混生荒漠植物葉片功能性狀與其根際微生物多樣性的關系

李善家，王輝，茍偉，伍國強，蘇培璽

1.蘭州理工大學生命科學與工程學院，甘肅 蘭州 730050；2.中國科學院西北生態環境資源研究院，甘肅 蘭州 730000

在植物長期的進化過程中，C3與 C4植物表現出不同的環境適應策略（Chen et al.，1996；Fernández et al.，2019；Ripley et al.，2010；Zhu et al.，2008）。有些植物在特定生境下混生，混生的一個重要特征是種間結合，它們適應極端環境的能力高于單生種群，比如C3與C4植物在外界干旱、鹽堿等逆境脅迫下的混生通常表現出相互促進的關系（Gross et al.，2010；Pugnaire et al.，2001；Tewksbury et al.，2001）。包括提高C3植物葉片光化學反應速率、水分利用效率（蘇銘等，2018）、生物量（韓梅等，2006）和存活率等（Franks，2003），并降低了C4植物在逆境中生長的優越性（Su et al.，2012）。在中國西部干旱內陸地區，由 C3植物紅砂（Reaumuriasongarica）和 C4植物珍珠豬毛菜（Salsolapasserina）共同構成的超旱生小半灌木層片在黑河山前荒漠生境下普遍存在（丘明新等，1982）。在C3紅砂和C4珍珠豬毛菜種間混生區域中，有時紅砂和珍珠豬毛菜獨立生長，稱為單生；有時兩者常常緊密的結合生長在一起，稱為聯生，這種種間聯合的程度隨外界生境的變化而變化（Su et al.，2012），顯示了C3紅砂和C4珍珠豬毛菜的聯生是適應環境的客觀方式。葉片功能性狀量化了植物在環境脅迫下的權衡策略，并與根際微生物結構密切相關（Pandey et al.，2019）。通過對聯生C3紅砂和 C4珍珠豬毛菜根際微生物群落結構的研究可以解釋其葉片功能性狀適應環境的變化規律。

根際微生物群落結構和多樣性的變化對植物生長、植物演替和其他關鍵功能有重要影響（Bever，1994）。根際微生物包括根際促生細菌和菌根真菌，促生細菌可以增強植物在逆境脅迫下對環境的適應能力，如提高了植物鮮重（Abdel et al.，2020；Chiappero et al.，2019）、光合效率（Hmaeid et al.，2019）、葉面積和葉綠素含量，并增強葉片養分吸收能力（Anbi et al.，2020；Chiappero，2019；Hmaeid，2019；Mia et al.，2010；Pandey et al.，2019）、降低植物葉片滲透壓（Abdel et al.，2020）；菌根真菌與植物界 80%以上的植物根際共生（Borkowska，2002），為葉片提供了水分和養分（Brundrett，2002）。菌根真菌可以提高植物光化學反應速率、葉綠素含量（Mikiciuk et al.，2019；Sheng et al.，2008；Zhu et al.，2012），還可以使葉相對含水量、葉面積（Birhane et al.，2012）和葉水勢（Porcel et al.，2004）等葉片水分生理功能性狀受到影響。其中根際促生細菌和菌根真菌之間也存在相互作用（Boer et al.，2005）。在干旱、鹽堿等逆境條件下，很多研究表明，根際促生細菌和菌根真菌的協同作用，通常對植物適應逆境發揮積極作用（Khajeeyan et al.，2019；Kohler et al.，2008）。

在中國西北干旱區，水分是影響植物葉片功能性狀的一個關鍵因子（Haase et al.，1999）。基于此，本研究以黑河流域山前戈壁C3植物紅砂與C4植物珍珠豬毛菜形成的混生區域為研究對象，研究混生荒漠植物根際微生物多樣性對其葉片水分生理功能性狀的影響，旨在探究荒漠環境下根際微生物在聯生植物生存策略中所起的作用，為植物與微生物相互作用關系研究提供科學理論依據。具體內容包括：（1）分析混生荒漠植物根際微生物（細菌、真菌）多樣性組成與結構；（2）比較珍珠豬毛菜、紅砂葉片水分生理功能性狀；（3）揭示根際微生物多樣性指數與功能性狀之間的關系。

1 材料與方法

1.1 研究區域與樣品采集

2018年8月中旬，研究區位于黑河流域山前戈壁（38°54′N，100°15′E），是珍珠豬毛菜、紅砂的荒漠灌木混生區域。海拔 1590 m，屬溫帶大陸性氣候，年均氣溫為6—8 ℃，年均降水量為130 mm，年蒸發量達 2000—2350 mm。戈壁土質干旱、鹽堿程度高，常為粗砂、礫石。珍珠豬毛菜平均株高58 cm，冠幅854 cm2，葉片呈球狀；紅砂平均株高53 cm，冠幅879 cm2，葉片為短小棒狀，常常聯生在一起。

在采樣區隨機采集長勢良好，大小一致的聯生珍珠豬毛菜（Associated growthSalsolapasserina，AGSP），聯生紅砂（Associated growthReaumuria songarica，AGRS），單生珍珠豬毛菜（Isolation growthSalsolapasserina，IGSP），單生紅砂（Isolation growthReaumuriasongarica，IGRS）各5—10株。然后分別將4種植物地上部置于保鮮箱中保藏，以防水分散失。分別挖取4種植物地下部，先去除根部結合疏松的土壤，然后用無菌刷分別小心刷取植物與根部結合緊密的土壤，過100目篩，用無菌離心管分裝，野外放置于-40 ℃保鮮箱中保存，備土壤微生物基因組DNA提取及微生物多樣性分析。

1.2 方法

1.2.1 葉片功能性狀測定

在野外09:00—11:00使用WP4-T露點水勢儀（Decagon，USA）對新鮮、長勢一致的葉片水勢[LWP/MPa]進行測定，并分別稱取AGSP、AGRS、IGSP、IGRS的葉片鮮質量（m1，g），葉面積（S，cm2）用 LI-3100葉面積儀（LI-COR，USA）進行測定，葉體積（V，cm3）用5 mL量筒排水法換算測定，浸入水中4—6 h后稱取飽和鮮質量（m2，g），在80 ℃烘箱干燥至恒質量后，測定其干質量（m3，g）；分別計算出總含水量[TWC=(m1-m3)×m1-1×100%]；相對含水量[RWC=(m1-m3)×(m2-m3)-1×100%]；比葉面積[SLA/(cm2·g-1)=S×m3-1]；比葉體積[SLV/(cm3·g-1)=V×m3-1]；比葉質量[LMA/(g·cm-2)=m3×S-1]。自由水含量（FW）的測定：選取新鮮的植物葉片置于稱量瓶中，加入等量60%蔗糖溶液后置于暗處 4 h，其間不時輕輕搖動。到預定的時間后，充分搖動溶液。分別用阿貝折射儀測定糖液濃度，同時測定原來的糖液濃度。設稱量瓶質量為（m1，g），稱量瓶與葉片的質量為（m2，g），稱量瓶與葉片及糖液的質量為（m3，g），糖液原來的濃度為（c1，mol·L-1），浸過植物組織后糖液的糖液的濃度為（c2，mol·L-1）。葉片穩定碳同位素（δ13C，‰）用MAT-253穩定碳同位素質譜儀測定，分析結果均相對于國際標準物質 PDB（Pee Dee River Belemnites Standard）。計算珍珠豬毛菜、紅砂葉片自由水含量和δ13C質量分數的公式如下：

ω(13C)l/ω(12C)l為植物葉片13C與12C的比率，ω(13C)s/ω(12C)s為標準物質PDB中13C與12C的比率。

1.2.2 根際微生物多樣性測序

使用MoBio土壤微生物DNA強力提取試劑盒（ PowerSoil? DNA Isolation Kit，MO BIO Laboratories）對AGSP、AGRS、IGSP、IGRS根際土分別進行基因組DNA提取，提取的基因組DNA做0.7%瓊脂糖凝膠電泳，并通過260 nm/280 nm和260 nm/230 nm之比評估DNA的質量和數量。提取的細菌和真菌基因組進行 16S-rDNA V4+V5區和ITS1區PCR擴增（細菌引物為：F5'-GTGYCAGCMG CCGCGGTAA-3'；R5'-CCGYCAATTYMTTTRAG TT-3'；真菌引物為：F5'-CTTGGTCATTTAGAGGAA GTAA-3'；R5'-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3')與純化（1.8%的瓊脂糖凝膠電泳）。目的片段分別用DNA純化試劑盒（MinElute? PCR Purification Kit）回收，最后將純化產物進行Illumina Hiseq 2500高通量測序。

PCR 50 μL體系：基因組DNA（50 ng），引物（10 μmol·L-1，1.5 μL），Q5 High-Fidelity DNA Polymerase（0.2 μL），High GC Enhancer（10 μL），PCR Buffer（10 μL），dNTP（1 μL），ddH2O 補至總體系 50 μL。

PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min之后，以95 ℃ 1 min；50 ℃ 1 min；72 ℃ 1 min 循環 15次，72 ℃末端延伸7 min，4 ℃保溫。

1.2.3 數據分析與統計

16S-rDNA先進行 PE reads拼接（FLASH v1.2.7）得到Raw Tags，然后通過Raw Tags過濾（Trimmomatic v0.33），得到Clean Tags，接著去除嵌合體（UCHIME v4.2）得到Effective Tags。在相似性97%的水平上，以0.005%作為閾值，進行OTU聚類（QIIME version 1.8.0）。并在Silva（細菌）和UNITE（真菌）分類學數據庫（置信度閾值為0.8）上對OTU進行分類學注釋（RDP Classifier version 2.2）。基于已分類的OTU進行細菌和真菌Alpha多樣性（Chao1指數、Simpson指數、Shannon指數）分析（Mothur version v.1.30），計算Alpha多樣性公式如下：

Chao1指數：

Sobs為觀測到的OTU數，n1為只有一條序列的OTU數，n2為只有兩條序列的OTU數。

Simpson指數：

Sobs為樣品中總物種數目，N為樣品總個體數，ni為第i種個體數。

采用單因素方差分析（One-way ANOVATurkey HSD）法，分析AGSP、AGRS、IGSP、IGRS 4種植物樣品的TWC、FW、RWC、LWP、LMA、SLA、SLV、δ13C 8個水分生理功能性狀差異顯著性并進行多重比較（P＜0.05）。用Pearson相關系數分析8個水分生理功能性狀和根際細菌與真菌α多樣性指數的相關性，并進行顯著性檢驗（P＜0.05）。用冗余分析（RDA）說明4種植物葉片功能性狀之間的變異、相似性和根際微生物多樣性與葉片功能性狀的關系，并用蒙特卡羅檢驗（monte-carlo test）約束軸的顯著性。以上分析都由R（3.5.2）完成（Pearson相關性和冗余分析由psych包和vegan包完成）。

2 結果與分析

2.1 混生荒漠植物葉片功能性狀特征

分析混生荒漠植物群落珍珠豬毛菜和紅砂的 8個葉片功能性狀后發現，珍珠豬毛菜TWC變化范圍為 68.54%—80.76%；FW 變化范圍為 66.82%—78.56%；SLV 變化范圍為 3.65—5.34 cm3·g-1；δ13C變化范圍為-17.73‰— -16.32‰；RWC變化范圍為56.64%—69.04%；SLA變化范圍為24.52—34.63 cm2·g-1；LMA 變化范圍為 0.029—0.041 g·cm-2；LWP變化范圍為-12.36— -7.86 MPa。紅砂TWC變化范圍為 52.42%—62.21%；FW 變化范圍為49.52%—60.82%；SLV變化范圍為 1.26—2.84 cm3·g-1；δ13C 變化范圍為-24.21‰— -25.62‰；RWC變化范圍為62.12%—68.73%；SLA變化范圍為 13.70—24.63 cm2·g-1；LMA 變化范圍為 0.041—0.073 g·cm-2；LWP 變化范圍為-12.89— -9.23 MPa。C4植物珍珠豬毛菜的TWC、FW、SLV、δ13C均顯著（P＜0.05）高于 C3植物紅砂（圖 1），表明C4植物珍珠豬毛菜組織或器官的代謝活動旺盛，C3植物紅砂生長緩慢、抗性較強。

單生與聯生珍珠豬毛菜 LWP的變化范圍分別為-7.86— -8.42、-10.62— -12.36 MPa，單生與聯生紅砂 LWP的變化范圍分別為-9.23— -11.02、-11.26— -12.89 MPa。單生與聯生珍珠豬毛菜RWC的變化范圍分別為65.87%—69.04%、56.64%—58.76%。C3植物紅砂和 C4植物珍珠豬毛菜的聯生，顯著（P＜0.05）降低了兩種植物的LWP，同時顯著（P＜0.05）降低了珍珠豬毛菜的RWC。與單生植株相比，植株的聯生沒有顯著影響SLA和LMA，但是消除了單生植株 SLA和 LMA的顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 混生荒漠植物根際土壤微生物群落組成分析

OTU序列代表物種分類信息，利用Venn圖可以分析AGSP、AGRS、IGSP、IGRS根際細菌和真菌之間共有的或特有的 OTU數目，直觀地表現出根際細菌和真菌間OTU的重合情況。如圖2所示，AGSP、AGRS、IGSP、IGRS共有細菌OTUs有92個，共有真菌OTUs有202個。珍珠豬毛菜和紅砂的聯生，使得珍珠豬毛菜和紅砂 OTU數目總量增加，根際微生物珍珠豬毛菜特有的根際細菌 OTUs由原來的123個增加到131個，根際真菌由75個增加到116個，紅砂特有的根際細菌OTUs由原來的118個增加到313個；但是在紅砂特有的根際真菌中，聯生并沒有導致根際真菌OTUs的增加，反而使得紅砂OTUs總量降低。

圖1 混生荒漠植物珍珠豬毛菜、紅砂葉片功能性狀比較Fig.1 Comparison of the functional traits of the leaves of mixed desert plants Salsola passerina and Reaumuria songarica

圖2 混生荒漠植物珍珠豬毛菜、紅砂根際細菌和真菌OTUs Venn圖Fig.2 OTUs Venn map of mixed desert plants Salsola passerina, Reaumuria songarica rhizosphere bacteria and fungi

在 Silva（細菌）和 UNITE（真菌）分類學數據庫上對 OTU進行分類學注釋后，在門分類水平上檢測出AGSP、AGRS、IGSP、IGRS中細菌分別有22、26、22、25個門，真菌門數相同，都有13個。在4個樣品中，前10個共有細菌類群分別占細菌總類群的 96.2%、96.1%、96.8%、96.6%。其中優勢細菌類群（豐度≥1%）為：變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、浮霉菌門（Planctomycetes）、酸桿菌門（Acidobacteria）、綠彎菌門（Chloroflexi）、藍細菌門（Cyanobacteria）、芽單胞菌門（Gemmatimonadetes）和疣微菌門（Verrucomicrobia）。前10個共有真菌類群分別占真菌總類群的92.5%、93.4%、94.4%、92.2%，見圖3。優勢真菌類群（豐度≥1%）為：子囊菌門（Ascomycota）、擔子菌門（Basidiomycota）、被孢霉門（Mortierellomycota）和壺菌門（Chytridiomycota）。

對AGSP、AGRS、IGSP、IGRS細菌門分類水平上的比較可知，前 10個優勢細菌門中，僅有紅砂細菌的藍細菌門（Cyanobacteria）（3.9%）的相對豐度顯著（P＜0.05）高于珍珠豬毛菜（1.3%）；其他門細菌相對豐度無顯著（P＞0.05）變化。紅砂和珍珠豬毛菜的聯生，也沒有引起前 10個優勢細菌門的相對豐度顯著變化。在真菌門分類水平上，植株類別和單生聯生均未顯著（P＞0.05）改變優勢真菌的相對豐度。

Chao1、Shannon和Simpson指數是衡量物種α多樣性的常用指標，其中Chao1指數衡量物種豐度的大小，Chao1指數越大，物種豐富度越高；用Shannon和Simpson指數衡量物種多樣性，Shannon指數值越大，Simpson指數值越小，物種均勻度越高。由表1可知，珍珠豬毛菜和紅砂的聯生導致細菌豐富度與細菌多樣性均高于單生植株。聯生珍珠豬毛菜的真菌豐富度與多樣性均高于單生珍珠，而聯生紅砂的真菌豐富度與多樣性均低于單生紅砂。

2.3 根際微生物多樣性與葉片功能性狀的聯系

分別利用混生植物根際細菌、真菌多樣性與葉片功能性狀進行冗余分析（RDA），以 α多樣性指數（Chao1、Simpson、Shannon）為環境解釋變量，FW、TWC、RWC、LWP、SLA、SLV、δ13C 為功能響應變量來揭示兩者之間的相互關系。結果顯示，蒙特卡羅置換檢驗（monte-carlo test）約束軸前兩軸均顯著。細菌和真菌調整R2值之后，第一軸解釋了總體變量的71.78%，前兩軸共解釋了總體變量的76.82%。第一軸可以區分紅砂和珍珠豬毛菜之間物種葉片功能性狀差異，第二軸可以區分不同物種的單生聯生。植株的聯生會使植物葉片功能性狀發生變異，并且C4植物珍珠豬毛菜比C3植物紅砂變異程度更大。真菌α多樣性與葉片功能性狀之間的相互關系中，前兩軸與細菌解釋度相同。細菌的Chao1指數與葉片 TWC、FW、LWP顯著負相關（P＜0.05），細菌 Simpson指數與 LWP顯著正相關（P＜0.05）、Shannon指數與 LWP顯著負相關（P＜0.05）。真菌Chao1指數均與TWC、FW、SLA、SLV、LMA、LWP顯著負相關（P＜0.05），Shannon指數與RWC、LWP顯著負相關（P＜0.05）（圖4、表 2）。

圖3 混生荒漠植物珍珠豬毛菜、紅砂根際細菌和真菌在門水平上的組成Fig.3 The composition of the mixed desert plants Salsola passerina, Reaumuria songarica rhizosphere bacteria and fungi at the Phylum level

表1 根際細菌和真菌α多樣性指數Table 1 Rhizosphere bacteria and fungi alpha diversity index

3 討論

植物功能性狀反映了物種對其生長環境的長期適應和響應，植物的各個性狀之間也存在著相互依賴和相互制約的關系，反映了植物適應環境的生存策略（Reich et al.，2003）。在干旱荒漠條件下，通過對C4植物珍珠豬毛菜和C3植物紅砂葉片功能性狀特征進行比較，發現 C4植物的 TWC、FW、SLV、δ13C均顯著高于C3植物紅砂。葉片含水量是植物水分平衡的最重要特征之一，可以反映出植物組織或器官的代謝活動（Zargar et al.，2019）。這與大多數研究結果相似，C4植物珍珠豬毛菜比 C3植物紅砂在干旱荒漠地區的生長具有優勢，這是 C4植物長期的遺傳生理結構與外界環境相互作用的綜合結果（Edwards et al.，2008；Taylor et al.，2014）。葉片TWC、FW含量高，植物代謝活動旺盛，生長速率較快，對逆境抗性弱；反之，植物生長速率慢，對逆境抗性強。SLV反映出植物的耐旱力，通常與有機物質的獲取和環境適應特征有關，在干旱脅迫下，葉片一般表現出較小的SLV（李善家等，2013）。δ13C值則可以反映出植物的長期水分利用效率（Canavar et al.，2014；Condon et al.，2002）。LWP是植物對干旱脅迫適應的一個重要指標（Elsayed et al.，2011）。在干旱脅迫下，通常葉片維持低 LWP有利于從地下部吸收水分。無論珍珠豬毛菜還是紅砂，聯生植株的LWP均與單生植株相比顯著降低，即珍珠豬毛菜與紅砂的種間聯生增強了對水分和資源的獲取能力，也增強了對干旱脅迫的適應能力。珍珠豬毛菜和紅砂的聯生，還消除了 SLA和LMA的顯著性差異，即聯生珍珠豬毛菜的SLA降低，LMA升高，相反，聯生紅砂SLA升高，LMA降低。SLA和LMA通常反映出植物葉片水分利用效率和資源分配策略（Wellstein et al.，2017；Zhou et al.，2020），SLA與植物的用水策略有關（Wright et al.，2001），并且與基本的植物功能緊密結合（Hulshof et al.，2013），SLA越小，LMA越大，導致了葉片組織越致密，抗旱能力越強。這種種間聯生，顯示了在干旱脅迫環境下的種間互補。以上的研究結果顯示，聯生降低了C4植物珍珠豬毛菜在逆境下的資源獲取能力，并提高了C3植物紅砂的適應能力。

圖4 混生荒漠植物珍珠豬毛菜、紅砂葉片功能性狀與根際細菌和真菌多樣性冗余分析Fig.4 Redundancy analysis of leaf functional characters and diversity of rhizosphere bacteria and fungi of mixed desert plants Salsola passerina,Reaumuria songarica

表2 根際微生物α多樣性與混生植物葉片功能性狀相關性Table 2 Correlation between rhizosphere microbial alpha diversity and mixed plant leaf functional traits

植物葉片功能性狀與遺傳和外界環境密切相關，葉片功能性狀的變化反應出植物在特定環境下的生存策略。在嚴酷生境下，植物對資源的利用和分配尤為重要。植物依賴土壤基質生長，幾乎所有的碳水化合物、礦質元素等支撐植物生長所需要的物質都來源于根系在土壤中的吸收（Hacquard et al.，2015），所以植物根系環境對植物的影響至關重要（Motte et al.，2018）。并且植物根系在生長過程中也向土壤中分泌根際分泌物。有研究顯示，根系中根系分泌物和植物殘體占光合產物40%（Motte et al.，2018），主要以糖類化合物、有機酸、氨基酸等有機物的形式存在（Richardson et al.，2009）。根系分泌物的組成決定了根際微生物數量和結構分布（Eisenhauer et al.，2017），微生物是土壤與根系物質交互過程中的主要驅動力，即根際微生物群落通過自身的生命活動在植物根際形成微環境，進而來影響植物的生長。本文通過對C4珍珠和C3紅砂，單生和聯生植株之間的根際細菌、真菌在門水平上的分析，結果顯示，在單生植株中，C4珍珠細菌和真菌的豐富度（OTU、Chao1）均低于C3紅砂，C4珍珠和 C3紅砂種間聯生之后，珍珠紅砂根際細菌、C4珍珠豬毛菜根際真菌的豐富度和均勻度（Simpson、Shannon）大幅提高，但引起C3紅砂根際真菌豐富度和均勻度下降。細菌相對豐度（≥1%）的前十門中，變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、酸桿菌門（Acidobacteria）、綠彎菌門（Chloroflexi）、疣微菌門（Verrucomicrobia）對植物根際營養及礦質元素的吸收起重要作用。眾多研究表明，變形菌門與土壤 pH、總碳、總氮含量呈顯著正相關，放線菌門與土壤總氮含量呈顯著正相關（Nacke et al.，2011）。酸桿菌門與土壤總碳含量、氮含量和碳氮比之間呈負相關（Chroňáková et al.，2015；Will et al.，2010）。綠彎菌門與土壤總氮和鉀含量呈正相關（Sousa et al.，2020）。綠彎菌門和厚壁菌門均與纖維素降解相關。疣微菌門與土壤氮、磷、鉀、鈣和鎂的含量相關（Bao et al.，2019）。根際真菌豐度最高的前十門中，子囊菌門（Ascomycota）和擔子菌門（Basidiomycota）的豐度占總真菌的80%。子囊菌門參與土壤中纖維素的分解（Stursova et al.，2012），與土壤有機碳，總氮呈正相關關系，而擔子菌門與之呈負相關關系（Bastida et al.，2013）。有研究顯示，根際土壤細菌與真菌之間也存在互作現象。本研究發現的細菌優勢門中的變形菌門、放線菌門、厚壁菌門還可以作為輔助細菌促進真菌與植物根系共生（Frey-Klett et al.，2007）。根際微生物不僅可以影響寄主植物根系發育（Brundrett，2002），而且大多與固氮、溶磷作用密切相關，同時可以加強對植物根系對資源的獲取和利用（Bashan et al.，2010）。Adesemoye et al.（2008）通過研究微生物菌劑對玉米吸收養分中的作用，發現微生物菌劑可以增加玉米養分含量和整個植物的生長，并使土壤中氮、磷、鉀的含量降低，增強了植物對土壤養分的吸收。而土壤養分對于植物葉片性狀的影響至關重要（張慧文等，2010）。所以根際微生物在影響植物葉片功能性狀中起間接作用。植物-土壤-根際微生物之間的物質交流是一個龐大而又復雜的交互系統，同時在特定的環境下，植物葉片功能性狀是多因素共同決定的結果，葉片功能性狀也是植物適應環境的綜合權衡。

以上分析表明，聯生珍珠豬毛菜（AGSP）、聯生紅砂（AGRS）、單生珍珠豬毛菜（IGSP）和單生紅砂（IGRS）根際細菌、真菌在優勢門水平中的組成并無很大差異。而α多樣性分析顯示，C4珍珠豬毛菜和C3紅砂之間的種間聯生使得根際細菌、真菌豐富度和均勻度發生變化，這種根際微生物的變化是否可以解釋C4珍珠豬毛菜和C3紅砂種間聯生引起的葉片功能性狀的改變？通過冗余分析（RDA）和Pearson相關性分析發現，根際細菌和真菌的豐富度與均勻度均與LWP呈顯著負相關關系；SLA、SLV、LMA主要受真菌豐富度的影響，與之顯著負相關。總之，植株的聯生提高根際細菌和真菌的豐富度與均勻度，導致葉片SLA、LWP降低，增強了聯生植物在荒漠干旱環境中的抗旱能力。

4 結論

對聯生珍珠豬毛菜、聯生紅砂、單生珍珠豬毛菜和單生紅砂葉片功能性狀分析表明，C4珍珠豬毛菜總含水量（TWC）、自由水含量（FW）、比葉體積（SLV）、δ13C均顯著高于 C3植物紅砂。C4珍珠豬毛菜與C3紅砂的聯生，不僅顯著降低了兩種植物的葉水勢（LWP），而且消除了單生珍珠豬毛菜與單生紅砂比葉面積（SLA）和比葉重（LMA）的顯著性差異。同時兩種植物的種間聯生，也提高了根際土壤細菌的數量和多樣性。根際微生物與植物葉片功能性狀的相互關系表明：C4珍珠豬毛菜和 C3紅砂根際細菌和真菌的豐富度（Chao1）與均勻度（Shannon）均與葉水勢（LWP）顯著負相關；比葉面積（SLA）、比葉體積（SLV）與真菌豐富度顯著負相關。總之，C4珍珠豬毛菜和C3紅砂的種間聯生，體現了植物在嚴酷荒漠生境中的生存策略。