靈芝多糖預防及抑制腫瘤機制研究進展

譚禮浩

摘 要：靈芝多糖是靈芝提取物中最關鍵的藥效成分之一，具有免疫調節、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、抗炎、抗菌、抗糖尿病及其并發癥等藥理作用。在藥用資源和功能食品添加物方面具有很大的開發利用價值。本文將從動物、臨床兩方面靈芝多糖的抗腫瘤功效進行闡述，并從分子層面對靈芝多糖抗腫瘤功效機制進展進行介紹。

關鍵詞：靈芝多糖;免疫;抗腫瘤

靈芝（Ganoderma lucidum）屬于真菌界、真菌門、擔子菌亞門層菌綱、非褶菌目、靈芝科、靈芝屬真菌。作為一種藥食兩用資源，靈芝在東方國家，如中國，韓國，日本使用已經有兩千多年的歷史。靈芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides，GLP）由雜多糖、葡萄糖和肽多糖等組成的混合物，與氨基酸、三萜、甾醇、生物堿、核苷一樣，為中藥靈芝的主要活性成分之一。其藥理作用廣泛，具有活血化瘀、抗輻射、免疫調節、抗衰老、抗腫瘤等作用，其中，靈芝多糖的抗腫瘤作用尤其引人關注。硏究發現，靈芝多糖對肝癌、肺癌、黑色素瘤、宮頸癌、卵巢癌、胃癌、結腸癌及白血病等腫瘤疾病具有廣泛的抑制作用，并且對正常體細胞無毒或低毒，受到了國內外醫學界的關注[2]。

1 靈芝多糖的抗腫瘤功效

1.1動物模型實驗

目前，小鼠模型為靈芝多糖抗腫瘤實驗的主要實施對象，移植惡性腫瘤細胞進小鼠體內并繁殖;再利用靈芝多糖或靈芝提取物注射進小鼠體內，或對小鼠進行灌胃;數周后觀察小鼠體內腫瘤變化情況，以及巨噬細胞、T、B淋巴細胞，NK細胞，DC細胞等細胞因子的活性、增殖變化情況。

高凌等采用小鼠抗移植性腫瘤實驗方法，分別以150mg/kg、300 mg/kg、和600 mg/kg劑量靈芝孢子多糖連續12天灌胃給藥，結果發現，靈芝孢子多糖對小鼠移植性肝癌Heps的抑瘤率為53.77%-65.25%;連續8天灌胃給藥，對小鼠移植性肉瘤S180的抑瘤率為50.39%-55.04%;皆呈良好的抑瘤作用。

Hikino H[1]等在小鼠的足趾和腋皮下接種了Lewi肺癌和結腸癌，灌胃靈芝多糖一周后，發現 Lewi 肺癌的抑制率高達 59.13%，結腸癌的抑制率最高為49.14%，同時此靈芝多糖還增強了小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬殺傷能力，強化機體免疫力，抑制腫瘤的生長。

Chen YouGuo[2]等通過建立卵巢癌小鼠模型，設置對照組、模型組和多糖處理組，每組8支。利用靈芝多糖對小鼠進行喂養，實驗結束后測定大鼠血清抗氧化酶含量。結果表明，靈芝多糖顯著降低了MDA的產量，和提高了血清抗氧化酶活性，小鼠免疫力能得到提升，表明靈芝多糖可能對卵巢癌治療有益。

根據各國學者的研究發現，靈芝多糖能顯著提升動物模型免疫水平，抑制腫瘤生長（S180 肉瘤、Lewis肺癌、肝癌Heps、宮頸癌U-14、膀胱癌T24、結腸癌、卵巢癌、惡性腦膠質瘤等），延長生存期，并且在常規劑量內使用，對體內正常細胞沒有細胞毒性。

1.2 臨床研究

許多臨床研究均證明，靈芝制劑與化療或放療合用時，對一些腫瘤如胃癌、食管癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、大腸癌、前列腺癌和子宮癌等有較好的輔助治療效果。能增患者細胞免疫功能、減少常規治療的不良反應、提升生存質量。

焉本魁等報道，運用老君仙靈芝口服液配合化療治療中晚期非小細胞性肺癌， 隨機分成治療組（35例）和對照組（21例），有效率分別為65 .71 %和42 .85%（P <0.01）。觀察結果表明老君仙靈芝口服液能夠減輕化療毒副作用，提高化療治療效果，改善腫瘤患者生活質量。能減少化療對骨髓造血功能的抑制，使化療前后白細胞和血小板無明顯減少，提高腫瘤患者被抑制的細胞免疫功能，對抑制腫瘤的發展產生積極作用。

林能俤等將經病理學、細胞學和CT檢查證實的114例癌癥（胃癌、食管癌、肺癌、肝癌、宮頸癌、結腸癌和膀胱癌）患者隨機分為化療+靈芝組（66例）和單純化療組（48例）進行治療前后比較，觀察靈芝提取物配合化療治療癌癥的療效。治療組：從化療開始及化療后服靈芝提取物膠囊，每次服4粒，每日4次，40 d為1療程。治療前、后;化療+靈芝組NK 細胞（自然殺傷細胞）活性分別為51.24±7.90和48.10±7.90（P>0.05）;單純化療組分別為51.40±6.62和44.43±7.19（P<0.05）;化療+靈芝組治療前后CD3，CD4，CD8 細胞亞型（%）無顯著改變，但單純化療組治療后CD3，CD4，CD8 細胞亞群百分率明顯降低（P<0.05）。化療+靈芝組患者的中醫臨床癥狀、生活質量亦獲改善。結果表明，靈芝提取物膠囊配合化療可明顯改善癌癥患者的細胞免疫功能，降低腫瘤治療給身體帶來的副作用。

黃建明等[4]報道，26例非小細胞肺癌（鱗癌、腺癌）患者，14 例接受CD3AK細胞治療（A組）;12例接受CD3AK細胞治療同時服用靈芝合劑（B組）（靈芝合劑以靈芝、黃芪、黨參為主組方，每日1劑，水煎服），患者在治療前及治療1個月后采用放射免疫分析法測定癌胚抗原。結果顯示，兩組患者的“復發”時間有所不同，A組為7.82±3.59月，而B組為3.26±5.5月，差異有顯著意義（P<0.01）。B組的平均生存時間為23.5±14.39個月，A 組為15.75±8.30個月，差異有顯著意義（P<0.05）。可見靈芝合劑與CD3AK 細胞合用，可增強CD3AK 細胞對肺癌的臨床療效。

2 靈芝多糖抗腫瘤機制

2.1靈芝多糖抗腫瘤細胞機制研究概況

通過研究發現，靈芝多糖增強主要通過以下幾種不同的途徑來強化機體的免疫系統以達到抗腫瘤目的[5]：

（1）活化巨噬細胞，促進T淋巴細胞（TH細胞）轉化為活性TC細胞，增加B淋巴細胞和自然殺傷（NK）細胞的數量與活性;促進IL-1、TNF-α、IL-2等細胞因子的分泌，提高機體的免疫監視功能，從而減少腫瘤的發生;

（2）激活網狀內皮系統和補體系統，誘生各種免疫因子，如IFN（干擾素）、TNF（腫瘤壞死因子）等實現殺滅腫瘤細胞作用;

（3）調節機體神經-內分泌-免疫系統網絡;

（4）促進細胞中核糖核酸（RNA）、脫氧核糖核酸（DNA）以及蛋白質的合成，增加細胞內環核苷酸（cGMP、cAMP）的水平。

（5）活化DC細胞，啟動樹突狀細胞的免疫反應，一方面DC細胞誘導T淋巴細胞活化;另一方面DC接受已活化T淋巴細胞反饋回來的活化信號如CD40L 而活化，表達共刺激分子并分泌其他活化因子如IL-12，誘導Th1 型應答的生成;DC作為激發T淋巴細胞免疫反應的重要輔助細胞，在初次抗體反應、混合淋巴細胞培養、促有絲分裂反應及抗腫瘤免疫應答中均具有重要作用。

2.2 靈芝多糖抗腫瘤分子機制研究概況

2.2.1 TLR4（TOLL樣受體）是靈芝多糖激活巨噬細胞的最重要受體

作者運用 Western-blotting 法測定了各組荷瘤模型小鼠TLR4、NF-κB、IκBα以及pp38 等蛋白的表達情況[6-7]。結果顯示，各組荷瘤小鼠中，靈芝多糖組腹腔巨噬細胞的膜蛋白TLR4 表達顯著增加，核蛋白NF-κB表達水平也呈劑量依賴性升高;而細胞質中IκBα的蛋白表達量逐漸降低，并且磷酸化蛋白pp38表達也顯著增強。實驗結果提示靈芝多糖通過作用于腹腔巨噬細胞膜上的TLR4受體，將信號傳遞進入細胞，然后激活NF-κB和p38 MAPK信號通路，促進TNF-α的分泌，強化機體免疫力，間接地發揮抗腫瘤的作用。

2.2.2 靈芝多糖可以通過激活cAMP/PKA信號途徑，下調DG-PKC信號通路來誘導并促進腫瘤細胞凋亡

作者通過流式細胞術檢測了各組荷瘤模型小鼠的腫瘤細胞的凋亡程度，測定結果顯示靈芝多糖能顯著地誘導荷瘤小鼠腫瘤細胞的凋亡。通過ELISA活性試劑盒檢測發現靈芝多糖能顯著提高荷瘤小鼠腫瘤細胞中的cAMP、PKA、AC活性，下調DG、cGMP、PKC的活性;Western Blotting法檢測PKA和PKC蛋白的表達[8]，結果顯示靈芝多糖顯著地促進了PKA蛋白的表達，下調了PKC的蛋白表達量。實驗結果提示靈芝多糖可以通過激活cAMP/PKA信號途徑，下調DG-PKC信號通路來誘導并促進腫瘤細胞凋亡，從而抑制抗腫瘤的生長。

2.2.3靈芝多糖能夠通過激活線粒體凋亡通路，實現誘導腫瘤細胞凋亡的作用

采用流式細胞術觀察各組荷瘤小鼠腫瘤細胞的線粒體膜電位變化和ROS的產生，發現 靈芝多糖能有效地促進線粒體膜電位的降低和ROS的產生，Western Blotting檢測細胞色素 C、凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2和p53的表達，結果顯示：靈芝多糖顯著地提高了促凋亡蛋白Bax和p53的表達水平，減少了抑制凋亡蛋白Bcl-2表達量，同時還促進了線粒體中細胞色素C釋放到細胞質中。通過檢測Caspase-9， -3的活性發現，靈芝多糖有效地活化了Caspase-9， -3。實驗提示靈芝多糖通過激活線粒體凋亡通路，實現誘導腫瘤細胞凋亡的作用，從而發揮抗腫瘤活性[9-10]。

3 展望

靈芝多糖具有廣泛的功效，特別是其抗腫瘤作用近年來得到國內外學者的廣泛關注。隨著人們對靈芝多糖生物活性評價的不斷深入，其作用機制將更加清晰，未來靈芝多糖在預防及抑制腫瘤方面將會有更廣泛的應用。

參考文獻：

[1] 張群豪，於東暉，林志彬. 用血清藥理學方法研究靈芝浸膏GLE的抑瘤機制[J]. 北京醫科大學學報. 2000， 32：210-213

[2] 江艷等， 靈芝孢子粉多糖Lzps-1的化學研究及其總多糖的抗腫瘤活性. 藥學學報， 2005（04）： 第347-350頁.

[3] 張新等， 靈芝片對肺癌的臨床療效觀察. 中成藥， 2000（07）： 第28-30頁.

[4] 林能俤等， 靈芝提取物配合化療治療癌癥66例分析. 實用中醫內科雜志， 2004（05）： 第457-458頁.

[5] 黃建明等， 靈芝合劑及CD_3AK細胞對肺癌的臨床療效. 現代中西醫結合雜志， 2001（08）： 第704-705頁.

[6] 田作明等， 靈芝及其相關制劑對癌癥康復作用的調查分析. 長春中醫學院學報， 2004（02）： 第34-52頁.

[7] 林志彬， 靈芝抗腫瘤活性和免疫調節作用的研究進展. 北京大學學報（醫學版）， 2002（05）： 第493-498頁.

[8] 許金霞與趙魯杭， 多糖對細胞信號轉導途徑影響研究進展. 中獸醫醫藥雜志， 2009. 28（03）： 第21-24頁.

[9] 余強， 黑靈芝多糖的免疫調節活性及其作用機制， 2014， 南昌大學. 第 161頁.

[10] 張莘莘， 黑靈芝多糖的抗腫瘤活性及其分子機制初探， 2014， 南昌大學. 第 162頁.