耐藥性癲癇腦脊液P-糖蛋白、轉化生長因子β1水平變化的臨床意義研究

程麗妞，白樹風，閆俊強，金夢華

癲癇是中樞神經系統的常見疾病，是一種由多種病因引起的慢性腦部疾病，是大腦神經元突發性、高度同步化異常放電所造成的短暫性大腦功能障礙疾病。經正規的抗癲癇藥物治療，約70%的患者基本可以控制發作，但仍存在約1/3的患者對抗癲癇藥物產生耐藥，最終發展為耐藥性癲癇[1]。在對耐藥性癲癇進行研究顯示，其腦組織中P-糖蛋白(P-gp)過度表達，阻止了抗癲癇藥物透過血腦屏障，進而影響藥物的吸收和分布，產生耐藥[2]。而轉化生長因子(TGFβ)參與癲癇的發病[3]，其中TGFβ1通過炎癥反應參與癲癇神經元興奮性和(或)膠質細胞瘢痕形成，可能與癲癇耐藥有關。本研究即對耐藥性癲癇腦脊液中P-gp、TGFβ1水平變化的臨床意義進行探討分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年6月-2018年8月于我院治療有效的癲癇患者30例為敏感組，男17例，女13例；年齡19～58歲，平均(35.3±2.1)歲；病程2～11 y，平均(5.1±0.7)y。耐藥性癲癇患者30例為耐藥組，男16例，女14例；年齡17～55歲，平均(35.0±2.4)歲；病程2～10 y，平均(5.2±1.0)y。同期經我院體檢健康者20例為對照組，男15例，女15例；年齡19～60歲，平均(35.8±2.2)歲。3組受試者性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 納入標準 (1)符合2001年國際抗癲癇聯盟提出的癲癇診斷標準；(2)發作類型符合《現代神經內科學》相關標準[4]；(3)頭部影像學未見明顯器質性病變；(4)經醫院倫理委員會批準，且患者知情同意。

1.3 排除標準 (1)服用P-gp 的底物類藥物(AEDs除外)或(和)抑制劑類藥物；(2)有酒精或藥物依賴史；(3)合并惡性腫瘤、全身炎癥反應、嚴重器質性疾病或先天性代謝異常疾病。

1.4 方 法

1.4.1 標本采集 所有受試者均接受腰穿采集腦脊液4 ml，取部分于我院檢驗科常規檢測無異常后，4 ℃環境下將剩余腦脊液以2000 r/min離心10 min，分離細胞組分，保存于-80 ℃冰箱待測。

1.4.2 標本檢測 取試劑盒和腦脊液標本，室溫(20 ℃～25 ℃)放置15～30 min，酶聯免疫吸附法定量檢測P-gp 和TGFβ1，試劑盒購自美國貝克曼庫爾特，具體步驟根據試劑盒說明書操作。

1.5 觀察指標 比較分析耐藥組、敏感組和對照組腦脊液P-gp和TGFβ1水平差異。將耐藥組依據發作類型再次分組，組間比較腦脊液P-gp 和TGFβ1水平差異。

1.6 統計學分析 采用SPSS 23.0軟件，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05表示有統計學意義。

2 結 果

2.1 3組受試者腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較 耐藥組腦脊液中P-gp、TGFβ1顯著高于敏感組和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。敏感組和對照組腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無統計學意義(P>0.05)(見表1)。

表1 3組受試者腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較

2.2 不同發作類型耐藥組腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較 不同發作類型的耐藥性癲癇患者腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

表2 不同發作類型耐藥組腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較

3 討 論

目前對于耐藥性癲癇的發病機制尚未明了，其可能與多種細胞因子或受體的異常表達有關[5]。

1995年由Tishler 等學者[6]首先提出P-gp在腦組織中的過度表達可能是癲癇耐藥的原因之一，從而形成了癲癇耐藥轉運假說的基礎。P-gp在正常人組織中廣泛表達，是多藥耐藥基因-1的編碼產物，具有藥物外排泵功能。在病理狀態下，P-gp可過度表達，并將多種達到或已經進入細胞內的藥物泵出，使靶細胞內藥物濃度降低，從而產生耐藥[7,8]。

本研究中，通過對耐藥性癲癇和治療有效的癲癇患者進行分析顯示，前者腦脊液中P-gp水平顯著高于后者。P-gp主要在血腦屏障的血管內皮細胞中表達，阻止異物或藥物透過血腦屏障進入顱內；其表達水平過高可將抗癲癇藥物泵出，靶細胞內難以達到有效血藥濃度。

TGFβ信號參與癲癇的發作。動物實驗顯示，TGFβ1治療可誘發癲癇樣活動，而其阻滯劑可防止癲癇樣活動的產生[9]。氯沙坦等TGFβ信號阻斷劑可以防止延遲自發性發作復發的進展[10]，表明TGFβ信號在耐藥性癲癇的發生發展中具有重要作用。本研究中，耐藥性癲癇患者腦脊液TGFβ1水平顯著增高。TGFβ1可以觸發TGFβ信號激活，引起胞外穩態受損和炎癥反應，引發癲癇[11]。

在對不同發作類型的耐藥性癲癇患者進行分析顯示，部分性發作、全面強直痙攣發作、部分性發作繼發全面強直痙攣發作以及兩種或兩種以上發作形式的耐藥性癲癇患者腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無統計學意義；表明P-gp、TGFβ1水平升高可引起耐藥性癲癇，而與其發作類型無明顯關系。

通過本研究顯示，腦脊液中P-gp、TGFβ1水平可以作為癲癇耐藥的一項重要指標。對于正在服用抗癲癇藥物的患者，應定期檢測上述指標，一旦發現其水平升高，應及時針對性地選擇治療藥物，制定個體化治療方案，降低耐藥性癲癇的發生概率。但由于本研究納入受試者數量有限，個體差異難以排除，后續需大樣本、大范圍研究進一步證實。