食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達變化及其臨床意義

王明，王亮，何翔 滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061001

食管癌是上消化道常見的惡性腫瘤之一，是全球第八大常見惡性腫瘤。食管癌早期通常無明顯癥狀，一旦出現(xiàn)吞咽困難癥狀就診時，多數(shù)患者病程已進入中晚期，病死率較高，預后較差，5年生存率僅15%～25%[1]。目前，食管癌主要采取以手術為主的綜合治療，但效果并不能令人滿意，部分患者即使經(jīng)積極治療仍可出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。細胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)是CDC25家族中的重要成員，其基因定位于人染色體20p13。CDC25B既具有酪氨酸激酶活性又具有絲氨酸激酶活性，能夠通過激活細胞周期蛋白依賴性激酶2，促進正常細胞的有絲分裂。近年研究發(fā)現(xiàn)，CDC25B基因是一種潛在的致癌基因，在多種腫瘤組織中表達上調(diào)，如皮膚鱗癌、子宮內(nèi)膜癌、非小細胞肺癌等，其表達上調(diào)可促進腫瘤生長和惡性轉(zhuǎn)化[3-4]。凋亡抑制蛋白PED/PEA-15基因定位于人染色體1q23.2，其基因編碼含有死亡效應域的小分子蛋白質(zhì)，具有蛋白激酶C內(nèi)源性底物的特殊分子結(jié)構(gòu)，對凋亡起負性調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在食管鱗癌、腎透明細胞癌組織中PED/PEA-15表達上調(diào)，其表達上調(diào)能夠抑制腫瘤細胞程序性死亡，促進腫瘤惡性進展[5-6]。但目前鮮見CDC25B、PED/PEA-15與食管癌關系的報道。2011年6月—2014年12月，本研究觀察了食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達變化，并探討二者表達與患者臨床病理特征和預后的關系。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期滄州市中心醫(yī)院收治的食管癌患者80例。納入標準：①經(jīng)術后病理學檢查明確食管癌診斷；②初診；③接受食管癌根治術或姑息性切除術；④入院前未接受放化療或免疫抑制劑治療。排除標準：①合并其他消化系統(tǒng)疾病者；②合并嚴重心肺功能障礙者；③合并免疫系統(tǒng)疾病者；④合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者。其中，男50例、女30例，年齡31～78歲；腫瘤直徑：≤5 cm 38例，>5 cm 42例；腫瘤部位：胸上段17例，胸中段41例，胸下段22例；腫瘤組織分化程度：高中分化49例，低分化31例；腫瘤臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期56例，Ⅲ期24例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。本研究符合《赫爾辛基宣言》，經(jīng)滄州市中心醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，患者或其家屬簽屬知情同意書。

1.2 CDC25B、PED/PEA-15表達檢測 取術中切除的食管癌組織及其癌旁組織(距腫瘤組織邊緣超過3 cm，并經(jīng)病理學檢查明確為正常食管組織)，中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。切片經(jīng)60 ℃烤片過夜，二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟兩遍，梯度乙醇水化，然后置于檸檬酸緩沖液中，微波爐加熱抗原修復，自然冷卻，3%雙氧水滅活內(nèi)源性過氧化物酶。5%山羊血清封閉1 h，滴加CDC25B、PED/PEA-15一抗(稀釋比均為1∶400)，37 ℃孵育2 h。次日加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗(稀釋比為1∶500)，室溫孵育2 h，DAB顯色，蘇木精染核，梯度乙醇脫水，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察。

所有切片由兩位病理科醫(yī)師盲法獨立閱片。CDC25B陽性染色定位于細胞核，呈棕黃色顆粒狀。PED/PEA-15陽性染色定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機選取5個高倍鏡視野(200×)，以染色強度評分和陽性細胞比例評分綜合判定CDC25B、PED/PEA-15陽性表達，二者乘積≥3為陽性表達[6]。染色強度評分標準：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例評分標準：無陽性細胞為0分，陽性細胞比例<25%為1分，陽性細胞比例25%～<50%為2分，陽性細胞比例≥50%為3分。

1.3 隨訪 患者出院后通過電話方式定期隨訪，每個月隨訪1次，隨訪截至2019年12月，共隨訪5年，終點事件為患者死亡或至隨訪截至日期。統(tǒng)計患者5年總體生存率。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman秩相關分析法。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌組織與癌旁正常組織CDC25B、PED/PEA-15表達比較 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達率分別為52.50%(42/80)、66.25%(53/80)，癌旁正常組織分別為1.25%(1/80)、8.75%(7/80)。食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達率均高于癌旁正常組織(χ2分別為53.461、57.427，P均<0.01)。

2.2 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達與患者臨床病理特征的關系 見表1。

表1 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達與患者臨床病理特征的關系

2.3 食管癌組織CDC25B表達與PED/PEA-15表達的關系 在食管癌組織CDC25B陽性表達者中，PED/PEA-15陽性表達35例份、陰性表達7例份；在食管癌組織CDC25B陰性表達者中，PED/PEA-15陽性表達18例份、陰性表達20例份。Spearman秩相關分析顯示，食管癌組織CDC25B表達與PED/PEA-15表達呈正相關關系(ρ=0.580，P<0.01)。

2.4 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達與患者預后的關系 至隨訪截至日期，共隨訪2～60個月，無失訪病例，隨訪期間死亡64例。

CDC25B陽性表達者與陰性表達者5年總體生存率分別為9.52%(4/42)、31.58%(12/38)，CDC25B陽性表達者5年總體生存率低于CDC25B陰性表達者(χ2=4.557，P<0.05)；PED/PEA-15陽性表達者與陰性表達者5年總體生存率分別為7.55%(4/53)、44.44%(12/27)，PED/PEA-15陽性表達者5年總體生存率低于PED/PEA-15陰性表達者(χ2=3.845，P<0.05)。

3 討論

食管癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，全球每年死亡約40萬例。據(jù)統(tǒng)計，我國食管癌發(fā)病和死亡負擔幾乎占到全球一半，并且其發(fā)病率還有不斷上升趨勢[7]。目前，食管癌主要采取以手術為主的綜合治療，但效果并不能令人滿意，部分患者即使經(jīng)積極治療仍可出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生與癌基因的過度激活和抑癌基因的失活有關，從而導致了細胞增殖與凋亡失衡[8]。因此，探索影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的驅(qū)動基因，對研發(fā)新的靶向治療藥物具有重要的臨床價值。

CDC25B是CDC25磷酸酶家族成員之一，是細胞周期蛋白依賴性激酶激活所必需的細胞周期調(diào)節(jié)劑，可參與個體發(fā)育、組織分化、組織再生等生物學過程。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤組織中存在CDC25B表達上調(diào)現(xiàn)象，其表達上調(diào)能夠促進腫瘤細胞過度增殖，從而導致腫瘤惡性進展。體外實驗亦證實，抑制CDC25B表達后，腫瘤細胞增殖明顯受到抑制[3]。因此，CDC25B有可能是惡性腫瘤潛在的治療靶點。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B陽性表達率高于癌旁正常組織。提示CDC25B可能參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展，但其具體作用機制尚不清楚。有研究報道，正常狀態(tài)下miR-152能夠結(jié)合CDC25B的3′非編碼區(qū)，降低CDC25B mRNA的穩(wěn)定性，抑制CDC25B表達；腫瘤發(fā)生時miR-152表達降低，CDC25B mRNA穩(wěn)定性增加，從而引起CDC25B表達上調(diào)[4]。此外，CDC25B磷酸酶的活性受其亞細胞定位調(diào)節(jié)，CDC25B在細胞核與細胞質(zhì)的穿梭過程中受14-3-3支架蛋白調(diào)節(jié)，腫瘤發(fā)生時14-3-3支架蛋白表達上調(diào)，能夠促進CDC25B進入細胞核，促進細胞周期進程[9]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B陽性表達與腫瘤臨床分期有關，提示CDC25B表達上調(diào)能夠促進食管癌惡性進展。細胞正常有絲分裂受CDK1/Cyclin B調(diào)節(jié)，而CDC25B作為磷酸酶去除抑制性磷酸基，能夠激活CDK1/Cyclin B，從而促進細胞有絲分裂，導致腫瘤細胞無限增殖，繼而使腫瘤臨床分期升高[10]。

PED/PEA-15是在哺乳動物中普遍表達的小分子蛋白質(zhì)，是調(diào)節(jié)多種細胞過程(如細胞增殖、凋亡)的關鍵多蛋白結(jié)合分子。PED/PEA-15能夠與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑中的細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1和2(ERK1/2)、Fas相關死亡域蛋白結(jié)合，參與調(diào)控細胞增殖和凋亡，維持細胞增殖與凋亡平衡。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤組織中PED/PEA-15表達上調(diào)，并具有抗凋亡和抗炎特征，有可能成為惡性腫瘤潛在的治療靶點[11-12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管癌組織PED/PEA-15陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，提示PED/PEA-15可能參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究報道，腫瘤組織miR-212表達下調(diào)，導致其無法結(jié)合到PED/PEA-15 mRNA的3′非編碼區(qū)，從而使PED/PEA-15表達上調(diào)，進而抑制腫瘤細胞凋亡[13]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，食管癌組織PED/PEA-15陽性表達與腫瘤臨床分期有關，表明PED/PEA-15表達上調(diào)可能促進食管癌惡性進展。研究表明，PEA-15與ERK1/2結(jié)合能夠阻斷其與ERK的質(zhì)膜結(jié)合，并防止成纖維細胞受體底物2α(FRS2α)的蘇氨酸磷酸化，這一作用延長了成纖維細胞生長因子誘導的FRS2α酪氨酸磷酸化，從而維持MEK和ERK的活化，促進了腫瘤細胞惡性增殖，繼而導致腫瘤臨床分期升高[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B表達與PED/PEA-15表達呈正相關關系，提示二者可能共同促進食管癌的發(fā)生、發(fā)展，其機制可能與這兩種蛋白均參與G蛋白偶聯(lián)受體信號轉(zhuǎn)導MAPK/ERK途徑有關[15]。本研究還發(fā)現(xiàn)，CDC25B、PED/PEA-15陽性表達者5年總體生存率均低于其陰性表達者，這表明CDC25B、PED/PEA-15表達變化與食管癌患者預后有關。有研究報道，CDC25B、PED/PEA-15表達升高可能會導致腫瘤患者預后不良[16]，本研究結(jié)果與其基本一致。

綜上所述，食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達升高，其表達變化與腫瘤臨床分期和患者預后有關。CDC25B、PED/PEA-15有可能成為食管癌早期診斷和靶向治療的生物標志物。