豬布魯氏菌病的診斷與防控措施

李天芝，于新友

（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

布魯氏菌病（Brucellosis）是由布魯氏菌引起的一種慢性傳染病。布魯氏菌能感染多種動物，包括羊、牛、豬、犬、馬、鹿、駱駝、貓、雞、鴨、狐貍、水貂、野兔等，也可感染人，是一種人獸共患病原菌，具有重要的公共衛生學意義[1]。該菌傳播途徑復雜，很難控制和消滅。布魯氏菌病在世界各地都有廣泛流行，每年造成的經濟損失高達數億美元，世界各國特別是發達國家均非常重視該病的防控。世界動物衛生組織（OIE）將布魯氏菌病列入必須報告的動物疫病，我國也將其列為的二類動物疫病。該病是我國法定檢疫和撲殺被感染家畜的四大疫病之一。20世紀80年代以前，該病在我國的流行較嚴重，80年代有所下降，自從90年代以后，疫情又呈回升勢頭，當前我國布魯氏菌病防治形勢非常嚴峻[2]。

布魯氏菌可分為多種類型，常見多發的主要有羊布魯氏菌、牛布魯氏菌和豬布魯氏菌，其中致病性最強的是羊布魯氏菌，最弱的是牛布魯氏菌。我國對布魯氏菌病的監測與凈化重點主要集中在牛和羊上，對豬布魯氏菌病關注度不高。由于豬不生產奶制品，豬布魯氏菌在人類中發病幾乎全部是職業性的，包括農場工人、獸醫和屠宰工人。1887年，英國醫生布魯氏首先從患病士兵脾臟中分離到羊種布魯氏菌。1897年，丹麥學者成功分離到牛種布魯氏菌。1914年，美國專家首次從豬流產胎兒體內分離到豬布魯氏菌[3]。性成熟期豬易感性增高，母豬表現為流產、產死胎、不孕等，公豬表現為睪丸炎、腱鞘炎和關節炎等。本文主要從豬布魯氏菌病的病原學、流行病學、臨床癥狀、病理變化、診斷及防控措施等幾個方面進行闡述，以期為該病的診斷及防控提供參考。

1 病原學

布魯氏菌為革蘭氏陰性需氧桿菌，菌體大小約為0.5～0.7μm×0.6～1.5μm[4]，多單個存在，呈球形、球桿形或短桿形。無鞭毛，不能運動，不形成芽孢，有類莢膜樣結構。該菌一般能分解葡萄糖產生少量酸，不分解甘露糖，不能產生靛基質，觸酶陽性，不液化明膠，不凝固牛乳，不溶解紅細胞，吲哚、甲基紅和VP試驗陰性，不利用檸檬酸鹽。該菌為專性需氧菌，最適生長溫度為37℃，最適pH為6.6～7.4。細菌初代分離時需5%～10%CO2，對營養要求高，培養基中需要含有血清、肝湯及葡萄糖等，且生長緩慢，需要1～2周，甚至更長時間。實驗室傳代保存菌株2～3 d內即生長良好，且對營養要求低，普通培養基上也能生長，血清肝湯瓊脂上為無色、濕潤、圓形、邊緣整齊的小菌落。布魯氏菌包括6個種20個血清型，分別為羊種布魯氏菌（B.melitensis，也稱馬爾他布魯氏菌）有1、2、3型，牛種布魯氏菌（B.abortus，也稱流產布魯氏菌）有1、2、3、4、5、6、7、9型，豬種布魯氏菌（B.suis）1、2、3、4、5型，犬種布魯氏菌（B.canis）、綿羊附睪種布魯氏菌（B.ovis）和沙林鼠種布魯氏菌（B.neotomae）各有1個生物型。其中羊種菌的毒力最強，豬種次之，牛種較弱。豬種布魯氏菌常見的為1型和3型，在世界范圍廣泛分布，對人具有較強的致病性，具有重要的公共衛生學意義。豬布魯氏桿菌2型僅存在于歐洲，宿主為豬和歐洲野兔，對人無致病性。豬布魯氏菌4型宿主為北極、西伯利亞等寒冷地區的馴鹿，豬布魯氏菌5型宿主為烏克蘭等中亞地區的嚙齒類動物。布魯氏菌革蘭氏染色為紅色，姫姆薩染色呈紫色，這兩種染色法均不易著色，常用染色法為柯茲洛夫斯基染色法，布魯氏菌染為紅色，其它細菌染為綠色或藍色。該菌對外界環境抵抗力強[5]，糞便、土壤、污水和皮毛上細菌可存活1～4個月，鮮乳中存活8 d，肉中存活2個月，流產胎兒中存活75 d，陽光直射下存活4 h。對消毒劑抵抗力弱，常規消毒劑如來蘇兒、燒堿、福爾馬林溶液、新潔爾滅均能殺滅細菌。60℃30min或70℃5min可迅速殺滅細菌，沸水中細菌迅速死亡。布魯氏菌對四環素、卡那霉素、利福平、鏈霉素、慶大霉素等抗生素敏感。

2 流行病學

我國流行的豬布魯氏菌為1型和3型，均能感染牛、羊等其它動物，也能感染人，是一種人獸共患病原菌。同樣羊、牛布魯氏菌也能感染豬和人，當豬場附近存在羊場或場內存在患布病羊，則兩者容易發生交叉感染。人布魯氏菌病一般不由人傳人，僅能通過動物傳染人。病豬和帶菌豬是主要傳染源。各品種和日齡豬均可感染，接近性成熟期豬易感性高，對妊娠期母豬和公豬危害嚴重。妊娠母豬主要表現為流產，母豬感染后通常只發生1次流產，公豬則表現為不育。仔豬和老齡豬對該病具有一定抵抗力，癥狀表現不明顯，可隱性帶菌。病原菌隨病豬糞便、尿液、精液、流產胎兒、胎衣、羊水以及分泌物和排泄物等排出體外，污染飼料、飲水、用具及周圍環境，通過消化道、呼吸道、生殖道、結膜、健康及破損皮膚黏膜感染其它健康豬[6]。該病可通過吸血昆蟲傳播，也能通過胎盤感染進行垂直傳播[7]。豬種布魯氏菌較牛、羊種布魯氏菌更易通過生殖道傳染。該病一年四季均可發生，豬繁殖期高發，呈一定區域流行性，新疫區常呈急性暴發，老疫區發病輕[8]。病原菌侵入機體后，首先在局部存活，后定居于淋巴結，并大量繁殖，后進入菌血癥時期，菌血癥常在感染后2周出現，持續時間約5周[9]。菌體隨血流進入肝、脾、骨髓、關節囊、腱鞘、睪丸和乳腺等，在細胞長期存在，并生長繁殖，菌體外特殊蛋白外衣可保護其免受吞噬細胞吞噬。豬布魯氏菌病在豬群中傳播速度慢，傳染性不強，但因病原為細胞內寄生菌，豬群一旦感染后，可長期帶菌，當環境不良或遭受應激時可再次排菌，或引起豬發病。

3 臨床癥狀

該病的潛伏期長短不一，短的兩周，長的可達半年。不同品種、不同年齡段的豬對布魯氏菌病都易感，但仔豬和老齡豬多不出現明顯臨床癥狀，而是呈隱性感染。繁殖期豬癥狀表現明顯，感染豬不表現稽留熱或波浪熱，很少見感染豬死亡。母豬表現為流產，流產可發生在妊娠任何階段，常在1～3個月內，流產前癥狀表現不明顯，流產時伴隨陰唇和乳房腫脹，陰道有紅色分泌物流出，流產后常伴有體溫升高，子宮內膜炎。通常不會出現胎衣不下。

流產胎兒多為死胎，也有的為弱仔，很少出現木乃伊胎。流產后經8～16 d方可自愈，但帶菌、排菌時間可長達30 d。流產后再次配種一般不會再次出現流產癥狀。早期流產時，因母豬多將胎兒連同胎衣吃掉，一般不易發現。公豬病初體溫升高，精神不振，可表現為睪丸炎、附睪炎，單側或雙側睪丸腫大、變硬，觸摸疼痛，病情嚴重者睪丸極度腫大，后期出現萎縮，病豬性欲減退甚至消失，失去種用價值[10]。種豬也會發生關節炎，一后肢或雙后肢關節腫大、疼痛，關節囊內充滿液體，嚴重者癱瘓，喪失運動能力。

4 病理變化

剖檢可見病豬頜下淋巴結、腹股溝淋巴結、乳房淋巴結腫脹、化膿、切面多汁，部分伴有灰黃色壞死灶。肝、腎、肺、脾與皮下組織等常發生膿腫。病豬子宮黏膜有粟米樣大小黃白色膿腫結節，其直徑多半在2～3 mm，結節質地硬實，結節中央含有大量的膿液或干酪樣物[11]，小結節可相互融合成不規則的斑塊，從而使子宮壁增厚和內膜狹窄。胎盤布滿出血點，表面有黃色滲出物覆蓋，部分豬卵巢膿腫。流產胎兒胃內容物黏稠、渾濁呈淡黃色，并含有像凝乳狀的絮狀物。公豬睪丸和附睪呈化膿性、壞死性炎癥。布魯氏菌病流產胎兒胎衣變薄，上面有粟米至綠豆大小的灰白色硬結，外觀看像是鑲嵌著珍珠，又稱珍珠胎衣，結節內充滿膿液。

5 診斷

根據流行情況、臨床癥狀及特征性病變可作出初步診斷，需要注意的是，須和一些類似的疾病作出鑒別診斷，如豬藍耳病、豬弓形蟲病、豬衣原體病、豬細小病毒病、豬偽狂犬病、豬乙型腦炎、豬鉤端螺旋體病、霉菌毒素中毒等。豬藍耳病肺臟呈紅褐色花斑狀，不塌陷，流產胎兒胎盤上充滿血泡，仔豬有呼吸道病癥狀。豬弓形蟲病肺臟淤血、水腫，有光澤，小葉間質增寬，肺臟、腎臟、脾臟表面有粟粒大小灰白色壞死灶，全身淋巴結腫大，有小點壞死灶，淋巴結切面多汁。母豬常在分娩后迅速自愈，磺胺類藥物治療有效。豬衣原體病流產胎兒皮膚有淤血，皮下水腫，胎衣呈暗紅色，黏膜表面有壞死灶。豬細小病毒病一般為初產母豬流產，流產可發生在妊娠的各階段，胎衣無出血點，無胎衣不下情況發生。豬偽狂犬病各日齡豬均有比較明顯的臨床表現，仔豬有神經癥狀和腹瀉，剖檢肝、脾有白色壞死灶，肥育豬有呼吸道病癥狀。各階段妊娠母豬均可發生流產、產木乃伊胎兒或死胎，其中以死胎為主，無論頭胎母豬還是經產母豬都可發病，無明顯季節性。乙型腦炎高溫、高濕，蚊蟲活躍季節多發，病豬體溫升高，高熱稽留，有亂沖亂撞的神經癥狀。死胎中，木乃伊胎多見，流產胎兒肌肉似水煮樣，腦水腫，子宮黏膜充血、出血，胎盤水腫、出血。公豬多為單側性睪丸腫大。豬鉤端螺旋體病仔豬可見皮下水腫，頭頸部腫脹，排茶色尿及綠色糞便，剖檢胃壁、腸系膜水腫。豬霉菌毒素中毒一般會有霉菌毒素飼喂史，小母豬外陰紅腫，子宮或肛門脫出，小公豬包皮水腫且乳腺肥大。

如要確診可采用實驗室方法檢測，最常用的實驗室檢測方法有細菌染色鏡檢、細菌分離培養、抗體檢測法和分子生物學方法。常用的細菌染色法為柯茲洛夫斯基染色，具體操作為標本涂片、火焰固定，滴加0.5%沙黃液，加熱至出現氣泡（注意不能煮沸），2～3 min后，流水洗去沙黃染料，滴加1%孔雀綠或1%美藍進行復染，約30～50 s，水洗，待干。油鏡觀察：布魯氏菌呈紅色球桿狀，其它細菌呈綠色或藍色。豬布魯氏菌分離困難，周期長，分離時一定要選取新鮮病料樣本，可選用流產材料，如羊水、陰道分泌物或菌血癥時期全血或淋巴結、脾臟等組織，初代分離培養最適生長溫度為37℃，含有5%～10%CO2的氣體溫箱中培養，一般需4～6 d，有的甚至21～30 d才能長出單菌落。通過350～400 g的豚鼠接種后可提高分離率，培養基可選用馬丁瓊脂培養基和肝浸液培養基。

布魯氏菌病抗體檢測法主要有補體結合試驗、全乳環狀凝集試驗、虎紅平板凝集反應、試管凝集試驗、ELISA（酶聯免疫吸附試驗）和膠體金法。補體結合試驗是一種公認準確性最高的方法，同時也是國際貿易中布魯氏菌病診斷的指定方法之一，操作繁瑣，適合試驗應用。全乳環狀凝集試驗是檢測乳汁中布魯氏菌病抗體常用方法，主要用于牛奶，對豬來說意義不大，且不適用于患乳房炎母牛乳、初乳、脫脂乳和煮沸鍋的乳?；⒓t平板凝集抗原為商品化試劑，生產該產品的公司有青島立見診斷發展中心、哈爾濱維科生物技術開發公司、唐山怡安生物工程有限公司、哈藥集團生物疫苗有限公司、青島易邦生物工程有限公司。具體操作為取被檢血清與虎紅抗原各30μL，滴加于平板上，攪拌混勻，放置4～10 min后。出現凝集者為陽性，否則為陰性，每次需設陽性對照和陰性對照，該法主要檢查抗體，為目前基層最常用方法。虎紅平板凝集反應操作簡單，反應時間短，適合大量樣本初篩，易出現假陽性結果，對檢測的陽性樣本，可作試管凝集試驗進一步驗證，試管凝集試驗操作繁瑣，結果觀察需24 h后，商品化布魯氏菌病試管凝集試驗抗原生產公司有唐山怡安生物工程有限公司，哈藥集團生物疫苗有限公司和青島易邦生物工程有限公司。具體操作為抗原使用時作1∶20稀釋，被檢血清分別作1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100、1∶200稀釋，同時設陰、陽性血清對照。取抗原和血清各加0.5mL于試管中，置37℃作用于24 h，觀察凝集試驗結果，1∶50“++”為陽性，1∶25“+”為可疑。試驗結果為“可疑”的動物，應于3～4周后重新采血檢驗，仍為可疑時，判為陽性。隨著快速凝集試驗的改進及ELISA等檢測技術的發展，發達國家已經棄用該法。當前商品化布魯氏菌ELISA抗體檢測試劑盒主要有武漢科前生物股份有限公司、長春西諾生物科技有限公司、洛陽萊普生信息科技有限公司、哈爾濱國生生物科技股份有限公司、哈爾濱維科生物技術開發公司生產的布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒。北京明日達科技發展有限責任公司生產的布魯氏菌間接抗體檢測試劑盒。膠體金試紙條有浙江迪恩生物科技有限公司生產的布魯氏菌抗體檢測試紙條。

分子生物學方法如PCR、熒光PCR方法已在各種動物疾病檢測領域廣泛應用，檢測速度快、敏感性高、特異性好，主要針對病原檢測，與抗體檢測法不同，可判定現癥感染，也可對豬、牛、羊等各型布魯氏菌作出鑒別診斷。LAMP檢測方法適合基層實驗室應用，但檢測敏感性太高，有時可能會出現假陽性結果。臨床上要根據自身條件及目的選擇合適的檢測方法，有時需多種方法綜合應用，從而作出正確診斷，指導臨床布魯氏菌病防控。

6 防控措施

堅持自繁自養、全進全出的飼養模式，減少引種，引種時做好隔離檢疫工作，檢測合格后方可并入大群飼養。定期對豬群檢測，尤其是豬群中出現母豬流產、公豬睪丸腫大等病例時，盡快檢測確診，陽性豬堅決淘汰。加強飼養管理，飼喂優質全價配合飼料，不飼喂霉變飼料。做好常規疫苗接種，提高豬群免疫力。豬舍提供適宜的溫度、濕度，降低豬群密度，減少豬群應激。養殖場內開展滅蚊蠅和滅鼠工作，加強環境清潔衛生，防止外來疫病傳入。豬場遠離牛羊等養殖場，禁止養貓狗。豬場內環境保持清潔衛生，定期清理糞便，每周用5%來蘇兒、10%～20%石灰乳、2%氫氧化鈉消毒1次，流產胎兒、胎衣、羊水、分泌物及被污染圈舍、用具等均應徹底消毒。做好滅鼠及滅蚊蠅工作，防止其機械帶菌傳播。

布魯氏菌是兼性細胞內寄生菌，細胞免疫在其防控中起主要作用，血清抗體只能作用于細胞外的布氏桿菌，所以死菌苗免疫所產生的免疫力非常微弱，臨床無應用價值。對豬布魯氏菌也可接種豬布魯氏菌病活疫苗（S2株）進行防控，該疫苗可口服、皮下或肌肉注射接種豬，劑量為2頭份，免疫效果好，安全性高，妊娠母豬也可接種，但對人具有一定的致病性，免疫時做好自身防護，并妥善處理剩余疫苗及所用器具，為確保疫苗免疫效果，免疫前后3 d內，豬禁止飼喂抗生素。疫苗免疫保護率在80%左后，豬群免疫后不能阻止豬排毒，對黏膜攻毒感染有一定保護力，但母豬對來自公豬的交配感染不能提供保護。同牛、羊型布魯氏菌一樣，均為光滑型，產生的抗體難以與野毒感染產生的抗體相區別。當前該疫苗主要用于牛、羊布魯氏菌病免疫和預防，豬群免疫接種率不高。

布魯氏菌病抗生素治療效果不佳，多種抗生素均能起到一定的治療作用，如鏈霉素、慶大霉素、大觀霉素、利福平、多黏菌素B、強力霉素、新霉素、四環素、復方磺胺甲噁唑，但菌體很難徹底殺滅，易復發，聯合用藥能提高抗菌效果如利福平+四環素、鏈霉素+強力霉素等。及早確診后，足量用藥是治療布魯氏菌病的關鍵。豬群一旦感染布魯氏菌后很難根除，豬只可長期帶菌、排毒，抗生素治療價值不大，因此，一般不建議進行治療，而采取群體檢疫、淘汰或屠宰的對策。

7 小結

布魯氏菌病在全球廣泛流行，給養殖業造成嚴重經濟損失，并嚴重危害人類健康。人布魯氏菌病一般由動物傳播而來，一旦發病將引起嚴重的公共衛生問題，人患病后需長期用抗生素治療，會產生嚴重后遺癥。當前全國布魯氏菌病疫情處于歷史高發期，根除布魯氏菌病傳播的根本措施是撲殺患病動物，消滅傳染源，因此快速檢出陽性動物并撲殺是有力措施。布魯氏菌病不是烈性傳染病，不引起豬群大批死亡，因而長期得不到重視，相對關注度高的牛羊布魯氏菌病，豬布魯氏菌病的防控很少被人們提及，但豬布魯氏菌病可造成豬群繁殖障礙性疾病，也可對豬群造成嚴重損失，抗生素等治療時雖然可暫時緩解癥狀，減少排菌量，當豬群遭受應激或有新的豬只進入豬群時，該病可再度暴發或流行。豬場養殖人員及相關從業工作者，一定要重視該病防控，防止自身被感染。