細胞蠟塊宮頸液基細胞P16在檢測宮頸腫瘤中的應用效果分析

徐有江

（吉林省白山市中心醫院，吉林 白山）

0 引言

宮頸癌為婦科臨床常見惡性腫瘤之一，在女性生殖系統惡性腫瘤中居于第二位，我國是宮頸癌發病大國，宮頸癌的發病率及死亡率占全球1/3，且呈逐年上升趨勢[1]。有大量臨床資料顯示[2]，P16蛋白在腫瘤發生和發展過程中呈現出表達現象，是腫瘤相關基因蛋白，目前臨床多數認為P16的抑癌作用相較于P53更加直接，若P16基因蛋白失調，則可導致細胞生長和擴張失去限制，最終向病變細胞轉化。多數研究一般認為[3]，P16蛋白在正常的宮頸組織中表達為陰性，而在CIN、浸潤癌當中均有表達，其陽性表達率及染色強度可隨著病變組織學分級的增加而逐漸升高，因此在臨床上被廣泛應用于宮頸組織活檢中，本次研究目的在于采用細胞蠟塊的方法，探究P16蛋白在宮頸腫瘤中的表達，現做如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2018年7月至2019年7月收治的宮頸病變患者 160例，患者年齡 28～62歲，平均（43.57±10.25）歲。納入標準：①所有病變均經病理證實；②所有患者均有性生活史。排除標準：①排除二次復查者；②排除宮頸錐切、子宮切除史者；③合并心肝腎等重要臟器嚴重器質性障礙者；④排除各類慢性消耗性疾病及資料不全者。

1.2 方法

①宮頸細胞學收集方式，采取Thinprep液基細胞檢測法（TCT），取專用頸管細胞刷，于宮頸外口和宮頸管旋轉4～5周，采集宮頸上皮脫落細胞，將細胞存放至裝有保存液的保存瓶中，采用TCT制片機進行制片，將細胞制成直徑為1 cm的細胞學涂片，取95%酒精固定，行巴氏染色。②細胞學診斷，閱片由經驗豐富的細胞學專職人員進行，采取TBS診斷分級系統進行分級。③P16免疫組化檢測，收集脫落細胞，進行常規離心沉淀、蛋白固定，使細胞成塊，再完成脫水、包埋等程序將其制作成片，以宮頸HELA細胞為陽性對照，采取P16抗體進行研究，切片染色的評估在光學顯微鏡下進行。在光鏡下，P16陽性物質存在細胞質或細胞核當中，若細胞質或細胞核著染成棕褐色或粉色為陽性。P16蛋白表達的判斷依據異型細胞著色與否及細胞著色數量進行，陽性判讀：一張切片當中，存在至少5個的異型細胞顯示細胞核有著色（異型細胞的表現主要為胞核增大，占據整個細胞體積的1/2以上；染色質表現異常，如染色質分布不均，呈顆粒狀或塊狀、胞核呈深染或淡染，胞核形狀不規整，有較大的凹陷或凸起，還可呈鋸齒狀；細胞聚集排列呈片狀或條索狀，形態與大小各異）。陰性判讀：一張切片中，無異型細胞著色或異型細胞數量少于5個者。

所有患者行P16檢查，同時仍按常規宮頸癌篩查步驟進行篩查，以進一步確診。

1.3 統計學分析

應用統計學軟件SPSS 18.0對資料進行分析處理，計數資料采用χ2檢驗，以（%）表示，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TBS分類

160例患者中，16例為 NILM、60例為 ASC-US、5例為ASC-H、42例為 LSIL、35例為 HSIL、2例為 SCC。

2.2 P16表達

P16在NILM中陽性率為0%、在ASC-US中陽性率為5.00%、ASC-H中陽性率為80.00%、在LSIL中陽性率為28.57%、在HSIL中陽性表達率為97.14%、在SCC中表達率為100.00%。P16在LSIL與HSIL中陽性表達率有統計學差異（P＜0.05），見表 1。

表1 P16在脫落細胞中的表達（n, %）

2.3 組織學與細胞學診斷對比

160例患者中，僅68例患者有組織活檢結果，液基細胞免疫組化檢測中，P16蛋白55例為陽性，組織學檢查結果有44例病變為CINⅡ級以上；P16蛋白13例為陰性，無CINⅡ以上病變。68例活檢結果中，組織學診斷為CINⅡ級以上而細胞學診斷為ASC-US者17例，其中P16蛋白可見陽性異型細胞1例；組織學診斷為CINⅡ級以上而細胞學診斷為LSIL者11例，P16蛋白染色可見陽性異型細胞6例；組織學診斷為CINⅡ級以上而細胞學診斷為ASC-H者5例，其中4例P16蛋白呈陽性染色，1例為陰性染色。組織學診斷CINⅡ級以上而細胞學診斷為HSIL者8例，7例可見P16蛋白有異型細胞染色。組織學診斷為CINⅡ級以上而細胞學診斷為SCC者2例，2例均可見P16蛋白陽性染色，詳見表2。

表2 組織學與細胞學診斷對比（n）

3 討論

P16基因定位于人類染色體9p21中，又稱為細胞周期素依賴性激酶，是此條染色體中首個被發現的抑癌基因，其可直接參與細胞周期的調控，多種人腫瘤細胞中都存在P16蛋白基因的突變、缺失以及甲基化，以此提示其與腫瘤發生和發展過程有緊密的相關性[4-5]。目前，P16蛋白與宮頸癌的臨床研究較多，有報道稱[6]，P16蛋白在非癌組織中表達較低，而在宮頸癌中的表達很高，其還表明了P16蛋白與宮頸癌的發生有相關性，并表示P16的表達動態隨著病變的加重而發生變化。由于P16作為宮頸癌檢測的生物學標志，雖尚難替代HPV病毒檢查，但由于其檢測方式簡單，操作難度小，費用不高，且仍可作為宮頸癌病變程度指標，輔助臨床診斷，為篩查與預后提供科學的依據，應用前景廣闊[7]。

本次研究將采用免疫組化檢測與細胞蠟塊的技術對宮頸液基細胞中P16蛋白的表達進行的探究，研究結果提示P16細胞陽性表達率隨病變級別的提升而增加，隨著病變嚴重程度的增加，P16的著色強度也在增加，研究上述結果中可以看出，P16的陽性表達率在HSIL與ASC-H中的表達率非常高，分別為97.14%、80.00%，證實了P16蛋白與癌前病變確有關聯，可作為宮頸癌及癌前病變的早期輔助診斷指標在臨床推廣。