木霉與殺菌劑對碧玉疫病菌的活性研究

何俊烺 王茜茜 程東美

摘 要：為探明木霉菌與藥劑聯用對碧玉疫病菌的抑制效果，本文采用對峙培養法測定了哈茨木霉（Trichoderma huzirum）與綠色木霉（T. virid）對碧玉疫病病菌的抑制作用;采用含毒質培養法測試了幾種殺菌劑對木霉的相容性;采用離體葉片法測試了木霉與殺菌劑聯合對病菌的抑制作用。結果表明：2種木霉對碧玉疫病菌均有較好抑制作用，對峙培養后72h的相對抑制效果分別為59.91%和54.31%;5種藥劑對比中，雙炔酰菌胺均與2種木霉的表現較高的相容性，EC50分別為5985.38g·mL-1和4604.5SymbolmA@ g·mL-1，烯酰嗎啉次之;2種木霉與烯酰嗎啉聯合對碧玉疫病在預防和治療作用中均取得較好抑制效果，抑制作用抑菌率最高達到85.78%，預防作用中抑菌率最高為90.52%。哈茨木霉或綠色木霉對碧玉疫病菌具有一定抑制作用和預防作用，與烯酰嗎啉聯用，毒力可得到明顯提高，抑制和預防效果比單獨使用木霉或藥劑要好。

關鍵詞：木霉;殺菌劑;碧玉疫病;聯合抑制

中圖分類號：S436.8 ? ? ? 文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20201030012

碧玉（Peperomia tetraphylla （Forst. f.）Hook.et Arn.）為胡椒科植物，屬常綠多年生草本植物，葉片肥厚。目前在中國，廣東等地區已經開始大量生產，在各處花卉市場均能見到。碧玉植株高25cm以上，葉互生，基部楔形或突然變狹，穗狀花序，圓形至倒卵狀卵圓形，先端圓至微凹，果實具銳尖盤曲的喙[1]。碧玉疫病一直是碧玉一種危害嚴重的疾病。近年來，廣州地區的這種情況逐漸加劇，造成了嚴重地品質和產量損失。由于碧玉疫病抗病性育種的困難性大，農藥防治仍然是短時間內防治碧玉疫病的首選方法。在繼續利用好現有的殺菌劑來控制疫病的同時，應大力發展新型、高效、低殘留的殺菌劑和生物源殺菌劑。

為觀賞植物的養護和保護提供有益參考，改善觀賞植物病害的防治措施，本試驗測試了綠色木霉和哈茨木霉對碧玉疫病的拮抗效果，并選擇對木霉菌相容性較好的殺菌劑進行協同使用，測試其聯合的抑制作用和預防作用。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 病原菌

自廣州市白云區鐘落潭鎮白云現代農業示范基地感病碧玉上分離并保存，經鑒定為疫霉菌（Phytophthora.sp）。

1.1.2 木霉菌

哈茨木霉（Trichoderma huzirum）和綠色木霉（Trichoderma virid）均購自山東綠隴生物科技有限公司。

1.1.3 供試藥劑及濃度

80%三乙膦酸鋁WP（利民化工股份有限公司），68%精甲霜·錳鋅WDG（瑞士先正達作物保護有限公司），50%醚菌酯（翠貝）WDG（德國巴斯夫公司），23.4%雙炔酰菌胺SC（先正達南通作物保護有限公司），50%烯酰嗎啉WP（巴斯夫歐洲公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 木霉對碧玉疫病菌的抑制作用

試驗采用對峙培養法，參考牛勝芳[2]等采用的方法，取活化后直徑為5mm的碧玉疫病菌菌餅和木霉菌菌餅，分別接種于PDA平板距中心2cm處同一直線的兩點上，對照只接木霉菌或碧玉疫病菌，每個處理3個重復，于28℃恒溫培養，處理后48h和72h后分別測量疫霉菌和哈茨木霉菌落連線的半徑。

被抑菌率（%）=[（對照菌落半徑-菌落趨向半徑）/單獨培養菌落半徑]100[2]

相對抑菌率（%）=（病原菌被抑制率/木霉菌被抑制率） 100[3]

1.2.2 5種殺菌劑與2種木霉菌的相容性

采用菌絲生長速率法[4]，準確量取各供試藥劑母液，分別以無菌水配制供試濃度50倍藥液，取1mL稀釋后藥液加入冷卻至約50℃的49mL定量PDA中，混勻后制成含藥平板，在平板中央接種一個木霉菌餅，每濃度重復3次，以無菌水處理為對照（CK）。28℃恒溫培養2d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算毒力回歸方程、EC50和相關系數。

1.2.3 木霉與烯酰嗎啉對碧玉疫病菌協同抑制作用

采用離體葉片法[4]測定木霉菌與殺菌劑聯合對碧玉疫病菌的抑制作用。用清水按照木霉制劑的推薦濃度分別稀釋為哈茨木霉100倍液、300倍液和綠色木霉200倍液、600倍液;烯酰嗎啉按照推薦濃度配制稀釋濃度為500g·mL-1、333.3g·mL-1備用。選取新鮮并且長勢旺盛的碧玉葉片，用手持噴霧器均勻地將菌懸液噴霧噴至葉片背面，用脫脂棉包裹葉柄保濕，置于鋪有濾紙保濕的培養皿中，晾干后25℃恒溫箱中恒溫培養1d。將處理后分為2部分，部分葉片背面分別均勻噴霧不同濃度的藥液，放入培養皿中晾干，然后在葉片背面葉脈處接種3個疫霉病菌菌餅，做保護作用試驗;其余葉片背面葉脈處接種3個疫霉病菌菌餅，于25℃恒溫培養箱1d，而后分別均勻噴灑不同濃度的藥液于葉片背面，放入培養皿中晾干，做治療作用試驗。以清水處理、單獨用藥液和木霉菌懸液處理的葉片為對照，每個濃度重復3次。所有處理均于25℃培養3d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算抑制率。

1.2.4 數據處理及分析

本試驗的數據采用EXCEL 2010進行計算。

3 結果與分析

3.1 木霉菌對碧玉疫病菌的抑制作用

2種木霉菌對碧玉疫病菌均有抑制作用（表1），相對抑制效果隨時間增加而增大，處理72h后，2種木霉對碧玉疫病菌的抑制率分別為36.26%和34.16%，相對抑制效果分別為59.91%和54.31%，綠色木霉效果更好。

3.2 殺菌劑對木霉的相容性

幾種殺菌劑對2種木霉相容性測定結果（表2）表明，醚菌酯對哈茨木霉毒性低，而SymbolmA@ g·mL-1。

3.3 木霉和烯酰嗎啉對碧玉疫病菌的協同防治作用

選擇木霉敏感性中等的烯酰嗎啉為供試藥劑，與2種木霉對碧玉疫病菌聯合抑菌作用，結果見表3。單用2種木霉制劑或藥劑的預防作用優于治療作用，抑制均達到80%以上，木霉制劑和烯酰嗎啉聯用對病菌的防效高于單用藥劑的防效，且預防作用優于治療作用，高濃度藥劑聯用的預防作用的防效達到90.52%，而治療作用的防效達到85.78%。低濃度聯用木霉和藥劑的預防作用防效稍優于高濃度單用藥劑的預防作用防效，但治療作用防效不及高濃度單用藥劑的治療作用防效。

4 結論與討論

木霉是植物病害防治中應用和研究非常廣泛的一類生防真菌，能夠有效抑制多種植物病原菌，利用其制劑進行病蟲害防治具有對推廣生物防治和減少化學農藥殘留對環境的污染等重要意義[5]，對于馬鈴薯、辣椒、黃瓜等多種植物疫病具有抑制作用[6-8]。疫霉菌不僅會侵染蔬菜從而造成危害，還可危害百合、蘭花、蟹爪蘭、白掌等花卉植物[9，10]。木霉菌對辣椒疫霉菌和煙草疫霉菌的生長具有抑制作用[11，12]，哈茨木霉對辣椒疫霉菌菌絲的平均抑制率達69.1%[13];郭敬[14]等試驗證明哈茨木霉可與烯酰嗎啉聯合施用防治煙草黑脛病。生防菌不僅可以抑制病原菌的生長，而且有促進植物生長的作用;但受環境條件、使用方法等影響，防效不穩定[14]。本文研究結果表明：2種木霉菌對碧玉疫病具有一定抑制作用，綠色木霉處理后72h的抑菌率最高達36.26%，相對抑制效果為59.91%，稍好于哈茨木霉;烯酰嗎啉對2種木霉菌均有較好的相容性。為提高抑菌效果，降低使用化學藥劑的使用量，達到一定程度保護環境的目的，利用離體葉片法測試了木霉與烯酰嗎啉聯合抑菌作用，聯用條件下，高濃度使用下的預防作用的防效達到90.52%，優于治療作用的防治效果，且明顯高于高濃度單用藥劑的效果，表明具有明顯正協同作用。此外，低濃度聯用木霉菌合藥劑的防效達到甚至優于高濃度單用藥劑的效果。本文試驗結果證明，烯酰嗎啉可以和供試生防菌株聯合施用防治碧玉疫病，為碧玉疫病的防治提供了一個選擇。

參考文獻

[1] 陳少萍.豆瓣綠栽培管理[J].中國花卉園藝，2012（22）：22-23.

[2]牛芳勝，馬志強，畢秋艷，張小風，王文橋，韓秀英，張利輝.不同作用機制殺菌劑對番茄灰霉病菌拮抗木霉菌的毒力測定[J].農藥，2012，51（08）：601-604.

[3]祁金玉，高國平，王一，等.兩種木霉生防菌對松落針病病原菌抑制作用研究[J].中國森林病蟲，2014，33（01）：14-16.

[4]牛芳勝.哈茨木霉菌與5種殺菌劑聯合對番茄灰霉病菌的協同作用及增效機制研究[D].保定：河北農業大學，2013.

[5]尤佳琪，吳明德，李國慶.木霉在植物病害生物防治中的應用及作用機制[J].中國生物防治學報，2019，35（06）：966-976.

[6]楊立賓，宋瑞清，鄧勛，高宇.致病疫霉生防木霉菌株篩選鑒定及生物學特性[J].東北林業大學學報，2013，41（07）：118-122，128.

[7]姚彥坡.防治馬鈴薯晚疫病和辣椒疫病木霉菌的篩選及生防機制研究[D].北京：中國農業大學，2015.

[8]孫莉，王雅菲，魏潤潔，李沛，易圖永.我國黃瓜疫病生物防治研究進展[J].現代農業科技，2015（07）：143-144，147.

[9]郭翠娥.花卉疫病的發生與防治措施[N].中國花卉報，2018-11-06（S04）.

[10]張云霞，曾莎芮，黃耀華，陳燦鈿，程東美，向梅梅.白掌疫病病原菌的鑒定[J].熱帶作物學報，2019，40（06）：1171-1175.

[11]張愛民，韓世玉，楊紅，蓬桂華，邢丹.辣椒疫霉菌拮抗木霉菌株的分離與初步篩選[J].貴州農業科學，2014，42（06）：87-90.

[12]李小杰，李成軍，姚晨虓，宋瑞芳，劉暢，邱睿，陳玉國，白靜科，李淑君.拮抗煙草疫霉菌的木霉菌株篩選鑒定及防病促生作用研究[J].中國煙草科學，2020，41（03）：65-70.

[13]羅曉華.雅安郊區辣椒生長期土壤中木霉種群分布及其對辣椒疫霉病的生防研究[D].雅安：四川農業大學，2003.

[14]郭敬，湯玲玲，趙世民，李淑君，康業斌.煙草病原菌及其生防菌株對烯酰嗎啉的敏感性[J].河南農業科學，2020，49（04）：87-92.

（責任編輯 周康）