影響雞新城疫HI 抗體檢測結果因素分析

閻曉紅

（山西省畜牧獸醫學校 030024）

新城疫又稱為亞洲雞瘟，是由新城疫病毒引起雞和火雞的急性、高度接觸性傳染病，是嚴重危害家禽的重要傳染病之一，在我國被列為一類傳染病。實際中，常檢測雞群新城疫抗體水平了解雞群的健康狀況，從而判斷接種疫苗之后機體的保護力。紅細胞血凝抑制試驗（HI） 可簡單、快速檢測出新城疫的免疫狀態，多種因素影響檢疫結果的準確性，常見影響因素有以下幾種。

1 試驗材料

1.1 抗原

抗原是影響新城疫檢測結果的主要因素之一，抗原不新鮮或過期時會使紅細胞的凝集能力下降，所以，檢測雞群抗體水平時要用新鮮抗原。

1.2 紅細胞懸液

在HI 試驗中常使用1%的紅細胞懸液，一定要配制準確，否則會影響檢測結果。如果紅細胞懸液的濃度較大，測出的HI值相對較小；如果紅細胞懸液的濃度較小，測出的HI 值相對較大[1]。用5ml 一次性采血器抽取0.5ml 抗凝劑，在翅靜脈采血2.5ml 血液，兩者混合后注入離心管中進行離心，用移液器將離心管中的上清液和白細胞棄去，向沉淀的紅細胞泥中加入PBS 液反復吹打洗滌，再次離心，重復上述操作3 次，最后準確制備好1%的紅細胞懸液。在吸取紅細胞泥配制紅細胞懸液時，紅細胞泥不能過多，否則會使紅細胞液濃度變大，影響檢測結果。

1.3 被檢血清

正常的動物血清清亮、淡黃色，無異味。如果被檢血清陳舊、溶血或變質會影響檢測結果，所以操作每批樣品時都應用生理鹽水和標準陽性血清、標準陰性血清對照，以防判定結果出現偏差。

2 儀器的清潔及正確使用

2.1 反應板

HI 抗體檢測時，96 孔V 型反應板底部應干凈、清潔，沒有沉淀物。首先用1%的鹽酸溶液浸泡，再用1%的火堿溶液浸泡，接下來用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水浸泡烘干方可使用。從浸泡到烘干整個過程需24h 以上。

2.2 移液器

在HI 試驗過程中，移液器使用不當會使移液量不準確，發生移液量不足或排出不夠，造成檢測結果的誤差。所以在移液前要認真挑選吸頭，選擇移液器與吸頭安裝緊密、沒有變形的吸頭。并且在液體中不斷吸排，選擇吸頭內不殘留液體者為佳。移液器吸取液體時應做到“慢吸快打”，即在吸液時要慢而準，排出液體時對準后排出速度快，這樣可保證打入的液體量一致，避免排出后吸頭內殘留有液體，影響結果。同時移液器吸液時應垂直吸液，吸頭尖端離液面約3mm，吸液時按到第一檔，慢慢放開按鈕；放液時快速按下第一檔、第二檔，排出液體。

2.3 離心機

血清離心時，先將離心機放置在平穩處，打開電源，調節好轉速和離心時間，再將裝有血液的離心管放入。要求離心管內的液體不能太滿，離心管對稱放入并保持平衡。離心時要控制離心時間和離心速度，一般轉速為2000～3000/min，離心時間為5～10min/次[2]。

3 環境溫度

血凝抑制試驗反應的最佳溫度是25℃。

4 結果判定時間

反應時間結束后立即將96 孔反應板豎起讀取結果，并迅速記下結果。一般來說，陽性對照、陰性對照成立，紅細胞對照孔完全沉淀的前后5min 內判定試驗結果較好。

總之，在新城疫抗體水平檢測過程中，需要嚴格按照規定進行操作，從使用器具的清洗、試劑配制到整個操作過程都要認真、細心，做到一絲不茍，避免干擾，不斷總結經驗，發現問題及時改正，才能保證試驗結果的準確無誤，更好地指導生產實際。