高效液相色譜法測定降糖藥格列喹酮片中格列喹酮的含量

倫琦星 高曉潔

（1.河南省食品藥品審評查驗中心審評一科，河南鄭州，450000；2.鄭州市中醫院制劑室，河南鄭州，450000）

在普通群眾的眼中，糖尿病顧名思義就是尿中的糖分過高。糖尿病其實本身并不可怕，可怕的是糖尿病帶來的嚴重并發癥。例如糖尿病足、糖尿病腎病、糖尿病心血管疾病、腦血栓、白內障等，這些并發癥都影響甚至是嚴重威脅人類的生活質量和生命安全[1-2]。目前，治療糖尿病主要為注射胰島素和口服降糖藥物兩種方法。相對來說，口服降糖藥為更多的糖尿病患者所選擇。格列喹酮片是第二代口服磺脲類降糖藥，在臨床上應用廣泛[3-4]。《中國藥典》（2015年版）第二部[5]中規定，在測定格列喹酮片中格列喹酮片的含量時，采用的是紫外-可見分光光度法，對于該方法的影響因素較多。因此，隨著檢測技術的發展以及高效液相色譜技術檢測的大量普及，提供了一種靈敏度高，簡便快捷準確的測定方法。因此，本文通過高效液相色譜法來測定甲苯磺丁脲片中的甲苯黃丁脲含量。測定結果顯示，該本方法具有準確度高，重復性好，操作簡便，樣品穩定性好的特點。現將實驗報告如下。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀（Empower 3工作站，2998二極管陣列檢測器），賽多利斯GL2202i電子分析天平，F-008S型超聲波清洗器（深圳福洋科技集團有限公司）。

1.2 試劑

格列喹酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100280-201403）；異喹啉物對照品（中國食品藥品檢定研究院，100846-201102），色譜純乙腈（MACKLIN），色譜純磷酸（南京化學試劑股份有限公司），分析純磷酸二氫鈉（蘇州市久恒化工有限公司），水為超純水。格列喹酮片（吉林金恒制藥股份有限公司，批號：190501、181002、180701）。

1.3 方法

1.3.1 液相色譜條件

shimadzuInertSustainAQ-C18液相色譜柱（4.6×250mm，5μm），乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調pH至4.5）（65：35）為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為232nm，進樣體積為10μL，柱溫箱為 30℃。

1.3.2 對照品貯備液和對照品溶液的制備

精密稱取上述的格列喹酮對照品約25mg，置于100mL容量瓶中，加入適宜的流動相，超聲溶解后，用流動相稀釋至刻度后作為供試品貯備液待用。取供試品貯備液5mL，置于25mL的容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液待用。

1.3.3 供試品溶液的制備

取格列喹酮片20片，精密稱定后，研細，取細粉（以格列喹酮計50mg）置于100mL的容量瓶內，加流動相超聲溶解后，用流動相定容至刻度，過濾，取續濾液10mL～100mL的容量瓶內，用流動相定容至刻度，待用。

1.4 結果計算

以格列喹酮的峰面積按外標法計算，即得。

2 結果

2.1 系統適用性實驗

取格列喹酮對照品和異喹啉物對照品各約10mg，置于同一200mL的容量瓶中，加流動相溶解后并定容至相應的刻度，按照文中上述的色譜條件進樣，實驗結果符合《中國藥典》2015年版的相關規定。色譜圖見圖1。

圖1 系統適用性色譜圖

2.2 線性關系實驗

精密量取上述的對照品貯備液 1mL、2mL、3mL、5mL、10mL分別置于100mL的容量瓶中，用流動相稀釋至相應的刻度，按照上述的色譜條件進行實驗，記錄其色譜圖。以峰面積(Y)對濃度（X）進行回歸分析，可得回歸方程為Y=5695X+2142（r=0.9999），結果表明格列喹酮在21.23～137.52μg/mL的濃度范圍內線性關系較好。

2.3 精密度實驗

取文中上述配置的對照品溶液，按照文中上述的方法連續進樣六次，記錄其色譜圖，通過計算可得RSD為0.57%（n=6），結果表明，在該設置的條件下，格列喹酮精密度良好。

2.4 重復性實驗

取批號為190501的樣品6份，按照“1.3.3”項下的條件配置成供試品溶液，按照文中上述的色譜條件分別進樣，根據格列喹酮的峰面積計算結果。結果顯示供試品的RSD為0.45%（n=6）。結果顯示供試品重復性良好。

2.5 穩定性實驗

取批號為190501的樣品，按照文章“1.3.3”中的條件，配置成供試品溶液，室溫下放置。分別在 0h、2h、5h、9h、12h、24h 分別取樣，取樣后立即進樣，記錄其色譜圖，根據格列喹酮的峰面積計算其RSD為0.65%。結果證明，供試品溶液在室溫下24h穩定。

2.6 回收率實驗

取已知濃度的、批號為190501的樣品6份（每份約含格列喹酮50mg），按照文中上述的條件制成供試品溶液，另取格列喹酮對照品6份，分別加入上述供試品溶液，按設置的色譜圖條件進樣，以格列喹酮的峰面積計算其回收率。見表1。

2.7 樣品含量測定

取批號為190501、181002、180701的三批樣品，按照文中設置的條件分別制成供試品溶液后，按設置的條件進樣。另取批號為190501、181002、180701的三批樣品，按照《中國藥典》（2015年版）中規定的紫外-可見分光光度法測定格列喹酮的含量。將這兩種方法測定的結果進行比較。結果表明，這兩種實驗方法結果基本一致。見表2。

表1 格列喹酮回收率實驗結果

表2 不同實驗方法測定格列喹酮的實驗結果

3 討論

通過前期查詢文獻發現，流動相有用甲醇、乙腈、水、緩沖鹽等系統，通過實驗發現，流動相在乙腈和磷酸二氫鈉的組合條件下，得到的色譜峰，峰形較好，出峰時間較快，分離度符合藥典要求。

通過實驗可知，使用液相和紫外檢測，所得的結果基本一致。但液相可以更準確的檢測比較難分離的物質，因此，本文可以為格列喹酮片的含量測定提供一種新的檢測方法。