浙江省供精者精液分析參考區間的建立

吳 穎， 宋銀莉， 沈曉芳

（浙江省婦幼和生殖保健中心，浙江 杭州 310012 ）

臨床實驗室需建立精液分析參考區間，但參考區間會受多種因素影響而產生差異。例如：人群個體之間可能會存在較大的生物學變異，特別是我國地域廣闊，會存在地域性差異[1]；采用不同檢測方法檢測相同項目，參考區間不同[2-3]。在各種對精液質量的研究中，精液檢查方法各不相同，有的使用精子動力分析儀，有的是人工分析；另外，大多臨床實驗室且缺少對儀器的質量控制和檢驗工作人員的標準化操作規程培訓。這些都是造成目前精液分析結果不一致的重要原因。

2010年，世界衛生組織（World Health Organization，WHO）第5版《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（簡稱WHO第5版）[4]對正常生育男性精液參考區間進行了修訂，確定的精液分析參考區間與前一級數據[5]有較大差異，在臨床醫生中引起困擾。有學者認為，WHO第5版數據來源大部分都是白種人，黃種人數據極少，不能直接用于中國人群。

臨床實驗室應建立自己的參考區間，而不是簡單套用文獻給定的參考區間。建議臨床各實驗室根據其使用的檢測方法，建立適用于自己實驗室的精液分析參考區間，為臨床診斷、治療、監測提供可靠的實驗依據。

本研究是以浙江省人類精子庫供精志愿者（簡稱供精者）作為研究對象，建立浙江省健康人群精液分析參考區間。

1 材料和方法

1.1 一般資料

收集2017年1月—2019年8月到浙江省人類精子庫進行初篩的供精者精液標本4 122份，供精者年齡22～45歲，平均28.6歲。職業分布：學生占18.2%，職員占81.8%。根據不同年齡分為3組：20～29歲組3 383例，占82%；30～39歲組665例，占16%；40～45歲組74例，占2%。本研究所有對象均簽署知情同意書，并經其他輔助檢查，無傳染病史、無遺傳病家族史，一般體格檢查及生殖器檢查均無異常。

1.2 方法

按WHO第5版要求，對所有初次篩查供精者禁欲3～7 d，手淫法取精后，于37 ℃恒溫箱內自然液化；精液體積測量采用稱重法；精子濃度、前向運動精子百分比采用MAKLER精子計數板手工計數法，計數超過200個精子后，計算其精子濃度和前向運動精子百分比；精子形態學染色采用WHO第5版巴氏染色法，形態分析標準采用WHO第5版標準。

1.3 質量控制

所有實驗技術人員參加WHO第5版手冊操作方法標準化培訓，要求實驗室室內質控和室間質評達標。本研究所有精液分析均由同組實驗技術人員完成。形態學涂片由同組實驗技術人員進行評估。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。根據WHO第5版方法，數據分布采用百分位數進行描述，每項精液分析數值與WHO第5版中表A1-2中數值進行比較。

2 結果

2.1 基本情況

先對4 122份精液標本的各項數據進行正態性檢驗，其中精液體積、精子正常形態率均呈近似正態分布，精子總數、精子濃度、前向運動精子百分比呈非正態分布。因此，采用非參數百分位法描述2017年1月—2019年8月初篩供精者精液分析數值分布，并按美國臨床實驗室標準化協會C28-A2文件要求建立參考區間。出于對檢測項目臨床意義的考慮，不考慮性別、年齡因素。由于精液分析結果判讀的特殊性，各項精液分析數值只有降低才有意義。因此，本研究按WHO第5版要求，取P5單側作為參考區間。

2.2 精液體積參考區間

本室精液體積參考區間為≥1.8 mL，略高于WHO第5版P5參考值（1.5 mL），數值百分位分布與WHO第5版大致相同，偏差幅度很小。不同年齡組中，＞40歲組與其他2組相比，精液體積在低百分數上（P5以下）顯著下降。見表1。

表1 精液體積參考區間比較 mL

2.3 精子總數參考區間

本研究精子總數參考區間為≥51×106/次射精，高于WHO第5版P5參考值（39×106/次射精），數值百分位分布與WHO第5版有差異，越是高百分位數數值差異越大，特別是在P50以上。不同年齡組中，40～45歲組與其他2組相比，精子總數在低百分數上（P5以下）顯著下降。見表2。

表2 精子總數參考區間比較 ×106/次射精

2.4 精子濃度參考區間

本研究精子濃度生物參考區間為≥16×106/mL，略高于WHO第5版P5參考值（15×106/mL），數值百分位分布與WHO第5版有所差異，且越是高百分位數數值差異越大，特別是在P50以上。不同年齡組中，40～45歲組與其他2組相比，精液濃度在低百分數上（P5以下）顯著下降。見表3。

表3 精子濃度參考區間比較 ×106/mL

2.5 PR精子百分比參考區間

本研究PR精子百分比參考區間為≥20%，顯著低于WHO第5版P5參考值（32%），數值百分位分布與WHO第5版相比也整體偏低。不同年齡組中，40～45歲組與其他2組相比，精液濃度在低百分數上（P25以下）顯著下降。見表4。

表4 PR精子百分比參考區間比較 %

2.6 精子正常形態率參考區間

本研究精子正常形態率參考區間為≥5%，略高于WHO第5版P5參考值（5%），數值百分位分布與WHO第5版大致相同，偏差幅度很小。不同年齡組中，精子正常形態率之間無顯著性差異。見表5。

2.7 精液pH值參考區間

本研究精液p H值參考區間（取P2.5～P97.5）為7.4～8.6。不同年齡組中，精液pH值之間無顯著性差異。見表6。

表5 精子正常形態率比較 %

表6 本研究精液pH值

3 討論

臨床需知道精液檢查結果是否“正常”，而“正常”的這個詞可以有多種解釋。根據MURPHY[6]的定義，“正常”精子濃度可能指：由均值定義最有代表性的精子濃度；由參考區間定義最常見精子濃度（實驗室參考區間）；表明有生殖能力的精子濃度；委員會達成共識的精子濃度；理想精子濃度。在WHO第5版中，正常參考區間來源于特殊參考人群：近12個月內使配偶妊娠的男性，那么這個參考區間應為該特殊人群所用，且可能與普通人群參考區間不同[7]。

精液質量差異不僅在不同國家、不同民族之間存在，即使在同一國家不同地方也有顯著差異。有學者[8]對來自4個歐洲城市（哥本哈根、巴黎、愛丁堡和圖爾庫）的1 082名可育男性精液樣本進行了研究，結果發現這4個城市可育男性精子濃度、精子活力和精子總數間均有顯著性差異。IWAMOTO等[9]對來自日本4個地區（札幌、大阪、金澤和福岡）792名可育男性進行精液質量分析，發現該地區可育男性精液質量非常好，可與歐洲地區可育男性精液質量相媲美；而在他的另一項研究中，對來自日本另外4個地區（川崎、大阪、金澤和長崎）1 559名青年男性進行精液質量分析，發現該地區有相當一部分青年男性精液質量下降[10]。哥本哈根4 867名男性精液分析橫斷面研究結果表明，1996—2010年間，該地區男性精子濃度和精子總數有所增加，而活動精子和異常形態精子沒有變化[11]。這一研究結果與人們通常認為的20世紀以來人類精液質量下降并不一致[12-13]。因此，了解特定地區精液質量情況具有重要意義，不僅可為該地區提供更可靠的男性生殖健康資料，也可為健康教育方案的制定提供良好參考。

本調查中樣本來源于浙江省人類精子庫供精者，與WHO第5版參考區間比較后發現，浙江省健康男性精液體積、精子總數、精子濃度和精子正常形態率均達到或超過WHO第5版參考區間下限，PR精子百分比則明顯低于WHO第5版參考區間下限，這一結果與耿可亭等[14]、李玉山等[15]、石漢振等[16]的實驗結果相類似；而與黃靜等[17]的實驗結果不一致。這也進一步說明了各臨床實驗室建立本實驗室生物參考區間的必要性和重要性。

本研究健康男性各項精液分析數值百分位分布與WHO第5版有所差異，且越是高百分位數數值差異越大，特別是在P50以上。其中，精液體積偏差幅度最小，偏差幅度由大到小居前3位分別是精子總數上限，精子濃度上限和精子正常形態率上限。產生這一變化的可能原因是人種差異：WHO第5版數據來源主要是西方白種人，黃種人數據來源非常少，目前也沒有相關學者對這2個人種進行精液質量對照研究。希望本研究能為今后各實驗室建立中國男性精液質量參考區間提供參考。