甘藍中蟲螨腈及其代謝物的殘留檢測

孫豐收，羅媛媛，張文文，孫 奇，柏 楊，慕 衛*

(1.山東農業大學植物保護學院，山東 泰安 271018；2.山東農業大學農藥環境毒理研究中心，山東 泰安 271001；3.農業農村部農藥檢定所，北京 100125)

蟲螨腈(chlorfenapyr)又名溴蟲腈，是美國氰胺公司開發的新型吡咯類殺蟲劑，其通過昆蟲體內多功能氧化酶作用于線粒體，干擾呼吸鏈上電子傳遞從而影響昆蟲體內能量代謝，對同翅目、鱗翅目等多種昆蟲有良好防效，尤其對甜菜夜蛾、小菜蛾、斜紋夜蛾等害蟲防治顯著，因其殺蟲譜廣、殺蟲效果好和作用機理獨特而廣受關注[1～4]。

2018年JMPR評估了蟲螨腈殘留物膳食評估定義，確定為蟲螨腈和其代謝物溴代吡咯腈(tralopyril)10倍之和，雖然溴代吡咯腈在殘留物中的所占比重較低，但其毒理學效應因子為蟲螨腈的10倍[5]，所以其對食品安全可能產生較大的風險。

目前我國蟲螨腈登記的作物有甘藍、大白菜、豆角、柑橘、黃瓜、梨、蘋果、小白菜、豇豆、茶等作物，在甘藍上登記產品的數量占總登記產品數量的70%以上[6]，國內報道的蟲螨腈在蔬菜[7-9]、水果[10-11]、茶[12-13]等基質中的殘留檢測多采用液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)和氣相色譜-串聯質譜(GC-MS/MS)等方法，溴代吡咯腈報道的檢測方法有液相色譜(HPLC)法[14]，溴代吡咯腈在甘藍上的殘留檢測方法未見報到。在現有報道基礎上，本試驗研究建立了蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈在甘藍中的殘留檢測方法，為蟲螨腈在甘藍上的殘留監測、膳食風險評估及合理使用提供依據。

1 實驗部分

1.1 主要儀器 超高效液相色譜-串聯質譜儀；氣相色譜-串聯質譜儀(TSQ 800 EVO)；萬分之一電子天平(BSA124S-CW)；百分之一電子天平(YP-5102)；漩渦混合儀(MTV-100)；高速離心機(HC-2517)；低速離心機(SC3612)；氮吹儀(SE812-J)；移液器；0.22μm有機濾膜等。

1.2 主要試劑 乙腈、甲醇，色譜純；甲酸，色譜純；高溫蒸餾水；氯化納，分析純；無水硫酸鎂，分析純；PSA；多壁碳納米管。

98.1%蟲螨腈標準物質；99.3%溴代吡咯腈標準物質。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取 稱取10.00g勻漿后的甘藍樣品，加入20.0mL乙腈旋渦震蕩3min，加入3.00g氯化鈉、2.00g無水硫酸鎂，旋渦震蕩3min，以4 000r/min離心2min，上清液待凈化。

1.3.2 凈化 檢測蟲螨腈時，取上述上清液1.500mL加入2mL離心管(內含50mg PSA、150mg無水硫酸鎂和5mg多壁碳納米管)，旋渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，取上清液氮吹至近干，用二氯甲烷復溶并稀釋5倍，過0.22μm有機濾膜，進行GC-MS/MS檢測。

檢測溴代吡咯腈時，取上述上清液1.500mL于2mL離心管，加入50mg PSA、150mg無水硫酸鎂和5mg多壁碳納米管，旋渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，取上清液稀釋5倍，過0.22μm有機濾膜，進行UPLC-MS/MS檢測。

1.4 檢測條件 檢測蟲螨腈時，使用GC-MS/MS進行檢測，參考儀器條件：

色譜柱：EVO TSQ 8000 TG-5MS柱(30.0m×0.25mm，0.25μm)；程序升溫：初始溫度100℃，保持1min,以30℃/min 升溫至280℃，保持5min；載氣：He，純度：99.999%；柱流量：1.2mL/min；進樣體積：1μL；進樣方式：不分流；離子源：EI；檢測器電壓：70V；進樣口溫度：280℃；離子源溫度：300℃。監測模式：SRM，監測條件(表1)；

表1 質譜監測參數

檢測溴代吡咯腈時，使用UPLC-MS/MS進行檢測，參考儀器條件：

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱，2.1×50mm，1.7μm；流動相：A為甲酸水(0.05%)溶液，B為甲醇，梯度洗脫程序(表2)；柱溫：35℃；流速：0.3mL/min；進樣體積：1μL；

表2 梯度洗脫程序(VA + VB)

離子源：電噴霧離子源(ESI)，負離子模式；監測模式：多反應離子監測(SRM)，監測條件(表3)；噴霧電壓：3 500V；脫溶劑溫度：350℃；離子傳輸管溫度：325℃；鞘氣壓力50Arb；輔助氣壓力為10Arb。

表3 質譜監測參數

相關譜圖(圖1、圖2)。

圖1 蟲螨腈標樣0.01mg/L圖2溴代吡咯腈標樣0.01mg/L

2 結果與討論

2.1 標準曲線 準確稱取一定量的標準品(精確至0.1mg)，蟲螨腈用二氯甲烷溶解稀釋，溴代吡咯腈用乙腈溶解稀釋，配制成一系列標準溶液，濃度均為0.5、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005、0.001mg/L，用1.4方法分析。得到蟲螨腈線性回歸方程為y=495 340x+122 9，相關系數r為0.999 9；溴代吡咯腈線性回歸方程為y=1 798 387x+7 089，相關系數r為0.999 7。結果表明在濃度0.001～0.5mg/L范圍內，蟲螨腈和溴代吡咯腈標曲線性關系良好，(表4)。

表4 線性回歸方程和相關系數

2.2 添加回收 將空白甘藍樣品粉碎，加入標樣，充分混勻后靜置2h，做0.01、0.1、5mg/kg，3個水平的添加回收，每個添加水平重復5次，用1.3方法前處理，1.4方法分析。在3個添加水平下，蟲螨腈的回收率在85.2%～103.6%之間，相對標準偏差在1.3%～3.7%之間，溴代吡咯腈的回收率在96.4%～103.1%之間，相對標準偏差在1.4%～3.8%之間，(表5)。

表5 回收率(n=5)和相對標準偏差

2.3 定量限 根據添加回收試驗，甘藍中蟲螨腈和溴代吡咯腈的定量限均為0.01mg/kg。

3 結論

本文采用乙腈提取，QuEChERS凈化，蟲螨腈由氣質檢測，溴代吡咯腈由液質檢測，建立了甘藍中蟲螨腈及其代謝物的殘留檢測方法，并對方法的正確度和精密度進行了研究。在3個添加水平下，回收率及相對標準偏差均符合殘留檢測標準[15]。本方法便捷、高效，為甘藍中蟲螨腈及其代謝物的殘留檢測提供了可靠的方法。