YAP1 在結直腸腺癌中的表達

李潔，易烽明，馮龍（通信作者）

1 萍鄉市第二人民醫院腫瘤科 （江西萍鄉 337000）；2 南昌大學第二附屬醫院腫瘤科·江西省腫瘤臨床轉化重點實驗室 （江西南昌 330000）

結直腸癌是一種臨床較常見的惡性腫瘤，且近年來發病率呈逐漸升高的趨勢。該病的病因及發病機制較復雜，尤其是分子學發病機制，但是，大多數結直腸癌仍遵循“正常黏膜-腺瘤-腺癌”的經典發展順序。有研究證實，結直腸癌也可以其他的方式發展，如“腺瘤-癌”，且該方式主要通過Wnt/β-catenin通路激活[1]。

Hippo 信號通路起初是在果蠅細胞中發現的，參與細胞的增殖和凋亡，在哺乳動物中該激酶軸高度保守。此種信號通路的核心激酶是YAP/TAZ 蛋白，其可被激活的LATS1/2-Mob 復合物磷酸化，并與14-3-3蛋白相互作用且被阻斷在細胞質中，并被泛素依賴的蛋白酶體降解，故而該信號通路可通過控制蛋白分布和蛋白酶限制YAP/TAZ 功能。而未被磷酸化的蛋白可轉移至細胞核，并與轉錄因子TEAD 結合，促進基因表達，達到細胞增殖的目的[2]。

Hippo 信號通路已被證實參與多種癌癥（肺癌、食管癌、胃癌等）的發生、發展，主要通過調控細胞凋亡，調節組織的生長，進而發揮作用。在對癌癥患者進行細胞層次的研究中均發現了Hippo 信號通路失衡，然而在結直腸癌的發病機制中，關于Hippo 信號通路的研究尚少。本研究旨在探討YAP1在結直腸腺癌中的表達情況。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2013年6月至2015年12月南昌大學第二附屬醫院收治的88例結直腸疾病患者作為研究對象，采集其中30例結腸腺癌患者的30份標本作為A 組，30例直腸腺癌患者的30份標本作為B 組，28例良性結腸息肉患者的28份標本作為C 組。

1.2 方法

采用免疫組化ABC法檢測YAP1的表達情況，具體方法為：（1）石蠟切片，脫蠟、水化；（2）采用微波法實施抗原修復，條件為0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液；（3）取切片，滴加過氧化物酶，室溫孵育10 min，使用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗3次（3 min/次）；（4）除去PBS，滴加一抗/二抗，4 ℃孵育過夜/室溫孵育15 min，PBS分兩批次沖洗6次（3 min/次）；（5）除去PBS，滴加加強型3,3′-二氨基聯苯胺（3,3′-diaminobenzidine，DAB）（新鮮配置）顯色，反應時間為3 min，經蘇木精復染，封片。結果經病理科副主任確認。

1.3 YAP1表達強度

陽性細胞百分比：0分表示<5%，10分表示5%～10%，20分表示11%～30%，40分表示31%～50%，60分表示51%～75%，80分表示>75%。染色強度：0分表示無染色，5分表示淺棕色，10分表示棕褐色，20分表示深棕色。表達強度為陽性細胞百分比評分與染色強度評分總和。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析，結果以中位數表示（不符合正態分布），兩獨立樣本比較采用非參數檢驗，檢驗標準α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 YAP1在結直腸腺癌組織中的表達

在結直腸腺癌組織標本中，YAP1染色陽性表現為棕褐色（胞質或胞核）；大部分腺泡均有染色，而周圍基質細胞無陽性染色，對比度高，見圖1。

2.2 YAP1在不同類型患者組織中的表達

圖1 YAP1 在結直腸腺癌組織中的染色

YAP1在A、B 兩組中的寬大腺體細胞及周圍基質呈寡表達，表現為無染色，證實YAP1具有較高的特異性；而在C 組中全部呈現寡表達（圖2）。正態分析結果顯示，A 組及C 組YAP1的表達數據均不符合正態分布，經統計學軟件對比分析發現，A 組的YAP1表達強度為50分，明顯高于C組的0分，差異有統計學意義（P=0.003），見圖3；B 組的YAP1表達強度為55分，明顯高于C 組的0分，差異有統計學意義（P=0.0008），見圖4。

圖2 YAP1 在不同組織中的染色

圖3 A 組與C 組的YAP1 散點圖

圖4 B 組與C 組的YAP1 散點圖

3 討論

在我國，結直腸癌每年的發病率占全部惡性腫瘤的8%～9%[3]。其發病機制較復雜，從細胞層次來講，以Wnt/β-catenin 為人們最為認可的通路，但同時，也對其他通路（如Hippo 信號通路）進行了深入的研究。Hippo 信號通路主要通過調節細胞增殖、凋亡來達到細胞生長平衡的目的[4]。

YAP 屬Hippo 信號通路下游的轉錄激活因子，其過表達可導致機體組織發生腫瘤病變，如在肝腫瘤中，可通過抑制Hippo 信號通路或過表達YAP，促進腫瘤的發生、發展。YAP 的活性變化可影響肝臟的形態及生理功能，其參與肝纖維化及肝癌的發生、發展[5]。有針對體內及體外實驗的研究證實，Hippo 信號通路的破壞及隨后的YAP1的過度激活可以誘導浸潤性宮頸癌的發生[6]。另有研究對127例行根治性手術并接受輔助放射治療的口腔鱗癌患者的組織標本進行YAP1檢測，結果顯示，YAP1過表達與患者預后不良相關[7]。有研究發現，在小鼠模型中，通過激活胰腺泡細胞中的YAP1和TAZ，可增加JAK-STAT3的信號傳導，后者可導致小鼠胰腺腫瘤的增長[8]。有研究通過免疫組化評估了302份胃癌標本中YAP1和P62蛋白的表達，結果顯示，與正常胃黏膜比較，YAP1在中分化胃腺癌、低分化腺癌和印戒細胞癌中的表達均明顯增強[9]。有針對YAP1在結直腸癌組織中表達失衡的研究顯示，利用siRNA 沉默YAP1表達可顯著抑制YAP 表達，YAP1過表達可導致結直腸癌細胞的增殖、侵襲和遷移[10]。一項納入18個研究共2 941例患者的薈萃分析表明，YAP1的過表達預示著胃腸道癌的不良預后[11]。本研究結果顯示，A、B組的YAP1表達強度均高于C 組，但A、B 組無明顯差異，表明YAP1的過表達與結直腸腺癌的發生、發展密切相關。

綜上所述，Hippo 信號通路失衡及YAP1過表達與結直腸腺癌的發生、發展密切相關，但目前越來越多的實驗證據表明，YAP/TAZ 存在多個步驟的級聯反應激活，且也有眾多其他的信號通路可導致YAP/TAZ 的活化，使得YAP/TAZ 上游的信號網絡復雜，研究YAP/TAZ 的激活可為癌癥治療提供新的靶點。