兩頭尖不同炮制品中竹節(jié)香附素A含量的比較

周興卓，劉洪玲，丁媛媛

(青島大學附屬醫(yī)院，山東 青島 266000)

兩頭尖，又名竹節(jié)香附，系毛茛科銀蓮花屬植物多被銀蓮花的干燥根莖。多夏季采挖，除去須根，洗凈，干燥。辛，熱，有毒[1]。具有祛風濕，消癰腫之功效[2]，有抗腫瘤、抗驚厥、抗炎等作用[3-5]，主要含有三萜皂苷、揮發(fā)油等成分，其中竹節(jié)香附素A是發(fā)揮抗腫瘤活性的主要成分[6-9]。

《中國藥典》(2015版)中記載兩頭尖藥材具有一定的毒性，每次用量為1～3 g。據報道[10]，小鼠灌胃毒性實驗表明，兩頭尖水提物LD50為104.50 g/kg，按照中藥毒性分級，兩頭尖藥材毒性介于“中毒”和“小毒”之間。鑒于有毒中藥經過合理炮制后可降低毒性，提高藥用的安全性。本文以竹節(jié)香附素A為測定成分，建立兩頭尖藥材中竹節(jié)香附素A的含量測定方法，并采取酒制、鹽制、醋制等不同方法對兩頭尖藥材進行炮制，比較炮制前后竹節(jié)香附素A含量的變化，為后續(xù)降低兩頭尖藥材毒性，提高藥用安全的研究提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent液相色譜儀；CPA225D型電子天平；KQ-500DE型超聲波清洗機。

1.2 試 藥

竹節(jié)香附素A(批號20162416)對照品，兩頭尖藥材(批號20130710)；炮制品由實驗室自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以Hanbon-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱，以206 nm為檢測波長，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，流動相為乙腈-0.1%的甲酸水(53:47)溶液，進行等度洗脫，進樣量均為10 μL。結果見圖1和圖2。

圖1 高校液相色譜圖(1-竹節(jié)香附素A)

圖2 不同炮制品HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品的制備

精密稱取5.12 mg對照品竹節(jié)香附素A，置于5 mL容量瓶中，加入甲醇，定容至刻度，搖勻，得1.024 mg·mL-1的對照品溶液。

2.2.2 供試品的制備

取兩頭尖及其不同炮制品藥材，粉碎。精密稱取2.0 g兩頭尖及其不同炮制品藥材，分別置于100 mL的錐形瓶中，分別加入70%的乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min后過濾，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至10 mL，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系

精密吸取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10 mL的“2.2.1”項下對照品溶液，分別置于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至10 mL，即得不同濃度的對照品溶液。再按“2.1”項色譜條件吸取10 μL進行進樣分析，以峰面積Y對進樣濃度X進行回歸方程計算，結果竹節(jié)香附素A在質量濃度為25.60～1024 μg·mL-1內與峰面積呈良好的線性關系：Y=336.07X-10.85，r=0.9998。

2.3.2 精密度試驗

取“2.2.1”項下溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結果峰面積RSD為0.85%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗

按“2.2.1”項下方法制備6份平行供試品，按“2.1”項下色譜條件測定，測定峰面積。結果峰面積RSD為2.08%，表明方法重復性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、24 h下進行測定，結果峰面積值RSD=1.94%。表明溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗

精密稱取1.0 g兩頭尖藥材，6份，按1:1的比例加入對照品，按“2.2.1”項進行測定，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收實驗(n=6)

2.3.6 樣品含量測定

按“2.2.1”項下方法制備兩頭尖及其不同炮制品的供試品溶液，每批均平行制備3份，按“2.1”項下色譜條件對其進行含量測定，結果見表2。

表2 樣品的含量測定(n=3)

3 結 論

兩頭尖有效成分竹節(jié)香附素A的含量隨炮制而變，其中酒制品和醋制品中竹節(jié)香附素A的含量明顯升高，由兩頭尖原藥材的0.223%升至酒制品的0.349%和醋制品的0.657%。而炒黃品中竹節(jié)香附素A的含量則略有降低，由0.223%降至0.139%。雖然經過不同炮制，毒性降低了，但其中含有的有效成分含量也會發(fā)生變化，不同的炮制方法其所含有的成分不盡相同，其臨床配伍使用也有所差異。本實驗通過建立簡便的竹節(jié)香附素A含量測定方法，比較炮制前后兩頭尖的竹節(jié)香附素A含量差異，為后續(xù)加選擇使用兩頭尖藥材提供較好選擇依據。