXP3loCD45RA+CD25lo表型；②效應Treg細胞，即FOXP3hiCD45RA-CD25hi表型；③沒有抑制活性的非Treg細胞，即FOXP3loCD45RACD25lo表型[4]。此外，根據FOXP3+Treg的不同作用還可以將其分為以下4類：①抑制性Treg，可抑制抗腫瘤CD8+細胞介導的免疫反應，類似于實體瘤中發現的反應；②惡性Treg，FOXP3+T細胞淋巴瘤（如成人T細胞白血病/淋巴瘤）；③直接殺死腫瘤的Treg，一些淋巴瘤細胞可以作為Treg抑制性細胞毒性的靶細胞，表明Treg可以是腫瘤細胞的殺手；④無能的Treg，當FOXP3+Treg的數量明顯減少時，成為靜止的Treg[2]。

1 Treg的功能及研究現狀

CD4+CD25+FOXP3+Treg是CD4+T細胞亞群之一，其作用是抑制其他免疫細胞的活化，維持免疫系統的穩態，抑制周圍的效應T細胞并控制對外源抗原的過度反應[5]。在宮頸癌、腎癌、黑素瘤和乳腺癌等實體腫瘤中，FOXP3+Treg的高浸潤使患者的總生存期明顯縮短；而高FOXP3+Treg浸潤可在一定程度上提高大腸癌、頭頸癌和食管癌患者的生存率。提示FOXP3+Treg的預后與腫瘤部位密切相關，且與分子亞型和臨床分期有關[6]。在淋巴瘤患者中，Treg充當抑制性Treg或惡性Treg時，抗腫瘤細胞毒性被抑制，因此，Treg數量減少與預后良好有關；相反，某些類型淋巴瘤患者的Treg可以殺死腫瘤Treg，而無能的Treg則增強了抗腫瘤細胞毒性或抗自身免疫性Treg的活性，因此，Treg數量增加與預后良好相關，而Treg數量減少常提示預后不良。由于Treg對淋巴瘤的影響較為復雜，評估患者的Treg表型和基因型可預測多種類型淋巴瘤患者的預后，包括彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（follicular cell lymphoma，FL）、皮膚T細胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）和經典霍奇金淋巴瘤（classic Hodgkin’s lymphoma，CHL）[2]。

越來越多的證據表明，FOXP3+Treg對腫瘤患者的生存情況存在有害或有利的影響，Wilke等[7]認為這與腫瘤類型密切相關，但Tanaka和Sakaguchi[4]認為這可能是因為FOXP3+細胞間真正的功能異質性。目前，已經發現的Treg生物標志物及可以特異性調節Treg功能的細胞表面分子還包括CD25、細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4，CTLA4）、糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor，GITR）和CD95（也稱為FAS）等，其中CD25（一種耗盡抗體）、CTLA4（一種封閉抗體）、GITR（一種激動性抗體）和OX40（一種激動性抗體）具有特異性的單克隆抗體可以增強小鼠的腫瘤免疫力（如環磷酰胺可以增強腫瘤特異性免疫力，CTLA4特異性阻斷單克隆抗體——伊匹單抗等已在臨床上用于治療晚期腫瘤）[3]。

2 Treg對不同種類的淋巴瘤患者生存率的影響

2.1 非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma ，NHL）

NHL是一類包含多種亞型的淋巴樣惡性腫瘤，目前仍無法完全治愈。NHL約占淋巴瘤的90%。Treg對NHL不同亞型B細胞淋巴瘤患者生存率的影響存在差異。淋巴瘤浸潤性FOXP3+Treg細胞可能代表重要的淋巴瘤/宿主微環境調節劑，因為這些細胞數量的增加可以積極地影響FL、生發中心（germinal center，GC）來源的DLBCL（GCBDLBCL）患者的生存期[2]。Tzankov等[8]研究結果顯示，在GCB-DLBCL中，Treg數量增加與預后良好呈正相關，在非GCB-DLBCL和Hans系統不可分類的DLBCL患者中，增加的FOXP3+細胞數與不良臨床結局（疾病的特異性死亡率和無失敗生存率）相關。該研究通過對其研究結果與既往的觀察結果進行分析，提出了一種假設，認為Treg和B細胞淋巴瘤細胞之間存在直接或間接的細胞通訊，從而使GCB-DLBC患者獲得了良好的預后，但由于無法確定FOXP3+細胞數量與淋巴瘤細胞周期的失調、表面蛋白的表達或EB病毒感染等因素的相關性，因此，并未明確具體的機制；該研究還認為，FOXP3+Treg可以直接抑制甚至殺死B細胞淋巴瘤細胞，抑制輔助性T淋巴細胞（helper T lymphocyte，Th）及其介導的B細胞的功能，并允許大量Tia-1+細胞的積累，這些原因可能是導致GCB淋巴瘤患者預后良好的重要因素。

非GCB-DLBCL患者的FOXP3+細胞絕對數與GCB-DLBCL的是相似的，但卻導致了不良的預后，Tzankov等[8]研究認為，GC來源的B細胞腫瘤中，可能存在額外的細胞通訊回路，導致Treg功能性下調，事實上，細胞因子白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）在GCB和非GCB-DLBCL中分布情況不同，在非GCB-DLBCL中含量特別高。雖然在非GCB-DLBCL中更容易觀察到Treg數量的增加，但由于IL-6和TNF-α均能抑制Treg的功能，因此，在非GCB-DLBCL中Treg不能發揮功能活性，導致預后不良。Tuscano等[9]開展了一項關于利妥昔單抗和伊匹單抗聯合治療復發或難治性B細胞淋巴瘤的I期研究，該研究提出伊匹單抗誘導的抑制性Treg耗竭（外周血）本身并不能單獨負責增強免疫介導的腫瘤反應，提示影響NHL患者生存率的因素可能不僅只有Treg的數目這一因素。以往的報道尚未研究過特定Treg亞群的比率預測對腫瘤免疫療法的反應能力，特別是CD45RA Treg對總Treg的比率，應該把該比率作為潛在預測因子進一步研究。

2.2 CHL

CHL在淋巴瘤中是獨一無二的，因為大部分浸潤的細胞不是惡性細胞（霍奇金和里德-斯特恩伯格細胞），而是炎性細胞，包括巨噬細胞、T細胞、B細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、成纖維細胞、漿細胞和肥大細胞[10]。研究表明，Treg過度激活或數量增加可能會降低免疫反應和抗腫瘤免疫力，并可能促進腫瘤的發生發展[11]。霍奇金淋巴瘤組織中Treg（尤其是CD4+CD25+）細胞的數量和活性均很高，可通過抑制白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）的產生和上調IL-2 Ra鏈（CD25）的表達來發揮局部免疫抑制作用，延遲或抑制CD8+T細胞和自然殺傷細胞抵抗腫瘤抗原的能力，從而保護快速自我更新細胞（rapidly self-renewing cells，RS細胞）免受免疫學監測和清除，提示RS細胞周圍微環境中Treg的存在可能具有預后價值[12]。研究顯示，霍奇金淋巴瘤患者的預后取決于Treg和其他背景浸潤細胞的比例，而不是其絕對數目，RS細胞周圍微環境中的Treg的比例高于Th2，明顯縮短了霍奇金淋巴瘤患者的無病生存期，而低比例的Treg則改善了患者的無病生存期，表明Treg具有介導抗腫瘤免疫應答的作用[13-14]。Greaves等[15]的研究顯示，FOXP3、CD68和CD20等標志物是CHL預后的預測指標，并首次證明，FOXP3聯合CD68可進一步改善預后分層，區分早期和晚期腫瘤中特別差和高風險的患者，表明Treg絕對數并非可以獨立影響患者的預后。

2.3 慢性淋巴細胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）

CLL與其他B細胞淋巴瘤（如FL）相似，CLL中的淋巴結微環境被認為是惡性腫瘤細胞與腫瘤特異性免疫細胞間相互作用的主要部位[16]。目前，CLL患者的免疫異常數據主要來自于對外周血中不同的細胞的學習，對淋巴結組織中非惡性淋巴細胞的組成及其與外周血的關系知之甚少。Hanna等[17]和D'Arena等[18]發現，CLL負荷較高的患者中Treg數量的增高更為明顯，表明CLL積極募集Treg，而Treg的聚集伴隨著相當大的免疫抑制作用，導致患者感染和繼發惡性腫瘤的風險增加[19]。考慮到感染仍然是CLL發病和死亡的主要原因，間接表明Treg的聚集與CLL患者的生存率呈負相關[20]。

2.4 外周血T細胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma，PTCL）

PTCL是一種高度異質性的淋巴細胞惡性增殖性疾病，是NHL的常見類型，約占NHL的7%，PTCL病情進展迅速、易侵襲、預后較差，5年生存率僅為30%[21]。既往對T細胞淋巴瘤（T-cell lymphoma，TCL）的研究中，Treg在腫瘤內的數目增加對患者的生存率有積極影響，如蕈樣肉芽腫（mycosis fungoides，MF）、未明確的皮膚T細胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）[22]和結外NK/T細胞淋巴瘤（Extranodal NK/T-cell lymphoma，ENKTL）[23]等。Bruneau等[24]開展的一項關于比較血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma，AITL）患者的淋巴結與反應性淋巴結情況，該研究對AITL患者的淋巴結進行活檢，發現其組織內Treg的數量明顯減少，這可能至少部分解釋了AITL患者典型的自身免疫癥狀，從而導致了不良預后。但Lundberg等[25]的研究顯示，TCL腫瘤組織內Treg的數量與總生存期沒有相關性，該研究發現所有TCL均在一定程度上表達FOXP3+Treg，但不同亞型的TCL間FOXP3+Treg表達的頻率差異很大，在TCL中，Treg的功能似乎特別復雜，部分原因是TCL的惡性細胞是淋巴源性的，因此可能被Treg抑制，部分原因是一些研究表明惡性細胞實際上可能是Treg衍生的；該研究結果與以往的實驗結果存在差異，可能受樣本數量較少影響。Roychoudhuri等[26]研究表明，CD8+細胞毒性腫瘤浸潤淋巴細胞密度/FOXP3+Treg密度的比例可以更好地預測多種腫瘤的預后[27]，腫瘤浸潤的CD8+T細胞與FOXP3+Treg細胞的比例降低與不良預后相關[4]。

3 小結與展望

Treg在惡性淋巴瘤中發揮重要作用，在不同類型的淋巴瘤患者中，FOXP3+Treg細胞比例預示著不同的生存和預后。同時，患者的生存和預后可能還與Treg的功能異質性及特定Treg亞群比例對腫瘤免疫療法的反應能力不同有關，但具體的機制仍有待闡明，需要進一步的研究。