短串聯重復序列親子鑒定技術用于細胞融合的檢測價值研究

王修梅

【摘 要】目的：研究在親子鑒定技術融合細胞檢測中應用短串聯重復序列的效果及可行性。方法：選擇2017年3月至2018年3月于我院義務獻血的外周血液細胞，分別實施細胞株培養、外周血單個核細胞分離、細胞融合、DNA提取、短串聯重復序列擴增檢測等步驟，對其結果予以分析和評價。結果：已實施融合的細胞生長63株（6.3%）、未應用融合劑細胞生長數為1株（0.50%）。孔數之中予以擴增處理后DNA提取結果表明，融合成功3個（7.69%）。人骨髓瘤細胞株DNA含量為（51.94±5.18）ng/ul，外周血單個核細胞DNA含量為（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的細胞DNA含量為（101.17±10.07）ng/ul。融合成功細胞DNA含量較高，說明細胞融合成功。結論：在實施親子鑒定技術之中，對其融合細胞實施短串聯重復序列技術，其應用效果較好，具有可行性。

【關鍵詞】短串聯重復序列;親子鑒定;細胞融合

【中圖分類號】R394【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2020）20--02

細胞融合是指將細胞株進行融合處理，其細胞株來源有所不同，使其成為新的細胞株，從而改變其原有細胞株的特性[1]。對細胞融合后實施檢測十分重要，一般多采用染色體檢測及篩選，其檢驗難度較高，且應用時長較長，應用效率較低。鑒于此，為了提升親子鑒定效率及準確性，將短串聯重復序列技術隔離應用于細胞融合之中，進而保障親子鑒定的治療及效率[2]。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年3月至2018年3月于我院義務獻血的外周血液細胞，另應用美國種質保藏中心細胞株。所用試劑包括細胞融合試劑、細胞培養液、胎牛血清、人類STR 21G擴增熒光試劑盒、次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘌呤核試劑[3]。

1.2 方法

1.2.1 細胞株培養方式 人骨髓瘤細胞株予以解凍，溫度為37攝氏度，解凍成功后將其接種于細胞培養基之中，充入5%的二氧化氮予以培養，溫度為37攝氏度。每3日更換一次培養液予以傳代，將其中的對數生長期細胞予以采集，采集過程中技術后實施細胞融合。

1.2.2 外周血單個核細胞分離方式 對義務獻血的外周血液予以常規檢驗，包括艾滋病毒、乙肝病毒、梅毒病毒及丙肝病毒等血液傳播類病毒。對其陰性結果血液予以檢驗。血樣予行離心處理后，取紅細胞與血漿中的白色細胞（即白膜），劑量為5ml，應用磷酸緩沖鹽溶液予以稀釋，劑量為5ml，加入5ml密度梯度液后加入稀釋后血液。將其實施離心處理，時間為30min，離心處理后采集中層細胞。再次應用磷酸緩沖鹽溶液予以清洗，共計3次，對其細胞予以計數后制備完成。

1.2.3 細胞融合方式 將分離細胞放置在試管之中，數量為106個，重懸其預冷細胞融合液，劑量為125ul，并防止預冷滅活仙臺病毒懸液12.5ul，混勻后冰置，時間為5min，直至細胞表面吸附滅活仙臺病毒。將其實施常規孵育，溫度為37攝氏度，時間為15min，期間每5min將其予以混合處理。孵育后輕輕放置次磺嘌呤和胸腺嘧啶核苷混合液，實施鋪板，每孔放置2000個細胞，再次予以培養。3星期后對其克隆成功情況予以觀察，并將其克隆生長的孔位實施24孔擴大性培養，2星期內予以細胞計數，提取其DNA情況。

1.2.4 DNA提取方式 予行融合細胞計數后，選取（4.5×105）個細胞實施DNA提取操作，將其重懸于200ul磷酸緩沖鹽溶液之中，并放入200ul裂解液，溫度保持在55攝氏度。時間為10min。提取后將其放置在吸附柱之中，并對其實施常規離心處理，隨即應用洗脫液實施洗滌，劑量為160ul，制備結束后予以定量檢測[4]。

1.2.5 短串聯重復序列擴增檢測方式 按照其檢驗試劑盒說明制備擴增體系，將其試劑放置于DNA模板之中，預變性溫度為95攝氏度，時間為11mim。隨即分別在94攝氏度、59攝氏度、72攝氏度之中分別放置1min，全過程擴充至28個循環。制備好后將其放置在60攝氏度環境之中，時長為1h，待測序檢測期間始終將其放置在4攝氏度環境之中。

2 結果

2.1 親子鑒定細胞融合結果情況

對形成克隆的細胞孔數予以統計，共計1000株細胞中，細胞生長63株，占比6.3%。未應用融合劑的200株細胞，生長數為1株，占比0.50%。對其中39個孔數之中予以擴增處理，并提取其中的DNA，其結果表明，融合成功3個，占比7.69%。

2.2 DNA含量檢驗情況

人骨髓瘤細胞株DNA含量為（51.94±5.18）ng/ul，外周血單個核細胞DNA含量為（49.59±5.52）ng/ul，融合成功的細胞DNA含量為（101.17±10.07）ng/ul。其結果顯示，融合成功細胞DNA含量較高，說明細胞融合成功。

3 討論

親子鑒定技術在孟德爾遺傳定律基礎之上發展而來，其子代遺傳信息均能體現于親本之上，隨著當前基因擴增技術的發展，通過實施短串聯重復序列技術予以遺傳標記，促使親緣關系、個體識別的工作效率有所增長。傳統細胞融合方式一般多需對其實施核型及染色體檢測，但因其檢測效率低下，應用范圍受到極大的局限性。鑒于此，本研究合理應用短串聯重復序列技術于細胞融合之中，短串聯重復序列廣泛存在于人體基因中，且具備極高的多態性特征，短串聯重復序列由2至6個堿基構成，作為核心序列之一，串聯重復排列后的多態性水平較高。對于細胞株特定序列予以標記后，通過短串聯重復序列檢測能夠區分細菌株之間的異同，將此技術應用于親子鑒定之中，能夠確定其親緣關系。

綜上所述，短串聯重復序列技術是當前細胞融合的重要檢測技術，能夠提升細胞融合檢測的質量及效率，從而提升親子鑒定技術的廣泛應用。因此，短串聯重復序列技術具有推廣及應用的優勢。

參考文獻

楊永林，陸玉婷，蔡杰，等.短串聯重復序列親子鑒定技術用于細胞融合的檢測[J].中國醫師雜志，2016，18（9）：1332-1335.

陳彪.短串聯重復序列親子鑒定技術用于細胞融合的檢測[J].健康之路，2016（11）.

何保仁，何保仁，申衛東，等.廣西地區1786例親子鑒定STR基因位點突變的觀察與分析[J].重慶醫學，2016，45（9）：1190-1191.

朱遠雁，鄒潔，強文，等.39個STR基因座在二聯體親子鑒定突變案例中的應用[J].中國法醫學雜志，2016，31（3）：261-263.