56例HIV抗體免疫印跡試驗不確定結果的隨訪分析

秦 攀，李 青，楊曉亮，邢 燕，余澤波

重慶醫科大學附屬第一醫院輸血科，重慶 400016

目前，艾滋病仍是全世界面臨的重要公共衛生問題。據2018年調查統計，全球約有3 790萬人感染艾滋病，其中新發感染者約170萬，全年約77萬人死于與艾滋病相關的疾病[1]。在艾滋病防治工作中，從早期的感染診斷、疾病進程的判斷，到之后的抗病毒療效監測，實驗室檢測都是不可或缺的一部分，主要包括人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體檢測、HIV核酸檢測、CD4+T淋巴細胞計數等。HIV抗體篩查檢測的方法包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、化學發光免疫分析(CIA)或免疫熒光試驗(IFA)、快速檢測(RT)及其他試驗[2]。HIV抗體確證試驗是HIV感染診斷的金標準[3]，目前常用的有免疫印跡試驗(WB)、條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)。由于HIV檢測力度的加大，出現HIV抗體檢測不確定結果的數量也逐年增加，給臨床手術和治療帶來一系列問題，重復檢測會給患者和家屬帶來較大的心理壓力，同時對人力及試劑也造成嚴重的浪費。本研究將2017-2018年本院HIV確證試驗結果不確定的患者特征及轉歸情況進行匯總分析，旨在為HIV檢測策略的制訂提供依據，幫助不確定結果的解釋及對陽性轉歸的預判，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年1月至2018年12月本院門診及住院患者中HIV抗體篩查試驗有反應，經重慶市渝中區疾病預防控制中心確證實驗室檢測后報告“HIV抗體不確定”者納入研究，共56例，其中男39例，女17例；年齡22～84歲；患者的科室分布見表1。

1.2方法

1.2.1篩查和確證試驗 所有送檢的患者標本均由兩種及以上的試劑進行抗體篩查試驗：ELISA采用北京科衛臨床診斷試劑有限公司生產的HIV抗原抗體診斷試劑盒，CIA采用深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司生產的HIV測定試劑盒，兩種試劑均為HIV抗原抗體篩查試劑；RT采用美艾利爾HIV1+2型抗體檢測試劑盒，為HIV抗體篩查試劑。確證試驗：WB采用MP生物醫學亞太私人有限公司生產的HIV1+2型抗體檢測試劑盒。以上所有試劑均經國家食品藥品監督管理總局注冊，在有效期內按照試劑說明書進行操作。使用的儀器包括Tecan sunrise酶標分析儀、匯松PW-960型洗板機、邁瑞全自動化學發光免疫分析儀CL-2000i型、邁瑞全自動化學發光免疫分析儀CL-6000i型、上海迅達XD-236型免疫蛋白印跡儀。

1.2.2WB結果的判定 HIV抗體確證試驗結果根據條帶并結合帶型進行判定。HIV抗體不確定結果的判定標準是出現HIV-1抗體特異帶(env 帶：gp160/gp120、gp41，gag 帶：p55、p24、p17，pol帶：p66、p51、p31)，但不足以判定陽性，隨訪期間如帶型沒有進展或呈陰性反應，則報告陰性；如出現陽性反應，則報告陽性；可視情況決定是否繼續隨訪。無 HIV 抗體特異帶出現，則判定為 HIV 抗體陰性，報告陰性；如符合HIV-1抗體陽性判定標準，則報告HIV-1抗體陽性。檢測結果參照《全國艾滋病檢測技術規范(2015年修訂版)》[2]和試劑說明書判定。

1.2.3質量控制 根據《全國艾滋病檢測技術規范》質量控制要求，進行室內質量控制和能力驗證計劃以保證檢測質量。室內質控設置試劑盒內部對照，并用第三方商品化質控品以Levey-Jennings質控圖和Westgard多規則控制程序監測檢測質量。實驗室每年通過國家衛生健康委員會臨床檢驗中心和重慶市艾滋病確證中心實驗室組織的能力驗證計劃。

1.3統計學處理 采用Excel2007軟件進行數據記錄。使用SPSS21.0軟件進行統計分析，百分率的比較采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1患者隨訪情況 隨訪完成和轉歸情況見表1。完成隨訪的占58.93%(33/56)，失訪占41.07%(23/56，其中死亡4例，未復核檢測19例)。完成隨訪者中，轉陽性的占84.85%(28/33)，轉陰性的占15.15%(5/33)；男性轉陽性者占63.64%(21/33)，女性轉陽性者占21.21%(7/33)，兩者比較差異有統計學意義(P=0.03)。

2.2患者標本的篩查試驗 采用ELISA、CIA、RT 3種方法中的兩種進行篩查試驗，見表2。兩種篩查試驗均有反應與僅一種篩查試驗有反應的患者轉陽率分別為92.59%(25/27)、50.00%(3/6)，兩者比較差異有統計學意義(P=0.031)。

表1 患者科室分布及隨訪情況

表2 患者標本的篩查試驗

2.3WB帶型分布及隨訪情況 共檢出9種WB帶型，gp160帶型所占比例最高，見表3。完成隨訪的患者標本中檢出了7種WB帶型，同樣是gp160帶型所占比例最高；帶型是1條帶的患者轉陽率為64.29%(9/14)，2條帶的患者轉陽率為100.00%(8/8)，3條帶的患者轉陽率100.00%(11/11)，三者比較差異有統計學意義(P=0.018)。共檢出6種條帶，條帶出現頻次共105次，gp160所占比例最高，見表4。完成隨訪的患者標本中檢出5種條帶，gp160檢出頻次所占比例最高；條帶間轉陽率比較，差異無統計學意義(P=0.107)。

表3 檢出帶型的分布及隨訪情況

表4 條帶檢出頻次的分布及隨訪情況

3 討 論

引起HIV抗體檢測不確定結果的因素較多，如HIV感染后的“窗口期”、抗體滴度低，常造成漏檢或出現不確定結果；艾滋病終末期時，機體免疫系統被破壞，免疫力降低，抗體水平下降等因素也會導致抗體檢測不確定結果的反復出現；其他非特異性反應，如其他病原微生物感染、自身免疫性疾病，某些惡性腫瘤等均可引起HIV抗體不確定結果出現[4-6]。根據《全國艾滋病檢測技術規范》的相關規定，建議對“HIV抗體不確定”者進行HIV核酸檢測或2～4周后隨訪。本科室按照規定進行了隨訪，但患者流動性大，區縣及外地人口居多，由于隨訪檢測需要一定周期，且本科室目前尚未開展HIV核酸檢測，因此此類患者在初次報告“HIV抗體不確定”后大多轉到當地疾控中心或艾滋病定點醫院進行后續檢測，隨訪依從性較差，跟蹤監測數據獲得難度較大，故失訪率較高(41.07%)，此為本次研究的不足之處。在未來的工作中，將會針對院內“HIV抗體不確定”患者設計更加合理有效的醫學隨訪方案，縮短隨訪時間，優化檢測策略，降低失訪率，做到及時診斷，降低感染傳播的風險。

本研究中的患者分布于19個科室，其中轉陽患者例數居前三位的科室為感染科、消化內科、神經內科，另外皮膚科、呼吸科、眼科、耳鼻喉科、精神科等也均有分布，與HIV感染的臨床表現多樣性相符合[7]。潛在的HIV感染者可能會到不同的科室就診，為減少對HIV感染者的漏診，應加強醫院各科室就診者的主動檢測。完成隨訪的33例患者中有5例轉為陰性，條帶均只有1條；其中3例的帶型為gp160，分別來自于血液科、腫瘤科、疼痛科；1例帶型為p24，來源于眼科；1例為p17，來源于感染科；考慮可能與患者基礎疾病(血液腫瘤、細菌或病毒感染)引起的非特異性反應相關。在完成隨訪者中，男性轉陽性者的比例高于女性，與相關報道一致[8-11]，需加強規范男性患者尋找臨時性伴侶行為。

隨訪結果顯示，兩種篩查方法均有反應的患者轉陽率明顯高于兩種篩查方法中僅一種有反應的患者，且條帶數量與患者轉陽率呈正相關，2條帶及以上的帶型患者全部轉陽性，提示應高度關注此類患者。本研究中的條帶基因組以env、gag為主，且env轉陽率較gag高，提示env在HIV感染中意義更大[12]。1條帶的帶型并不是全部轉陽，1例p17帶型的患者隨訪結果為陰性，包括gp160、p24帶型的患者均有轉陰的情況，此時應警惕干擾因素，結合患者臨床資料、流行病學史，加做HIV核酸檢測，綜合判斷[13-16]。

綜上所述，引起HIV抗體檢測不確定結果的因素較多，兩種篩查方法均有反應，WB檢測結果為2條帶以上的情況均提示有極大感染風險，應高度重視，密切隨訪；只有一種篩查試驗有反應或WB檢測結果為1條帶的情況也不容忽視，應結合患者的流行病學資料，積極借助其他的檢測方法，縮短檢測窗口期，盡早明確診斷。