TCT檢查聯合HPVE6/E7mRNA檢測對宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的診療價值*

楊 艷

天津市濱海新區大港醫院病理科 300270

宮頸癌是女性生殖道最常見的惡性腫瘤，全球每年都有大量的新發宮頸癌病例和死亡病例。近年來世界范圍內發病率和死亡率有明顯下降趨勢，與健康宣教、宮頸癌疫苗接種和宮頸癌篩查有關。大量的流行病學調查和實驗室數據表明，經性傳播的人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染是子宮頸癌致病的主要因素。液基細胞學檢查是目前國際上較先進的一種宮頸細胞學檢查技術，在臨床上已得到廣泛應用。但是有數據顯示液基細胞學檢查也只能發現約51%的宮頸病變[1]。近年來，HPVE6/E7mRNA(以下簡稱E6/E7)檢測作為一種新興的檢測逐漸被應用。HPVE6/E7中的E6/E7是癌基因片段，是導致宮頸細胞癌變的關鍵。有研究表明，HPVE6E7癌基因組的轉錄子mRNA檢測可作為宮頸癌風險評估的有效指標，其診斷價值優于HPVDNA的分型檢測[2-3]。TCT與E6/E7聯合應用可以大大提高宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的檢出率，達到早期預防宮頸癌的目的。本文就490例同時進行TCT與E6/E7檢測及宮頸組織學患者的臨床資料進行回顧性分析，研究TCT與E6/E7聯合應用對宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的診療價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年11月—2015年9月在我院婦科門診同時行TCT檢查+E6E7檢測的490例患者，年齡18～70歲，中位年齡47.23歲，若有任意一項檢查結果陽性均行陰道鏡下宮頸多點活檢送病理檢查，與組織學病理結果一并分析。490例患者均排除宮頸腫瘤性疾病及子宮切除史。

1.2 方法

1.2.1 TCT檢查：取材時間在非月經期，取材72h內未進行陰道用藥或檢查。用取材刷在宮頸移行帶旋轉3周，刷取表面黏液及脫落細胞，存放于細胞保存液中，通過離心機處理后，制成薄層細胞涂片。診斷標準采用TBS系統，包括：無上皮內病變或惡性改變(NILM)、非典型鱗狀細胞(ASC,包括ASC-US和ASC-H)、低度鱗狀上皮內病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)、鱗狀細胞癌(SCC)等。

1.2.2 HPVE6E7檢測：利用特殊設計的針對E6/E7mRNA的探針組(涵蓋了13種高危HPV亞型)從患者液基細胞標本細胞裂解液中直接捕獲mRNA，通過3步雜交信號放大進行定量分析，冷光儀檢測獲得檢測結果。

1.2.3 組織學診斷：宮頸TCT、E6/E7有任意一項檢測結果為陽性的患者，即行陰道鏡下定點四象限及宮頸管活檢。取材后用10%的中性福爾馬林固定，之后經脫水包埋制成切片行HE染色。所有病理切片和細胞學涂片均由經驗豐富的中、高年資醫師閱片完成。診斷標準參照2014年世界衛生組織(WHO)分類標準執行[4]。組織學診斷分為：慢性炎癥、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及鱗狀細胞癌。

1.3 統計學方法 用SPSS17.0軟件分析數據，計數資料以率(%)表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TCT與組織學結果對比 490例患者中TCT(+)192例，其中ASC-US 119例，ASC-H 6例，LSIL 46例，HSIL 20例，SCC 1例，與組織學結果對比(表1和表3)，TCT細胞學的檢測陽性率分別為53.78%、66.67%、93.48%、100.00%、100.00%，表明與疾病的嚴重程度呈正相關，經統計學分析TCT的陽性率CIN組明顯高于炎癥組，差異具有統計學意義(χ2=14.005，P<0.05)。

表1 TCT檢測陽性與宮頸活檢結果對比

2.2 E6/E7與組織學結果對比 490例患者中E6/E7(+)408例，拷貝數在4 000以下為低危、4 000～10 000為中危，10 000以上為高危。其中低危301例，中危54例，高危53例，與組織學結果對比(表2和表3)E6E7的陽性率分別為63.12%、79.63%、84.91%，隨著風險度的增加陽性率逐漸增加，經統計學分析E6/E7的陽性率CIN組明顯高于炎癥組，差異具有統計學意義(χ2=7.11，P<0.05)。

表2 不同級別E6/E7陽性患者中的病理結果分析

2.3 TCT+E6/E7與組織學結果對比 同時做TCT和E6/E7的490例患者，其中TCT(+)E6/E7(-)82例，TCT(-)E6/E7(+)298例，TCT(+)E6/E7(+)110例，與組織學結果對比(表3)，高度病變發生率分別為18.29%、13.09%、38.18%，三組患者在高度病變發生率上差異有統計學意義(P<0.05)。

表3 TCT+E6E7與宮頸活檢結果對比

3 討論

宮頸癌是女性生殖道最常見的惡性腫瘤，嚴重威脅著女性的健康。宮頸癌早期癥狀不明顯，不易察覺，往往發現時已是晚期。但近年來世界范圍內發病率和死亡率有明顯下降趨勢，可能與早期發現并預防[5-6]以及宮頸癌疫苗接種有關。TCT是目前國際上較先進的一種宮頸細胞學檢查技術，在臨床上已得到廣泛應用。近年來HPVE6/E7成為了一種新型檢測方法逐漸被應用。細胞學檢測是形態學檢測，HPVE6/E7是病因學檢測。兩者各存在著優缺點，而兩者聯合應用可以最大限度彌補不足，提高宮頸病變的檢出率和準確率，從而有效地預防宮頸癌的發生。

TCT與傳統的宮頸刮片相比，制成的涂片薄厚均勻，背景干凈，提高了陽性率，減少了漏診率[7]。TCT檢查1999年在我國首次使用，該技術可一次性取宮頸材料，能檢查出宮頸癌細胞、宮頸不典型增生細胞，可去除無關成分，還能檢測出微生物感染，如：霉菌、滴蟲、病原體等，在鏡下形態學觀察非常清楚[8-9]。本研究中TCT細胞學對慢性炎癥、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌的檢測陽性率分別為53.78%、66.67%、93.48%、100.00%、100.00%，且與宮頸病變的嚴重程度呈正相關，陽性率也與宮頸病變的嚴重程度呈正相關。

HPVE6/E7mRNA是近年來的一項新興的檢測技術，E6/E7在宮頸組織中表達癌基因活性。HPVDNA的檢測對于30歲以下婦女的檢測意義不大，因為該年齡段婦女常有HPV感染且能自動清除，HPVDNA分型診斷的敏感性高，但特異性較低，已不能作為宮頸上皮內瘤變及宮頸癌檢測的常規方法[10]。故檢測HPVE6/E7mRNA比檢測病毒本身的存在更精準、直接。本研究中，E6E7的陽性率分別為63.12%、79.63%、84.91%，且隨著風險度的增加陽性率逐漸增加。HPVE6/E7mRNA可以作為一種高敏感性和特異性的宮頸癌篩查的新技術。TCT檢查和HPVE6/E7檢測均為臨床上常用的宮頸病變的篩查方法，但均存在不足之處。TCT受樣本采樣者和閱片者主觀因素的影響，HPVE6/E7受樣本脫落細胞的取樣量和宮頸病變大小因素的影響[11]。本研究中，490例TCT+E6/E7的檢測樣本，其中TCT(+)E6/E7(-)82例，TCT(-)E6/E7(+)298例，TCT(+)E6/E7(+)110例，與組織學結果對比，高度病變發生率分別為18.29%、13.09%、38.18%，研究數據表明，聯合TCT與E6/E7檢測可提高宮頸病變的檢出率和準確率，降低了僅進行TCT或E6E7檢測可能出現漏診和誤診的概率。

綜上所述，TCT檢查聯合HPVE6E7mRNA檢測是推薦的宮頸癌篩查的最佳方法，可最大限度地彌補相互的缺點和不足，能夠提高宮頸病變的檢出率和準確率，達到早期預防宮頸癌的目的，值得在臨床工作中推廣。