56 ℃ 30 min滅活標本后對腫瘤標志物和激素相關指標檢驗結果及存儲穩定性的影響

畢冬明，張 欣，楊 雪，許安春

成都中醫藥大學附屬醫院：1.核醫學科；2.檢驗科，四川成都 610000

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)為冠狀病毒β屬中的新成員，病毒傳染性強，其導致的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)已納入《中華人民共和國傳染病防治法》規定的乙類傳染病，并按甲類傳染病管理。在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》(試行第七版)[1]中明確指出：“在相對封閉的環境中長時間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經氣溶膠傳播的可能”，在多人同時工作的大空間式實驗室中，離心后開蓋產生的氣溶膠擴散范圍更廣，這有可能是導致實驗室檢驗工作者暴露并感染的潛在原因之一。如何做好實驗室生物安全防護是值得探討的問題，診療方案中提出“基于對冠狀病毒理化特性的認識研究，病毒對紫外線和熱敏感，56 ℃ 30 min可有效滅活病毒”，但滅活后標本的檢測結果是否受影響，一直是檢驗工作者關注的重點[2-3]，此前已有56 ℃ 30 min對SARS-CoV-2核酸檢測等臨床指標滅活后檢測結果是否有影響的相關研究[4]。本研究關注的是一部分特定人群，如糖尿病、高血壓、癌癥、妊娠期孕婦等人群，這類人群本身機體免疫力低下，感染風險、重癥及死亡可能性均高于普通人群，一旦感染，更容易引發急性呼吸窘迫綜合征、多器官功能衰竭等危重癥，危及生命。針對此類人群，實驗室相關指標不但包括普通患者診療所需常規項目，還包括自身疾病或普通患者需求的其他特殊項目，如腫瘤標志物、激素等檢測項目。本研究一方面研究腫瘤標志物、激素相關指標檢驗標本經過56 ℃ 30 min滅活后結果的變化并且探討產生變化的原因，另一方面研究標本穩定性是否因滅活而發生變化，進而影響實驗室復核工作。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年2月21日本院普通住院患者30例送檢血清(促凝劑)標本，無脂血、溶血，覆蓋高、中、低濃度。30例患者中，糖尿病患者10例，腫瘤標志物患者10例，妊娠期孕婦10例。驗證項目為(1)甲狀腺激素：甲狀腺素(T4)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、血清抗甲狀腺過氧化物酶(A-TPO)，促甲狀腺素受體抗體(Anti-TRab)、甲狀腺球蛋白(TG)、甲狀腺降鈣素(HCT);(2)性激素：催乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)、黃體酮(P)、睪丸素(T)、β-人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)；(3)腫瘤標志物：甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、鐵蛋白(Fer)、血清糖類抗原(CA)125、CA199、CA153、CA724、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、細胞角蛋白19片段(CYFRA-211)、前列腺特異抗原(PSA)、游離前列腺特異抗原(fPSA)、胃泌素釋放肽前體(ProGRP)、人附睪蛋白4(HE4)；(4)胰島素功能：胰島素(INS)、C肽(C-P)。并檢測在非溶血狀態下滅活前后NSE、INS、CYFRA-211的水平。

1.2儀器 羅氏COBAS e601電化學發光儀。

1.3標本處理 滅活前后項目結果驗證:標本放入事先設定好的56 ℃干浴箱內，放置30 min滅活后檢驗所有項目。測定完后，保存至2～8 ℃冰箱，在穩定期的最后時限內，復查所有項目,驗證滅活標本的穩定性。NSE、INS、CYFRA-211非溶血狀態下滅活前后驗證:先分離血清進行檢驗，檢測后放置在56 ℃ 30 min干浴箱中滅活，再次檢驗，比較滅活前后3個指標的水平變化。

2 結 果

2.1滅活前后結果比較 滅活前INS、CYFRA-211水平低于滅活后，滅活前NSE水平高于滅活后，差異有統計學意義(P<0.05)，其他所有項目差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2滅活后標本檢驗結果回收率 滅活后的所有項目回收率在90%～110%，所有滅活標本在存儲條件不變的情況下穩定性無差異。見表2。

2.3NSE、INS、CYFRA-211在非溶血狀態下滅活前后結果比較 在非溶血狀態下，滅活前后NSE、INS水平變化，差異無統計學意義(P>0.05)，CYFRA-211水平差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表1 滅活前與滅活后檢驗指標比較

續表1 滅活前與滅活后檢驗指標比較

表2 檢驗項目的保存時效及滅活后檢驗結果回收率

表3 NSE、INS、CYFRA-211在非溶血狀態下滅活前后結果比較

3 討 論

糖尿病患者發生COVID-19的風險更高，病情更為嚴重，一篇關于41例COVID-19感染者的研究發現，32%的感染者合并其他疾病，位居前3位的分別為糖尿病(20%)、高血壓(15%)、心血管疾病(15%)[7]。2020年2月7日，JAMA上發表的138例COVID-19肺炎患者的回顧性研究顯示，64例(46.4%)有1種或以上的基礎性疾病，其中14例(10.1%)合并糖尿病[8]。而妊娠期孕婦由于妊娠引起心肺負荷增加，感染后病情可能會更加危重，導致嚴重的不良妊娠結局，甚至引起孕婦及圍生兒死亡[9]。醫院是人流的集散地，也是感染的重災區，但大多數腫瘤患者又常需到醫院進行常規化療或隨診復查，加之腫瘤患者機體免疫力低下，成為COVID-19的最易感人群。在COVID-19疫情下，檢驗項目更要保證結果不受影響及標本穩定性良好，確保復核標本不受干擾。

本研究使用的檢驗方法為免疫學中的電化學發光法，為抗原抗體結合反應，針對有糖尿病、高血壓等基礎疾病、孕婦及腫瘤等疑似COVID-19患者主要檢驗腫瘤標志物和激素等臨床指標。診療指南推薦滅活方式為56 ℃ 30 min，在此狀態下，可能使蛋白質發生變性，使抗原抗體結合出現異常。經過本研究驗證，只有NSE、CYFRA-211、INS水平在滅活前后出現變化，其他檢驗指標滅活前后水平及穩定性均無變化，證明滅活對抗原抗體結合位點、蛋白質活性或免疫原性沒有影響。

NSE和INS這兩項指標檢驗結果受影響因素較多，影響最大的就是溶血[10-12]。在高溫滅活的過程中，紅細胞發生膨脹，變形性降低[13],導致紅細胞膜破壞。本研究結果顯示，NSE和INS水平在非溶血狀態下滅活前后無變化，但CYFRA-211水平出現了較大變化。由此推斷，NSE水平升高是由于紅細胞破裂導致細胞內NSE釋放入血升高，INS降低也是由于紅細胞破裂釋放胰島素降解酶(IDE)[14]，IDE會高效、特異地降解胰島素。而CYFRA-211是細胞角蛋白的19片段，是一種可溶性酸性多肽，相對分子質量約為40 000，推測由于高溫變性導致蛋白或蛋白結合位點變性，使結果有顯著差異，此推斷有待進一步研究。

檢驗工作者在接收檢驗腫瘤及激素標本后可針對性處理，嚴格按照實驗生物安全操作指南進行檢驗，在對滅活前后檢測結果無顯著差異的項目標本進行56 ℃ 30 min滅活；有影響的項目，有條件的實驗室應在生物安全柜里進行無害化處理后，才能進行檢驗，沒有條件的應提前告知臨床結果可能受影響。盡量降低檢驗人員職業暴露和感染風險，防止實驗室污染，為臨床提供準確的檢驗結果，更高效地服務于臨床COVID-19防治救治工作。