兩種全血細胞分析儀研究參數(shù)在冷凝集標本處理中的應(yīng)用價值*

王 鑫 李建英 陳 倩 王 斐 孫勝利 毛鐳篥 吳 衛(wèi)*

血液分析儀是臨床實驗室最為常用的儀器之一，很多實驗室備有多種血液分析儀，其優(yōu)勢在于檢測快速、能夠提供多種參數(shù)，為臨床提供準確及時的診療依據(jù)，而分析其檢測質(zhì)量直接關(guān)系到臨床的診斷與治療。在日常檢驗工作中冷凝集標本會引起紅系參數(shù)的異常，目前在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，有部分血液分析儀上的研究參數(shù)在冷凝集標本的處理上有一定的應(yīng)用價值。為此，本研究將兩種血液分析儀的研究參數(shù)應(yīng)用到冷凝集標本的處理，并與傳統(tǒng)冷凝集標本處理方法37 ℃水浴法和血漿置換法進行比較分析，旨在探討血液分析儀研究參數(shù)排除冷凝集現(xiàn)象干擾的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

采用ADVIA2120型自動血細胞分析儀(德國BAYER公司)及配套原裝試劑，該儀器以過氧化物酶染色法加光散射法檢測白細胞(white blood cell，WBC)，二維光散射法測量紅細胞(red blood cell，RBC)及血小板(platelet，PLT)；單個細胞血紅蛋白(cell hemoglobin，CH)由RBC CH直方圖所得。XN9100型自動血細胞分析儀(日本Sysmex公司)流水線及配套試劑，該儀器以細胞化學染色加光散射法檢測WBC，鞘流電阻抗法檢測RBC和PLT。網(wǎng)織紅細胞(reticulocyte，Ret)通道采用半導體激光流式細胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)+核酸熒光染色法。RBC-O為XN9100(Ret通道)測得的研究參數(shù)。

1.2 標本來源

收集2019年1-5月在北京協(xié)和醫(yī)院采集靜脈血進行血常規(guī)檢查的22例患者的冷凝集樣本(22份)，冷凝集判斷標準，紅細胞平均血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)＞360 fl，放入4 ℃冰箱5 min觀察到肉眼可見的冷凝集現(xiàn)象。

1.3 標本處理與質(zhì)量控制

對22份冷凝集標本分別用以下4種處理方法檢測：①XN9100網(wǎng)織通道檢測法，在血液分析儀XN9100(網(wǎng)織通道)上機檢測，用RBC-O替換RBC并計算MCHC；②ADVIA2120檢測法，在血液分析儀ADVIA2120上機檢測，研究參數(shù)單個細胞血紅蛋白(CH)通過血紅蛋白/單個細胞血紅蛋白(HGB/CH)計算得到修正后的RBC和MCHC；③37 ℃水浴法，37 ℃水浴1 h后血液分析儀XN9100檢測；④血漿置換法，在標本中加入1 ml生理鹽水，混勻后在離心機3000 r/min，離心3 min，吸取1 ml混有生理鹽水的血漿后，在血液分析儀XN9100上測定，并記錄結(jié)果。

ADVIA型2120自動血細胞分析儀和XN9100型自動血細胞分析儀均在校準周期內(nèi)，每日測定配套質(zhì)量控制，結(jié)果均在控。

1.4 觀察評價指標

以血漿置換法為參考方法，計算其他方法在RBC、MCHC、平均紅細胞體積(mean corpusular volume，MCV)、WBC和PLT的5項結(jié)果相對偏差(%)，依據(jù)本研究實驗室的允許偏差標準(RBC3%、MCHC3.5%、WBC7.5%、PLT12.5%)確定糾正效果，試驗以5項數(shù)值糾正結(jié)果在允許偏差內(nèi)為完全糾正，有一項不符合視為未糾正。

2 結(jié)果

2.1 四種方法數(shù)據(jù)比較

(1)RBC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測法、ADVIA2120檢測法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進行RBC比較，其中37 ℃水浴法整體低于其他方法，見圖1。

圖1 四種方法RBC比較結(jié)果

(2)MCV比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測法、ADVIA2120檢測法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進行MCV比較，XN9100網(wǎng)織通道檢測法及37 ℃水浴法部分病例高于其他兩種方法，見圖2，XN9100相關(guān)直方圖見圖3。

圖2 四種方法MCV比較

圖3 兩種典型冷凝集標本紅細胞直方圖

(3)MCHC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測法、ADVIA2120檢測法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進行MCHC比較，37 ℃水浴法部分病例高于其他3種方法，見圖4。

表1 22份冷凝集標本3種方法與血漿置換法比較超過允許偏差(例)

圖4 四種方法MCHC比較

(4)PLT比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測法、ADVIA2120檢測法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進行MCHC比較，XN9100檢測法與ADVIA2120檢測法無明顯差異，血漿置換法整體低于其他3種方法，見圖5。XN9100相關(guān)散點圖見圖6。

圖5 四種方法PLT比較

圖6 血漿置換法前后PLT直方圖血小板碎片對比

(5)WBC比較：采用XN9100網(wǎng)織通道檢測法、ADVIA2120檢測法、37 ℃水浴法和血漿置換法的4種方法進行WBC比較，4種方法檢測結(jié)果整體水平無明顯差異，見圖7。

圖7 四種方法WBC比較

2.2 血漿置換法為參考方法的比較

以血漿置換法為參考方法對其他3種方法比較：①XN9100檢測法，XN9100型自動血細胞分析儀上研究參數(shù)RBC-O超過允許偏差分別為1例RBC、3例MCHC、1例MCV及1例PLT；WBC在允許偏差內(nèi)；②ADVIA2120檢測法，ADVIA2120型自動血細胞分析儀上的參數(shù)CH，通過(HGB/CH)反算得到RBC、MCHC和MCV結(jié)果，其均在允許偏差內(nèi)，超過允許偏差分別為1例WBC、1例PLT；③37 ℃水浴法，超過允許偏差分別為87例RBC、4例MCHC、1例MCV、1例PLT；WBC在允許偏差內(nèi)。血漿置換法與其他3種方法比較見表1。

3 討論

冷凝集素又稱冷型自身抗體，于低溫時造成紅細胞凝集，以IgM為主，罕見情況下為IgA或IgG[1]。血清中冷凝集素的滴度，即在冷卻狀態(tài)下仍可見到紅細胞凝集的血清標本的最大稀釋度在不同患者中差異很大，但在同一患者中通常相當恒定。正常情況下，幾乎所有個體都有低滴度的冷凝集素(＜1∶64，通常＜1∶10)，并且無年齡和季節(jié)性差異[2]。冷凝集現(xiàn)象大多是因為冷凝集素效價異常增高引起，其中多為繼發(fā)性，也可見于冷凝集素效價不高，但活性強的情況[3-4]。冷凝集現(xiàn)象常見于支原體肺炎、傳染性單核細胞增多癥，也可見于慢性淋巴細胞白血病和淋巴瘤等，該類患者的血液離體后，溫度降低導致高效價或高活性的冷凝集素與RBC表面的相應(yīng)抗原結(jié)合，使RBC自身發(fā)生凝集，導致血常規(guī)紅系參數(shù)受到干擾，有時甚至會影響到WBC及PLT計數(shù)[5]。除冷凝集素外，冷球蛋白、冷纖維蛋白原等也可產(chǎn)生冷凝集現(xiàn)象，對血常規(guī)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響[6]。在體外RBC與冷凝集素發(fā)生特異性結(jié)合的最大反應(yīng)溫度在4 ℃，復溫到37 ℃時該反應(yīng)消退[7]。

冷凝集標本在電阻抗方法的血液分析儀上檢測時，聚集的RBC通過細胞計數(shù)孔常被認為是大紅細胞，或不計入有效體積紅細胞，引起RBC總數(shù)減少。正常體積范圍內(nèi)測得的紅細胞MCV值，因此MCV會受到較小影響。

實驗室處理冷凝集標本常用的方法有37 ℃水浴法，血漿置換法。37 ℃水浴法是將有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標本在37 ℃作用下使聚集的RBC散開，血漿置換法是通過生理鹽水置換血漿從而降低血中冷凝集素的含量，本實驗室使用的XN9100型自動血細胞分析儀研究參數(shù)RBC-O、ADVIA2120型自動血細胞分析儀研究參數(shù)CH對于冷凝集干擾的排除均有幫助。

本研究以血漿置換的結(jié)果為標準，比較其他3種方法。試驗數(shù)據(jù)顯示，采用37 ℃水浴法排除冷凝集現(xiàn)象干擾的結(jié)果中共有8例標本不符合允許偏差，大多數(shù)冷凝集標本經(jīng)過37 ℃水浴后就能得到滿意結(jié)果，表明37 ℃水浴法僅能排除部份冷凝集現(xiàn)象的干擾，但是高效價冷凝集素等原因引起的較為嚴重的冷凝集現(xiàn)象，37 ℃水浴法并不能解決干擾[3，8]。

利用XN9100型自動血細胞分析儀RET通道上的RBC-O研究參數(shù)得到的紅系結(jié)果，有3例不符合允許偏差，此方法較37 ℃水浴法及血漿置換法快捷，效果優(yōu)于37 ℃水浴法但是仍有少部分標本未能排除冷凝集現(xiàn)象的干擾。

XN9100型自動血細胞分析儀因為RET通道有40 ℃液體加熱器硬件[9]的特性，因此其測出的研究參數(shù)RBC-O，可以幫助排除冷凝集干擾，但仍有部分標本干擾未能排除，所以RBC-O是否可以作為最終的RBC結(jié)果仍需判斷。通過工作中的摸索，本研究發(fā)現(xiàn)可以將RET通道的另一個研究參數(shù)HGB-O(血紅蛋白作為一個判斷條件，RET通道的HGB-O與正常HGB無明顯差別(cv＜3.5%)，RBC-O結(jié)果可采用。

ADVIA2120型自動血細胞分析儀測量RBC的方法為二維光散射法，其原理為當RBC一個一個通過激光照射區(qū)時，在兩個角度進行測定，高角度(5°～15°)主要測細胞折射指數(shù)，其和細胞密度相關(guān)，低角度(2°～3°)主要測細胞大小[10]。由于其測定的多角度，一些較弱冷凝集現(xiàn)象的標本可直接排除干擾，由于其RBC CH直方圖不受細胞體積影響，是按每個細胞中存在的血紅蛋白含量顯示RBC分布，因此利用直方圖的參數(shù)CH反推(HGB/CH)得RBC及MCHC與血漿置換法相比較，均可接受。本研究發(fā)現(xiàn)，ADVIA2120型自動血細胞分析儀的MCV因為方法學優(yōu)勢基本不受冷凝集現(xiàn)象干擾。

在實驗過程中發(fā)現(xiàn)血漿置換法對RBC參數(shù)雖能很好地糾正，卻會導致PLT的丟失。血漿置換法PLT雖然與其他各法比較，除1例PLT增高以外，都符合允許偏差，但與其他相比都偏低，這可能與血漿置換過程中吸棄血漿時PLT被吸掉有關(guān)，因為血液離心后，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細胞層和紅細胞層，且離心力較低時，上層血漿富含PLT，本研究試驗中存在的1例PLT異常標本，分析數(shù)據(jù)得知是因為血漿置換法的PLT高于其他3種方法所致。本研究通過觀察其散點圖發(fā)現(xiàn)，可能是因為部分破碎的細胞碎片導致PLT結(jié)果增多。由于血漿置換法主要影響PLT，因此，PLT值可采用置換前的檢測數(shù)值，通過以上的處理能得到滿意的效果。

4 結(jié)論

在處理血常規(guī)檢測中遇到的冷凝集標本時，37 ℃水浴法適用于弱冷凝集現(xiàn)象的標本；血漿置換法是目前排除冷凝集干擾結(jié)果的傳統(tǒng)方法，但其易受操作手法的干擾，如能測研究參數(shù)CH值，通過計算可以得到消除干擾的RBC值；如能測研究參數(shù)RBC-O值，可用RBC-O替代RBC，但是否直接采用需對相關(guān)參數(shù)進行判斷；兩者相對傳統(tǒng)的37 ℃水浴法及血漿置換法更省時省力，有較好的應(yīng)用價值。