育發類化妝品中甾體激素含量的不確定度評價

付金鳳，朱曉雯

(常州市食品藥品監督檢驗中心，江蘇 常州 213000)

隨著現代生活節奏日益加快，社會壓力與日俱增，生態環境逐漸惡化，脫發患者越來越多，各種標識具有防脫、生發功效的育發類化妝品也應運而生。然而，部分不法商家為獲取利潤，盲目追求產品的有效性，向其中非法添加甾體類激素成分。甾體激素中的糖皮質激素，如氫化可的松、醋酸曲安奈德等，在臨床中常被用于治療斑禿，而雌性激素，如雌酮，黃體酮等具有促進毛發生長的作用，已被臨床應用于治療雄性激素源脫發。但甾體激素具有一定程度的毒副作用，雌性激素有潛在的致癌風險，糖皮質激素會引起向心性肥胖，感染等[1-3]。《化妝品安全技術規范》(2015年版)[4]中明確規定禁止在化妝品中添加上述幾種藥物。

本研究采用液質聯用法對育發化妝品中氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮含量進行測定，參考JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[5]，對育發類化妝品中上述四種成分檢測的不確定度進行分析與評價，以期為育發類化妝品非法添加檢測提供參考與依據。

1 實 驗

1.1 儀 器

Shimadzu LCMS-8050液質聯用儀，Shimadzu公司；XPE105電子天平(d=0.01 mg)，Mettler-Toledo公司；計量檢定合格的A級玻璃量器。

1.2 試 劑

氫化可的松(100152-201707，99.2%)；雌酮(100849-200501)；醋酸曲安奈德(100125-201406，99.1%)；黃體酮(100027-201810，99.6%)，以上標準品均購自中國食品藥品檢定研究院；樣品為霸王育發液(KM11H8)。

1.3 儀器分析條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(2.1×100 mm，3.5 μm)，流動相A：0.2%甲酸水溶液，流動相B：甲醇(含0.2%甲酸)，柱溫30 ℃，流速0.3 mL/min，梯度洗脫程序：0～2 min：5%～25%B，2～4 min：25%～55%B，4～11 min：55%～80%B，11～18 min：80%～90%B。以三重四極桿串聯質譜儀檢測，電噴霧離子源(ESI)，掃描方式：正離子掃描，檢測方式：MRM。

1.4 混合標準儲備溶液的制備方法

精密稱取氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮標準品各10 mg，置10 mL量瓶中，加入甲醇使溶解，稀釋定容，得混合標準儲備溶液Ⅰ(1 mg/mL)。精密吸取標準儲備溶液Ⅰ 5 mL，置100 mL量瓶中，90%乙腈稀釋定容，得標準儲備溶液Ⅱ(50 μg/mL)。精密吸取標準儲備溶液Ⅱ 1 mL，置50 mL量瓶中，90%乙腈稀釋定容至刻度，得標準儲備溶液Ⅲ(1 μg/mL)。

1.5 混合標準系列溶液的制備方法

用1 mL、1 mL、5 mL、1 mL、2 mL移液管精密吸取標準儲備溶液Ⅲ至100 mL、50 mL、100 mL、10 mL、10 mL量瓶中，用1 mL、1 mL、3 mL移液管精密吸取標準儲備溶液Ⅱ至100 mL、50 mL、100 mL量瓶中，用90%乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL的混合標準系列溶液。

1.6 供試品溶液的制備方法

精密稱取本品1 g(精確到0.001 g)于10 mL容量瓶中，加入1 mL飽和氯化鈉溶液，渦旋30 s后加入乙腈，定容至刻度，渦旋30 s，超聲提取30 min，渦旋1 min，4500 rpm離心5 min，取上清液經0.45 μm微孔濾膜過濾后，濾液作為待測液備用。

1.7 測定方法

精密吸取上述混合標準系列溶液及供試品溶液各5 μL，注入高效液相色譜-質譜聯用儀，測定峰面積，以標準曲線法計算供試品中相當于氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮標準品的濃度。

2 結果與討論

2.1 數學模型

式中：ω為化妝品中4種甾體激素的質量分數，ng/g；D為樣品稀釋倍數(不稀釋則為1)；ρ從標準曲線得到待測組分的質量濃度，ng/mL；V為樣品定容體積，mL；m為樣品取樣量，g。

2.2 不確定度來源分析

由上述數學模型可知，不確定度來源主要包括：標準溶液引入的不確定度、供試品溶液引入的不確定度、實驗儀器及環境引入的不確定度[7-9]。

2.3 不確定度分量的評定

2.3.1 供試品制備過程引入的不確定度

(1)供試品稱量過程

表1 樣品稱量引入的不確定度

(2)供試品稀釋過程

2.3.2 標準品溶液制備過程引入的不確定度

(1)標準品稱量過程引入的相對不確定度

表2 標準品稱量引入的不確定度

(2)制備標準系列溶液的玻璃器皿引入的相對標準不確定度

表3 標準系列溶液配制引入的不確定度

標準系列溶液濃度為：10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL，配制過程中引入的相對不確定度分別0.00637、0.00637、0.00522、0.00645、0.00579、0.00481、0.00481、0.00389，取其中最大的不確定度值，則urel(v0)=0.00645。

2.3.3 液質聯用儀引入的不確定度

2.3.4 樣品前處理引入的不確定度

表4 樣品前處理引入的不確定度

2.4 樣品的合成標準不確定度、擴展不確定度及結果表述

表5 不確定度分量及合成相對標準不確定度

樣品的合成標準不確定度為：u(Cx)=C×urel(Cx)，在95%的置信區間下，取包含因子k=2，則擴展不確定度為：U(Cx)=k×u(Cx)，樣品中四種甾體激素含量見表6。

表6 樣品合成標準不確定度、擴展不確定度及結果表述

3 結 論

本研究對育發類化妝品中非法添加甾體激素類成分檢測的不確定度進行了較為全面的分析，由表5可知，標準品稱量、標準曲線系列溶液的配制、儀器進樣精密度及樣品回收率對不確定度貢獻較大。因此，在實驗過程中，應定期對電子天平及液質聯用儀進行檢定和維護保養，對玻璃器皿進行校準，對實驗操作人員進行專業培訓與考核，對檢測過程進行嚴格的質量控制，盡量減少實驗過程中的不確定性，以提高檢測結果的準確度和可靠性[13-14]。