整體浸提與分段浸提在無菌檢查中的比較

張桂銘

【摘要】目的 用直接接種法對醫療器械沖洗管進行無菌檢查，比較整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方式對檢測結果的影響。方法采用ISO 11737-2：2009標準方法，對試驗樣品進行無菌檢查試驗。

【關鍵詞】管腔醫療器械? 無菌? 方法? 比較

在科技飛速發展的今天，輔助治療人類疾病的醫療器械也層出不窮，醫學及生物學對于醫療器械尤其是無菌醫療器械的質量風險控制也日趨嚴格，本文就沖洗管，筆者對采用整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方法下的無菌檢查進行了比較。

一、材料與試劑

（一）培養基及試劑

氯化鈉（國藥集團化學試劑有限公司;批號：20151123），吐溫80（國藥集團化學試劑有限公司;批號：20160314），大豆酪蛋白消化物培養基SCDM（青島海博生物技術有限公司;批號：20180522），胰酪大豆胨瓊脂培養基TSA（北京陸橋技術股份有限公司;批號：180820），沙氏葡萄糖瓊脂培養基SDA（北京陸橋技術股份有限公司;批號：181127）

（二）陽性菌株

金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕：第5代;枯草芽孢桿菌〔ATCC 6633〕：第5代;白色念珠菌〔ATCC 10 231〕：第5代;黑曲霉〔ATCC 16 404〕：第5代;來源自美國菌種保藏中心。

（三）試驗樣品

某公司生產的沖洗管（同一批號;規格：4米;滅菌方式：環氧乙烷）。

（四）其他材料

電子天平JM-A2003（余姚紀銘稱重校驗設備有限公司）;潔凈工作臺SW-CJ-2F（蘇州安泰空氣技術有限公司）;生物安全柜BHC-1300IIA2（阿爾泰實驗室設備有限公司）;生化培養箱SHP-150（上海精宏實驗設備有限公司）;生化培養箱SHP-450（上海精宏實驗設備有限公司）;立式壓力蒸汽滅菌器YXQ-LS-100SII（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）;移液器（Thermo Scientific，100-1000 ml，20-200 ml，10-100 ml）;滅菌吸頭（250、1000ml）;WHIRL-PAKR SAMPLE BAGS（B01447）。

二、方法與結果

（一）無菌試驗方法驗證

（1）標準菌株準備：取枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉傳代培養，制成小于100cfu/ml的菌懸液備用，用標準平板計數法進行微生物計數（cfu）;

（2）試驗樣品組：以無菌操作將試驗樣品（SIP=1）轉移到1000ml SCDM培養基中，接種標準菌株≤100cfu;試驗樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（3）陽性對照：取滅菌1000ml SCDM接種標準菌株≤100cfu;

（4）陰性對照：取滅菌產品（SIP=1） 以無菌操作轉移到1000ml SCDM培養基中;

（5）空白對照：取滅菌1000ml SCDM直接培養;

（6）培養條件：30±2℃培養≤5天;結果可接受標準：試驗樣品組可見微生物生長;陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;

（7）試驗結果：陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;兩種浸提方式下的試驗樣品組在規定培養時間內均可見微生物生長。在本試驗條件下，整件浸提和剪開分段浸提的試驗樣品中均未檢出影響微生物生長的釋出物，該試驗方法（整體浸提和剪開分段浸提）可以作為試驗樣品的常規無菌檢測方法。

（二）無菌檢查

（1）試驗樣品：無菌操作將試驗樣品沖洗管（SIP=1）轉移至1000ml SCDM培養基中，30±2℃培養14天;試驗樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（2）陰性對照：1000ml SCDM培養基同2.2.1培養;

（3）陽性對照：無菌操作在含有1件樣品（SIP=1）的SCDM里加金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕≤100cfu，30±2℃培養箱中培養≤3天;

（4）每天觀察是否有菌生長;

（5）結果：在本試驗條件下，陰性對照無菌生長，陽性對照在規定時間內有菌生長;整體浸提（SIP=1）的10件樣品中發現有2件陽性，剪開分段浸提（SIP=1）的10件樣品中發現有10件陽性。

三、討論

通過兩種方式（整體浸提和剪開分段浸提）對樣品進行無菌檢查的結果，我們可以看出剪開分段浸提的直接接種法無菌檢查試驗發現的陽性樣品明顯多于整體浸提的;我們已知用于檢測的試驗樣品是同一批號，且抽樣隨機，即用于兩種方式檢查的樣品應出現類似數量的陽性結果，于是我們比較了兩種浸提接種方式的區別。由于樣品沖洗管規格有4米長，在整體浸提無菌檢查時，其在無菌取樣袋中是繞成7-8圈的狀態，培養基不能浸入沖洗管的全部內腔，即有一部份內腔并沒有與培養基接觸，假如這些內腔有微生物，那就不能被檢測出來;而剪開分段浸提的方式利用無菌剪刀無菌操作將4米長的沖洗管剪成了20cm左右的片段，每一段管的內腔都更容易被培養基浸沒，實驗中此方式下的沖洗管樣品的表面和內腔均被培養基完全浸沒。相較于整體浸提，剪開分段浸提對沖洗管的可能存在微生物的檢出更全面，換言之，對沖洗管用整體浸提進行無菌檢查有假陰性的風險。

另一方面，從醫療器械的滅菌方式角度分析，沖洗管類的醫療器械一般采用環氧乙烷滅菌，已知環氧乙烷滅菌程序包括預熱、預濕、抽真空、通入汽化環氧乙烷達到預定濃度、維持滅菌時間、消除滅菌柜內環氧乙烷氣體、解析;就滅菌效果而言，越是有管腔的非實體醫療器械就越難達到符合要求的滅菌效果，因為對于將器械繞成7-8圈進行包裝的沖洗管樣品，其內腔比表面更難與環氧乙烷密切接觸，從而達到滅菌的效果，即在無菌屏障系統符合要求下，此類器械的內腔中有存活微生物的概率比其表面存在微生物的概率要大。

因此對于管腔類的醫療器械，尤其是含有較長管腔類的醫療器械，我們在做無菌檢查時，需無菌操作用剪開分段等方法使醫療器械的內管腔內都能浸入培養基，這樣才能更全面的檢測出試驗樣品表面和管腔中可能存在的微生物，避免假陰性的出現，減少醫療風險的發生。

參考文獻：

[1]Sterilization of Medical Devices - Microbiological Methods - Part 2： Tests of Sterility Performed in the Definition， Validation and Maintenance of a Sterilization Process （ISO 11737-2：2009）.

[2]醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學試驗方法 （GB/T 14233.2-2005）.