牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例診斷報告

劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波

牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例診斷報告

劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波*

（黑龍江八一農墾大學動物科技學院，黑龍江大慶 163319）

牛呼吸道疾病綜合征是嚴重危害全球養牛業的一類重要疾病，具有高發病率和高死亡率的特點。本文對近日哈爾濱某牛場新引進牛只，幾天后患病，采集鼻拭子，提取總DNA或RNA，進行牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛副流感3型病毒、牛病毒性腹瀉病毒和牛腺病毒的PCR或RT-PCR檢測，確診病牛為IBRV、BPIV和BVDV混合感染，情況較為嚴重，建議及時做好相關防治措施。

牛呼吸道疾病綜合征；PCR；IBRV；BPIV；BVDV

牛呼吸道疾病綜合征（Bovine respiratory disease complex，BRDC）是嚴重危害養牛業的一類重要疾病，臨床癥狀多表現為食欲下降、精神沉郁、高熱、呼吸困難和咳嗽等癥狀，牛自身免疫力、應激強度、飼養管理也會影響疾病的嚴重程度。BRDC主要危害犢牛、育肥牛和奶牛，發病率和死亡率高，發生疾病后往往會給養殖戶造成重大的經濟損失。BRDC的病因比較復雜，常發生于新引進的牛群，存在病毒、細菌和支原體等多種傳染性病原混合感染［1，2］，其中病毒是主要的病原。目前分離到的病毒主要有牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）、牛副流感3型病毒（Bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛呼吸道合胞體病毒（Bovine respiratory syncytial virus，BRSV）和牛腺病毒（Bovine adenovirus，BAV）等［3，4］。這些病毒能夠損壞牛呼吸道上皮細胞，導致牛肺炎、支氣管炎等疾病，而且還可以抑制牛的免疫系統，從而更易繼發其他病原感染，危害牛體健康，進一步推升發病率和死亡率，從而加重經濟損失［5］。此外，潮濕陰冷的環境、脫水缺氧的狀態、惡劣的天氣及污濁的空氣都有可能誘發BRDC的產生［6］，因此要注意改善牛舍環境，注意防寒保暖。

IBRV是引起牛急性、熱性、接觸性鼻氣管炎的病原，是世界衛生組織（WHO）列出的B類傳染病之一，其可感染牛呼吸、黏膜、神經、生殖等多個系統，并造成牛免疫力下降，從而容易繼發其他感染，使病情加重，導致死亡率上升［7］；還能夠影響育肥牛的生長發育、奶牛的產奶量等，對養牛業造成重大經濟損失。

BPIV-3是BRDC的主要病原之一，能夠引起急性、接觸性的牛副流感性感冒，又稱“運輸熱”。該病毒能侵害牛呼吸系統，引發上呼吸道黏膜發生卡他性炎癥，使免疫機能下降而易繼發細菌感染，導致肺炎產生，降低了牛的生產性能，孕畜感染可能會流產，治療成本和死亡率也升高。

BVDV也是BRDC的重要病原之一，能夠引起牛病毒性腹瀉-黏膜病，其感染還會抑制牛機體免疫系統，導致疫苗免疫失敗，也容易繼發其他病原感染，造成嚴重的危害。懷孕期間的母牛感染BVDV可能發生死胎、流產等繁殖障礙并向外排毒、散毒，危害健康牛群，形成持續性感染［8］。臨床特征為黏膜發炎、糜爛、壞死和腹瀉。BVDV感染能引起黏膜病爆發，死亡率可達100%，因此要格外注意對此病的預防和控制。

本文對近日哈爾濱某牛場患BRDC牛群進行病毒分離鑒定，確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。現報告如下。

1 實驗材料和方法

1.1病料、試劑

哈爾濱某牛場采集的病牛鼻腔棉拭子病料5份。反轉錄試劑盒購于Thermo公司；RNA提取試劑盒購于康為世紀公司；DNA提取試劑盒購于博凌科偉公司。

1.2引物設計

根據GenBank中已發表的IBRV、BPIV-3、BVDV、BAV基因序列，設計特異性鑒定引物。引物由華大基因科技有限公司合成。引物序列、基因名稱見表一。

1.3病毒的處理和核酸的提取

將病料用800μl滅菌后的PBS溶液浸潤，浸潤所得溶液按照博凌科偉公司的DNA提取試劑盒和康為世紀公司的RNA提取試劑盒的操作步驟，分別提取DNA和RNA。按照Thermo公司的反轉錄試劑盒操作說明，將提取的RNA進行反轉錄獲取cDNA。

2 實驗結果

經對病料病毒DNA和RNA的提取及PCR擴增，PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳分析。IBRV、BPIV和BVDV檢測目的片段大小分別為423bp、333bp和265bp。結果如圖一所示，5份病料均檢出IBRV、BPIV-3和BVDV，確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。

3 討論

近年來，隨著我國養牛業的快速發展，牛只的跨區域流動更加頻繁，而疾病的傳播和運輸應激造成牛呼吸系統疾病也更加泛濫，給養牛業造成巨大損失［9］。通過對近日哈爾濱某牛場新引進牛只患病后采集鼻腔黏膜拭子，運用PCR方法檢測出IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染，病情比較嚴重，需要盡快采取相應處理措施，預防感染本場原有牛群，對患病牛只進行隔離和對癥治療。對于牛群呼吸道疾病的綜合防治，首先應做好牛群引進的管理工作，禁止從疫區和正在發病的地區引進牛只，對引進牛只進行隔離觀察和檢測，做好必要的預防接種和驅蟲后再與健康牛群混群；其次要加強飼養管理，確保牛群擁有清潔、充足的飲用水，適當補充維生素、礦物質元素等營養，并確保飼料新鮮；再者要重視衛生和疾病防控，做好通風、清潔和定時消毒工作，避免牛群過于擁擠，及時發現患有呼吸系統疾病牛只以早隔離、早治療。

［1］ 馬春霞，李軍，覃勇，等.牛呼吸道疾病綜合征病例的病原分析［J］.中國畜牧獸醫，2015，42（9）：2481-6.

［2］ 范穎，張繼瑜，周緒正，等.牛呼吸道疾病的病原學與防制研究進展［J］.中國畜牧獸醫，2013，40（1）：157-163.