補陽還五湯對力竭大鼠胃腸功能的影響及其機制研究

尹瑞欣1 馬騰1 吳曉光2

（1承德醫學院公共體育部，河北 承德 067000；2承德醫學院基礎醫學研究所，河北 承德 067000）

使運動員的運動潛能發揮到極致是現代競技體育的要義[1]，運動潛能的挖掘離不開長期超負荷的訓練，受此影響大多數的運動員長期都處于高強度的運動負荷之下，但是有報道[2]指出：超負荷運動會使運動員出現一系列的不良狀態（如：胃腸功能紊亂等等），并不能提高運動員的運動成績，故尋找合適的方法緩解運動員的疲勞狀態意義重大。中醫文化在我國傳承2000余年，認為運動性的疲勞與脾虛有關，脾氣不足使人體運化水谷的能力下降、肢體缺乏生化滋養以致失養、氣體瘀滯阻塞而使胃腸矢氣；補陽還五湯是常見益氣方劑，主治氣虛血瘀之癥，有學者[3-4]認為此方能夠改善腦出血大鼠的預后，但是有關補陽還五湯能夠治療運動疲勞而引發的胃腸功能紊亂鮮有報道，本次研究將求證補陽還五湯對運功性疲勞大鼠胃腸功能的影響，并探討其作用機制。

一、材料與方法

（一）實驗動物

清潔級SD大鼠48只，北京維通利華有限公司提供（許可證號：SCXK (京)2016-0011）。實驗動物自研究開始飼養于承德醫學院動物中心，室內溫度21-24℃，濕度40-55%，空氣流通，每日清潔。所有動物在實驗期間均自由飲食水。

（二）實驗儀器與試劑

小動物實驗跑臺（XR-PT-10A），離心機（L3-800R），UV300/X紫外可見分光光度計，實驗所用試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供。

（三）藥劑來源及煎制方法

補陽還五湯（生黃芪120g，當歸尾6g，赤芍5g，紅花、川穹、桃仁、地龍各3g）所有藥材均購于同仁堂承德分公司，以水煎制成藥湯。

（四）實驗方法

1.模型的建立、分組、給藥

實驗動物首先在承德醫學院動物中心適應性喂養1W，以體重為依據為每只大鼠編訂號碼，再依據隨機數表法隨機將48只大鼠分為3組，分別為對照組、模型組、給藥組。對照組大鼠不做任何運動，模型組與給藥組大鼠構建力竭大鼠模型，將大鼠置于沒有坡度的電動跑臺上，適應性訓練5min，然后控制跑臺速度在25-30m/min，使大鼠在跑臺上運動至力竭。力竭標準為：大鼠在跑臺上的運動姿勢由蹬地式轉換為伏地式，且大鼠在跑臺的末端已無力運動，此時給予光或聲音等刺激也無法使大鼠恢復運動狀態，所有大鼠每日進行運動，模型構建時長為3w。模型構建期間，給藥組大鼠在力竭實驗之前灌胃補陽還五湯，劑量50.2 g/kg模型組大鼠灌胃等劑量生理鹽水。

2.標本的采集

3W后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，手術剪剪開大鼠皮毛暴露大鼠腹腔，尋找腹主動脈取血，真空采血管采集血液3ml，上下搖晃使肝素與血液充分混勻，2000r/min離心，收集血漿保存于-40℃冰箱，待行胃動素（MTL）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）活性以及血管活性腸肽（VIP） 活性檢測。

血液標本采集完畢，暴露大鼠胸腔，灌注針以心尖為插入點，經左心室入升主動脈，剪開右心耳，打開恒流機，生理鹽水沖洗血液，待肝臟漂洗至無色，更換甲醛灌注，甲醛灌注先快后慢，大鼠灌注起始時劇烈抽搐，灌注結束時尾部豎起，四肢僵硬視為灌注成功。灌注成功后剪取大鼠胃腸組織，包埋成組織蠟塊，石蠟切片機制作成厚5um的切片待行HE染色。

3.HE染色觀察大鼠胃腸組織形態學改變

切片依次經二甲苯透明、梯度酒精脫水、蘇木精漂染核、鹽酸-酒精分化、伊紅漂染細胞質、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。光鏡下觀察大鼠胃腸組織的形態學變化。

4.各生化指標的檢測

MTL與VIP活性的檢測應用放射免疫法，NO的檢測應用硝酸還原酶法，NOS的檢測應用分光光度法。

（五）統計學分析

二、結果

（一）HE染色下各組大鼠胃腸組織的形態學觀察

光鏡下觀察正常組大鼠胃腸粘膜細胞排列均勻，細胞層數較厚，粘膜表面未見充血水腫，未見潰瘍灶；模型組胃腸粘膜細胞排列疏松，細胞層數較薄，大量細胞脫落，粘膜表面有散發潰瘍灶；補陽還五湯組胃腸粘膜細胞排列規則，表面細胞脫落減少，充血水腫現象明顯減輕。

（二）各組大鼠MTL、SS 含量與VIP 活性的比較

與對照組大鼠比較，模型組與給藥組大鼠的MTL、NO 含量與VIP 活性上升；與模型組比較，給藥組大鼠的MTL、NO 含量與VIP、NOS活性下降，差異均有意義（P〈0.05）。（詳見表1）

表1 各組大鼠MTL、NO 含量與VIP 活性的比較

三、討論

運動性疲勞也就是運動員在日常的備賽訓練中為了提升運動潛能而進行超過機體承受能力的運動負荷時出現的短暫的運動能力下降的現象，可分為軀體疲勞、心理疲勞、內臟疲勞等，胃腸功能的紊亂則屬于內臟疲勞范疇。目前，中醫對于運動性疲勞的機制研究還未明確，但是大多數學者的認識都基于共同的一點：氣血的陰陽、臟腑功能的失調導致機體發生復雜生理變化誘發了運動性疲勞[5]。運動性疲勞的主要表現為四肢的無力感，屬中醫學的“勞倦”范疇；脾是后天之本，脾主四肢，長久的勞倦損傷脾臟。脾主運化，負責將胃腸消化吸收的營養運往周身各處以滋養經絡、肌肉、臟腑等等，運動性疲勞損傷脾臟以后失去運化水谷的作用，則會出現納差、腹瀉、腹脹等胃腸表現；脾主升清，“生清”即為脾臟吸收胃腸水谷營養化為氣血以向上供給頭目、心肺、百骸，運動性疲勞導致的脾虛將弱化這一功能，出現泄瀉、消瘦、腹脹的胃腸表現以及精神不振、眩暈等癥狀；故緩解運動性疲勞引發的胃腸功能失調應從“益氣、活血”為突破口。補陽還五湯是補氣、活血、通絡的名方，本方中獨重的黃芪[6]能夠通過促進蛋白的合成以增加體內的血紅蛋白含量增強人體的氧氣運輸能力、減少機體氧自由基的生成降低脂質的過氧化能力、增加糖原的生成調節人體的能量代謝等多種機制增強運動能力；此外，方劑中的當歸、地龍通絡，赤芍、川芎、桃仁、紅花協同當歸尾可活血，故具有治療運動性疲勞引起的胃腸功能失調的可能性。

現代醫學認為運動性疲勞所誘發的胃腸功能變化主要與為胃腸運動功能的下降與多種情志因素影響下的消化功能受抑有關[7]。胃動素[8]是mo細胞分泌的消化間期（主要作用于復合運動）激素，能夠加快清除胃腸的消化物以促進胃腸的排空速度；血管活性腸(VIP)在人體內具有雙重身份，既是一種胃腸激素調節消化功能，又是一種神經肽類物質調節血管舒縮，其對胃腸的作用則是抑制消化功能；NOS是NO的前體成分，可促進L-精氨酸向NO的轉化，NO則可作為一種神經遞質作用于細胞膜。在胃腸組織中，VIP[9]作用的發揮要借助細胞表面的Gi蛋白，與其結合后依托鈣離子/鈣調素（CaM）促進NO的生成，發揮松弛胃部平滑肌延緩消化的作用。在本項研究中，與模型組比較，MTL、NO 含量與VIP、NOS活性下降，提示我們補陽還五湯能夠改善運動型疲勞大鼠胃腸功能下降，其機制可能與補陽還五湯減少了VIP的生成，進而抑制了VIP/NO通路緩解了胃腸平滑肌的松弛狀態促進了胃內容的消化。