揚州鵝關節痛風病例的診斷及病原鑒定

岳 穩 張 瑞 黃 瑜 傅光華＊

(1.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所 福州 350013；2.龍巖學院 福建龍巖 364012)

痛風（Gout）是由于家禽體內蛋白質代謝障礙造成血液中尿酸增多，最終形成高尿酸血癥，蓄積的尿酸以鈉鹽形式在內臟、關節、軟組織、軟骨、系膜等處沉積下來， 在臟器表面或關節腔形成石灰樣白色塵屑狀物質，該病主要見于雞、火雞、水禽和鴿[1]。 家禽痛風發生的原因尚不完全清楚，臨床上，當飼料中核蛋白和嘌呤堿的蛋白質含量， 日糧中鈣、 鎂含量過高，或長期缺乏維生素A 等，或重金屬、化學毒物、霉菌毒素、藥物濫用等因素引起的腎臟功能損傷等，均可誘發家禽發生痛風。 另外，一些病原微生物，如沙門氏菌等感染引起腎臟機能損傷， 造成尿酸鹽排泄受阻，也可引起痛風。 2017 年以來，我國江蘇、山東、安徽、河南及廣東等地雛鵝群陸續發生高度致死性痛風，該病可感染3 日齡以內不同品種的雛鵝，以內臟、胸腿部肌肉及關節沉積大量尿酸鹽為特征，感染鵝群病死率10%～40%，給養鵝業造成巨大的經濟損失[2-5]。

2019 年 5 月， 江蘇省揚州市某鵝場飼養的1 000 羽20 日齡揚州大三花鵝發病，發病雛鵝出現精神沉郁、食欲減退、腿腳癱軟、運動遲緩、喜臥。 隨著病程持續，雛鵝出現頻繁腹瀉，糞便呈水樣白色或黃綠色稀糞，體況消瘦。在出現臨床癥狀1～2 d 后即死亡，每天最多死亡達30 羽，在發病7 d 內累計死亡超過17%。 經臨床診斷和實驗室病原檢測，確診為鵝星狀病毒感染， 并對樣品進行了病原分離鑒定，為預防和控制該病的流行提供參考依據，現報告如下。

1 臨床診斷

2019 年5 月，福建省農業科學院畜牧獸醫研究所接診一例來自江蘇省揚州市某鵝場送檢的揚州大三花鵝病例，應養殖戶要求，對該病例進行實驗室確診。 病死鵝整體消瘦、羽毛稀疏，臨床剖檢可見雛鵝肝臟、腎臟腫大出血，腸壁稀薄，內含水樣糞便。雛鵝雙側關節明顯腫脹， 關節囊內可見白色黏稠的尿酸鹽沉著，滑液含有大量由尿酸和尿酸鈣形成的結晶，關節面及關節軟骨組織出現輕微潰爛、 壞死 （見圖1-圖 2）。

圖1 病死雛鵝臨床癥狀

2 實驗室病原微生物檢測

圖2 關節囊內出現尿酸鹽沉積

2.1 臨床樣品的處理 無菌采集發病雛鵝的肝臟和腎臟， 一部分用于細菌分離鑒定， 另一部分采組織加入含抗生素 （青霉素 1 000 IU/mL、 鏈霉素1 000 ug/mL）的PBS 緩沖液，研磨、制備成20%混懸液用于病毒檢測。

2.2 臨床樣品的細菌分離及病毒 （RT-）PCR 檢測將采集的病死鵝組織樣品， 分別取樣劃線接種血瓊脂平板，進行細菌分離培養。以病毒DNA/RNA 抽提試劑盒，按照產品說明書提取樣品中的核酸，分別進行禽流感病毒、小鵝瘟病毒、鵝禽1 型副黏病毒、鵝星狀病毒和鵝圓環病毒等檢測。 核酸檢測擴增產物經1%瓊脂糖凝膠進行電泳。

結果表明，采集的樣品細菌分離陰性，病毒核酸檢測僅鵝星狀病毒呈陽性，其余病原均呈陰性（見圖3）。擴增片段送生物試劑公司進行序列測序，測序結果表明獲得的擴增片段序列與GenBank 數據庫中的SDPY 株及JSHA 株等鵝星狀病毒分離株核苷酸序列同源性均在99.5%以上。

圖3 樣品核酸擴增產物電泳圖

3 病毒的分離鑒定

將制備的組織混懸液離心，取上清，經尿囊膜途徑接種5 枚10 日齡鵝胚，每枚接種0.2 mL。 之后于37 ℃恒溫培養，連續觀察7 d。無菌收集致死鵝胚尿囊液，并以鴨胚連續傳代3 次，對所收集尿囊液測定血凝活性并再次檢測。 結果顯示，鵝胚接種后60 h，第1 代即出現死亡，尿囊液不能凝集雞紅細胞、鴨紅細胞和鵝紅細胞，RT-PCR 檢測結果顯示，收獲的鵝胚尿囊液僅鵝星狀病毒檢測陽性。

4 討 論

2017 年以來，我國部分地區飼養的雛鵝陸續大范圍出現痛風病例。 各品種鵝（如長樂灰鵝、揚州白鵝、朗德鵝、皖西白鵝等）均有發生[2-3]。 發生日齡見于30 日齡內，其中5～20 日齡雛鵝多發。 一年四季均可發生，以冬春季節多發，病死率在10%～40%，最高可達60%[2-4]。 雛鵝多表現為運動遲緩、厭食、衰弱和腹瀉，部分雛鵝出現跛行，腿、翅關節明顯腫脹。剖檢病死鵝在肝臟、心臟、脾臟、腎臟及輸尿管等內臟，腸系膜及氣囊等處可見不同程度的尿酸鹽沉積，關節腫脹的病例則可見關節囊、 關節軟骨處有石灰樣白色粉樣物質覆蓋[4-5]，經實驗室病原學檢查及動物回歸試驗證實，該病是由鵝星狀病毒感染引起，這與家禽食用大量高蛋白飼料或磺胺類藥物過量使用等引發的痛風病例十分類似[6]。 目前，鵝星狀病毒感染引起的雛鵝痛風的發病機制尚不清楚， 鑒于該病的廣泛流行態勢和嚴重危害性， 需要深入開展病原致病機制研究，為該病的有效防控提供技術支撐。

目前該病尚無特別有效的治療方法。 在飼養管理上要注意控制富含核蛋白和嘌呤堿的動物性飼料飼喂量，給予充足的飲水，供給富含維生素A 或胡蘿卜素的飼料。 不要長期或過量使用對腎功能影響大的抗細菌藥物等。臨床發病時，可針對具體情況采取切實可行的措施，往往可收到良好的效果。鵝群出現痛風時，可在飲水中添加腎腫解毒藥物，飲水3～5 d，能緩解癥狀，同時添加5%葡萄糖會對治療效果起到良好的促進作用。