新型標(biāo)準(zhǔn)化分子克隆技術(shù)──Nimble Cloning研發(fā)成功

日前，中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所言普副研究員等人經(jīng)過(guò)多年研究，開(kāi)發(fā)了一種新型的標(biāo)準(zhǔn)化分子克隆技術(shù)──Nimble Cloning。該技術(shù)能將目標(biāo)DNA通過(guò)一步反應(yīng)直接克隆到環(huán)狀目標(biāo)載體。

DNA分子克隆技術(shù)是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，其創(chuàng)新和發(fā)展直接推動(dòng)著分子生物學(xué)的進(jìn)步。目前使用的分子克隆方法有多種，各有優(yōu)缺點(diǎn)，導(dǎo)致分子克隆領(lǐng)域尚未形成一種標(biāo)準(zhǔn)化的方法，且多為國(guó)外技術(shù)，試劑盒價(jià)格昂貴。

Nimble Cloning技術(shù)集成了目前幾種克隆技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，并較好地解決了它們的不足之處。與現(xiàn)有分子克隆技術(shù)相比，Nimble Cloning具有以下優(yōu)點(diǎn)：一是直接將DNA克隆到環(huán)狀載體，避免了載體的線性化酶切和回收等步驟，不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，還提高了克隆效率。二是使用靈活，用途廣泛。PCR產(chǎn)物和環(huán)狀質(zhì)粒上的DNA（入門克隆）均可克隆到目標(biāo)載體，并且可用于單片段、多片段和多位點(diǎn)等多種形式的克隆。三是可靈活用于標(biāo)準(zhǔn)化克隆和無(wú)縫克隆。基因加帶通用接頭序列后可克隆到系統(tǒng)任何一個(gè)載體，形成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的克隆系統(tǒng)。

為了方便Nimble Cloning技術(shù)的推廣使用，言普等還構(gòu)建了一系列配套的系統(tǒng)表達(dá)載體，包括原核表達(dá)、酵母雙雜交、植物過(guò)表達(dá)、植物RNAi、植物亞細(xì)胞定位、植物BiFC、植物基因編輯、植物VIGS、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體等，初步形成了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的克隆系統(tǒng)，為基因功能研究提供了一個(gè)便利的技術(shù)平臺(tái)。

（摘自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院網(wǎng)，2020-01-19）