新城疫病毒F 蛋白B 細胞抗原表位鑒定

趙月兵 王東 王鐵菊 馬學忠

（河南省南陽市動物疫病預防控制中心 473000）

1 新城疫（ND）

新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一種急性、高度致死性的禽類傳染病，被國際獸疫局（Office International des Epizooties，OlE） 列為對畜禽危害最大的A 類傳染病之一。自1926 年從印度尼西亞爪哇分離到NDV以來，在世界上已發生了4 次ND 大流行，造成了巨大的經濟損失。ND 也是一直嚴重危害我國養禽業的疫病之一，但由于疫苗的廣泛使用，此病己基本得到較好控制，近年來ND 的流行出現了以下新特點。

（1） 免疫雞群發生雞新城疫流行。經過多次免疫的雞群仍然發生本病，多發生在二免與三免之間。造成免疫失敗的主要原因是現行疫苗越來越不足以抵擋野毒的侵襲。

（2） 病雞群出現亞臨床癥狀或非典型癥狀，主要表現為呼吸道癥狀和神經癥狀，產蛋雞主要表現為產蛋量下降。由于病雞常出現呼吸困難、甩頭、張口呼吸等癥狀，與其他一些呼吸道疾病如傳染性喉氣管炎、傳染性支氣管炎、慢性呼吸道病等病的癥狀十分相似，給本病診斷增加了難度。

（3） 低發病率和低死亡率。目前出現的雞新城疫發病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，產蛋雞產蛋率下降30%左右。

（4） 剖檢病變不明顯。典型雞新城疫病變明顯部分表現在腺胃黏膜、肌胃角質膜下出血，腸黏膜出血，盲腸扁桃體腫大、壞死、出血。目前經過免疫的雞群發生雞新城疫時多數無上述明顯病變，有的只有十二指腸、直腸泄殖腔黏膜有出血點，腺胃、肌胃基本無病變。

（5） 雞群發生雞新城疫時多繼發大腸桿菌病。

本項鑒定應用生物信息學技術系統分析NDVF 蛋白生物學特性、一級結構和二級結構特性，應用多肽合成技術、基因工程技術和單克隆抗體技術，通過合成全部覆蓋F 蛋白一級結構序列的重疊多肽，結合F 蛋白的三維空間結構分析、鑒定F 蛋白的B 細胞抗原表位譜。為全面認識機體免疫系統對NDV 的識別規律，探討體液免疫系統抵抗NDV 感染的本質提供重要的理論依據。同時，通過全面認識和定位NDV 的B 細胞抗原表位譜為新型、高效、安全、營養的新型疫苗設計和病毒抗體檢測提供特異性的參考靶點。傳統疫苗由于成分復雜，在引起保護性免疫反應的同時，還刺激機體產生針對非特異性蛋白的大量無關抗體，大大消耗了機體免疫系統的資源，致使免疫系統不能最大化的充分發揮有效作用。傳統檢測NDV 病毒抗體的方法為HI 實驗，該方法不僅操作煩瑣，還不能準確反映血清抗體中和性，本項研究通過NDV 中和性抗原表位的鑒定，為篩選檢測血清中和性抗體的候選表位抗原，設計NDV 血清抗體檢測的多肽-ELISA 檢測方法奠定基礎，為疫苗免疫效果評價和最佳免疫時間確定提供技術依據。另外，通過全面認識和定位NDVB 細胞抗原表位可以了解該病毒抗原變異規律。揭示其免疫保護和免疫逃逸的規律。最后，NDVB 細胞抗原表位的鑒定對進一步研究動物機體體液免疫的啟動規律具有重要的指導意義。

2 本鑒定的創新點有

（1） 詳細地繪制NDV F 蛋白的B 細胞抗原表位圖譜。證明F 蛋白中含有4 個中和性單克隆抗體識別的線性表位： EP1：36TLRSETSTYNLTV48；EP2： 66SNGNYKF72；EP3： 210DRPRVYTITAADDYQFS226；EP4： 316SWSARGSLAVTI327 和5個多抗反應位點： ES1： 81NLPASYNYCRLVSRSLTV98；ES2：311GSLAVTIHGGNYPGALRPVTLV332；ES3： 341FELIPNPELA KNLVTEYG358；ES4： 403NSPLKIAGAFGFK415；ES5： 409RA IRRIAVPVVS420。

（2） 應用單克隆抗體識別的表位多肽187CDSSDRPRVYTIT199 和337WSARGSLAVTIHG349 與載體蛋白KLH 偶聯后，免疫小鼠能產生針對其多肽本身的抗體，該抗體能在雞胚成纖維細胞上中和雞NDV 血清I 型病毒的增殖。

（3） 對揭示NDV 體液免疫發生的本質具有重要意義，同時為設計ND 新型表位疫苗奠定基礎。

綜上所述，本鑒定結合現實生產，技術路線正確，鑒定方法先進，設計合理，資料完整詳實，數據可靠，已達到同類鑒定的國內領先水平，具有較大的學術理論價值和應用前景。