血液乙醇濃度檢測中未知物干擾1例

許龍慧，馬紅娟，王團樂，展長淑，韓立峰

(浙江迪安司法鑒定中心，浙江 杭州 310012)

隨著醉酒后駕駛機動車被列為刑事犯罪，人體血液中乙醇濃度的測定值作為認定車輛駕駛人員是否酒后駕駛或醉酒駕駛的依據。針對酒后駕駛血中乙醇含量的測定，司法鑒定機構都是采用GA/T 1073-2013《生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法》[1]對所送檢材進行乙醇定性定量分析。該方法是以待測物質與內標物的峰面積比值為縱坐標，以兩者濃度比值為橫坐標做工作曲線，對樣品定性定量測定。檢測過程中若出現干擾物，內標物與干擾物未良好分離，則會造成雙柱檢測結果差異較大。若實際乙醇濃度接近于法定閾值，干擾物對鑒定結果產生極為不確定的影響，嚴重影響司法鑒定的公正性。

1 案情簡介

2019年11月30日，王某駕駛一輛面包車在某地發生一起交通事故，警方委托本單位對王某靜脈血中乙醇含量進行檢測。檢材外包裝有封條，有簽名，血液5 mL，無凝血、無滲漏。

2 檢驗過程

遵守和采用GA/T 1073-2013《生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法》[1]對所送檢材進行乙醇定性定量分析。

2.1 標準溶液配制日期及有效期

(1)乙醇(80 mg/100 mL)配制日期：2019年10月21日；有效期至2020年1月20日。配制過程：精確稱取200.0 mg無水乙醇(99.9%，色譜純)于250 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。

(2)叔丁醇(40 μg/mL)配制日期：2019年10月21日；有效期至2020年1月20日。配制過程：精確稱取500.0 mg叔丁醇(99.5%，色譜純)于50 mL容量瓶中，添加超純水至刻度，混勻，得10 mg/mL叔丁醇儲備液。取4 mL該儲備液于1000 mL容量瓶中，超純水定容至刻度。

2.2 樣品處理

(1)精密吸取檢材血100 μL兩份，分別置于20 mL頂空樣品玻璃瓶中，各加500 μL叔丁醇內標(40 μg/mL)，用專用瓶蓋和內襯密封，混勻，65 ℃加熱10 min，取1 mL液上氣體進樣。

(2)同時精密吸取80 mg/100 mL乙醇標樣兩份、1 mg/100 mL乙醇標樣一份及空白血一份，每份各100 μL，分別置于頂空樣品玻璃瓶中，剩余步驟同“1”操作。

2.3 儀器條件

儀器型號：Agilent HS-GC(7697A-7890B)(設備編號：DASF-D-083)；

色譜柱：柱1：DB-ALC1(30 m×0.32 mm×1.8 μm)；柱2：DB-ALC2(30 m×0.32 mm×1.2 μm)；

柱溫：40 ℃，保持3.0 min；進樣口溫度150 ℃；檢測器溫度250 ℃；

氮氣流速：5 mL/min；空氣流速：400 mL/min；氫氣流速：30 mL/min；FID檢測器×2；

頂空進樣器：爐箱溫度65 ℃；加熱時間10 min；閥箱溫度105 ℃；定量管體積1 mL；管路溫度110 ℃。

2.4 工作原理

利用乙醇的易揮發性，用頂空-氣相色譜/氫火焰離子化檢測器(HS-GC/FID)進行檢測；經與平行操作的對照品比較，以保留時間進行定性分析；以峰面積為依據，采用內標法[2]定量測定。

3 檢驗結果

柱1和柱2色譜條件下均檢出乙醇成分，相關色譜圖見圖1；柱1條件下的定量平均值為305.6 mg/100 mL，柱2條件下的定量平均值為352.9 mg/100 mL。但在柱2條件下檢出未知峰，分離度較好；在柱1條件下未知峰與內標峰未分離，導致內標峰面積受到干擾。本鑒定中乙醇的測定采用內標定量法，柱1內標峰在未知物的干擾下導致其峰面積明顯增高，乙醇峰面積與內標峰面積的比值明顯降低(表1)，導致乙醇定量結果偏低，因此柱1條件下的定量結果不準確。在柱2條件下，采用內標法進行定量，兩次測定的平均值為最終結果，乙醇含量為352.9 mg/100 mL。

圖1 乙醇及叔丁醇的中頂空氣相色譜圖

表1 血液中乙醇和叔丁醇的檢測濃度/(mg/100 mL)

4 分析及結論

所送檢材經處理后運用頂空-氣相色譜方法分析，雙柱均出現乙醇的特征色譜峰，在柱2條件下檢出另一種未知物質，但該物質在柱1條件下與內標叔丁醇的保留時間重疊，無法分離，導致內標峰面積增加，從而使乙醇測定值降低，對乙醇的定量結果發生了干擾，因此，在本案的檢測方法中，柱1條件下對乙醇的定量結果不準確。在柱2條件下，采用內標法進行定量，兩次測定的平均值為最終結果，乙醇含量為352.9 mg/100 mL。

氣相色譜法的定性分析[3]是通過在相同的色譜分析條件下，對比組份的出峰時間(保留時間)來實現的，是一種對照判斷式定性，前提是假設組份被完全分離。但實際上有很多物質會有相同的保留時間，有相同保留時間也不一定是相同的物質。生物樣品中有許多內源性揮發性物質會干擾目標物檢測，色譜法用作定性指標的保留時間缺乏專屬性。因此，實際工作中，并無法確定那一個峰中到底是一個組份還是有幾個組份沒有完全分離。用雙柱雙檢測器定性確證，就可以防止類似干擾。

2016年，文迪等[4]在對兩例血液乙醇濃度檢測中，均檢出了丙酮成分，丙酮與叔丁醇的保留時間重合導致內標峰面積增加。因此，本文所述案例并非個案，檢測過程中若出現未知色譜峰，尤其檢測乙醇含量接近20 mg/100 mL和80 mg/100 mL[5]時，應通過雙柱法將其排除再進行乙醇濃度定量分析。對實驗過程中主要影響因素加以有效地控制，確保血液中乙醇檢測結果的準確、可靠，希望本案例可以對司法鑒定人員在實際工作中有所幫助。