鮑曼不動桿菌三價抗原融合蛋白的制備及其免疫原性研究

董瑤 呂琳曦 關(guān)麗娜 王朝莉 馮莉 謝勇恩

川北醫(yī)學(xué)院免疫與分子生物學(xué)研究所（四川南充637000）

鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii）是不動桿菌種屬中一種常見的條件致病菌。它能引起多部位感染，如肺部、尿路感染及皮膚、傷口等部位的感染等［1］，對免疫功能低下以及使用機(jī)械通氣、氣管插管、尿路插管等輔助治療手段的患者威脅較大，特別是居住在ICU中的重癥患者［2］。由于鮑曼不動桿菌能在非生物表面形成生物膜和抗干燥的能力［3］，以及能侵襲人上皮細(xì)胞［4］，使得它能在環(huán)境中長期生存。近年來，鮑曼不動桿菌多重耐藥性菌株感染日漸增多，使其有效防治面臨巨大挑戰(zhàn)［5-6］。因此，亟需尋找強(qiáng)有力的綜合性防治措施。疫苗接種是控制病原微生物感染的一種有效手段，鮑曼不動桿菌候選疫苗研究也成為國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)之一［7-9］。

本研究通過分子克隆技術(shù)將鮑曼不動桿菌三種抗原基因，即smpA基因、omp22基因及nlpA基因5′端384 bp片段進(jìn)行融合獲得融合基因，將其克隆到質(zhì)粒載體pColdI中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pColdI?SON，并將表達(dá)純化的重組蛋白作為抗原免疫小鼠，檢測該重組融合蛋白的免疫原性，為進(jìn)一步探討其免疫保護(hù)性等研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物、菌株和質(zhì)粒Balb/c雌性小鼠購買于斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，鮑曼不動桿菌ATCC19606由本實(shí)驗(yàn)室保存，大腸桿菌E.coli BL21菌株及質(zhì)粒載體pColdI購自Takara公司。

1.1.2 主要試劑PrimerStar Max試劑盒購自Takara公司，質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒、DNA膠回收試劑盒、Bradford蛋白定量檢測試劑、限制性內(nèi)……