東莞地區新生兒G6PD缺乏癥發生率及基因突變分析

葉立新 黃銳華 莫潤旺 謝彩連 蔡小娟

【摘要】 目的：了解東莞地區出生人群葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺乏癥發生率及其基因突變情況。方法：選擇2016年9月1日-2019年12月31日東莞市送檢的新生兒疾病篩查標本，共432 820例，其中男232 254例，女200 566例，出生后72 h采集足跟血制作成干血斑，采用熒光定量法進行G6PD缺乏癥篩查，對篩查陽性者召回采集靜脈血采用G6PD/6PGD比值法進行確診，對部分確診者采用熒光定量PCR多色熔解曲線法（MMCA）進行G6PD基因突變分析。結果：東莞地區新生兒G6PD缺乏癥篩查總體陽性率為3.60%（15 588/432 820），其中男、女陽性率分別為5.06%（11 750/232 254）和1.91%（3 838/200 566），兩者篩查陽性率比較，差異有統計學意義（字2=3 067.24，P<0.001）;本市戶籍、本省戶籍、外省戶籍新生兒篩查陽性率分別為3.50%（4 684/133 719）、5.79%（5 303/91 553）、2.70%（5 601/207 548），本市戶籍新生兒篩查陽性率與本省戶籍、外省戶籍比較，差異均有統計學意義（字2=672.31、179.95，P<0.001）。篩查陽性新生兒召回7 044例，召回率45.19%，確診5 907例，確診符合率83.86%，推算東莞地區新生兒G6PD缺乏癥總體發生率為3.02%;男女的確診符合率比較，差異有統計學意義（字2=1 164.83，P<0.001）。219例確診G6PD缺乏癥新生兒中，檢測出基因突變216例，共檢出10種突變類型：67例（31.02%）c.1376G>T、67例（31.02%）c.1388G>A、26例（12.04%）c.871G>A、25例（11.57%）c.95A>G、7例（3.24%）c.1024C>T、7例（3.24%）c.392G>T、3例（1.39%）c.517T>C、2例（0.93%）c.1004C>A、1例（0.46%）c.1360C>T、1例（0.46%）c.592C>T和7種復合突變。結論：東莞地區是G6PD缺乏癥的高發區，最常見的三種基因突變類型為c.1376G>T、c.1388G>A、c.871G>A，積極扎實開展新生兒G6PD缺乏癥篩查具有重要意義。

【關鍵詞】 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥 新生兒疾病篩查 多色熔解曲線法 基因突變

[Abstract] Objective： To investigate the incidence of G6PD deficiency and its gene mutation in the population born in Dongguan. Method： Choice on September 1， 2016 to December 31， 2019， the city makes the newborn screening specimens， a total of 432 820 cases， including male 232 254， female 200 566， 72 h after birth to collect heel blood into dried blood spots， using the fluorescent quantitative method for screening G6PD deficiency， for screening positive recall venous blood was collected， using G6PD/6PGD ratio method to carry on the diagnosis， for part of those Diagnosed G6PD gene mutation were analyzed by fluorescence quantitative PCR multicolor melting curve assay （MMCA）. Result： This study showed that the overall positive rate of screening for G6PD deficiency in newborns in dongguan was 3.60% （15 588/432 820）， and the positive rates of male and female were 5.06%?（11 750/232 254） and 1.91% （3 838/200 566）， respectively， the difference between the two screening positive rate was statistically significant （字2=3 067.24， P<0.001）; the positive screening rate of newborns with the citys household registration， provincial household registration and non provincial household registration was 3.50% （4 684/133 719）， 5.79% （5 303/91 553） and 2.70% （5 601/207 548）， respectively， the positive rate of newborn screening in this city was statistically significant compared with that in this province and other provinces （字2=672.31， 179.95， P<0.001）. There were 7 044 cases of recall of positive newborns after screening， with a recall rate of 45.19%，?5 907 cases confirmed， and a confirmed compliance rate of 83.86%， the overall incidence of G6PD deficiency among newborns in Dongguan was calculated to be 3.02%; there was a significant difference in the confirmed compliance rate between men and women （字2=1 164.83， P<0.001）. Among the 219 newborns diagnosed with G6PD deficiency， 216 were detected with gene mutations， and a total of 10 mutation types were detected： 67 cases （31.02%） of c.1376G>T， 67 cases （31.02%） of c.1388G>A， 26 cases （12.04%） of c.871G>A， 25 cases （11.57%） of c.95A>G， 7 cases （3.24%） of c.1024G>T， 7 cases （3.24%） of c.392G>T， 3 cases （1.39%） of c.517G> c， 2 cases （0.93%） of c.1004C >T， 1 case （0.46%） of c.1360C >T， 1 case （0.46%） of c.592C>T and 7 compound mutations. Conclusion： Dongguan area is a high incidence area of G6PD deficiency， and the three most common gene mutations are c.1376G>T， c.1388G>A， and c.871G>A， it is of great significance to actively and effectively carry out screening for G6PD deficiency in newborns.

2.3 219例G6PD缺乏癥確診陽性新生兒基因突變分析 219例確診G6PD缺乏癥新生兒中，檢測出基因突變216例，共檢出10種突變類型：67例c.1376G>T、67例c.1388G>A、26例c.871G>A（25例c.95A>G、7例c.1024C>T、7例c.392G>T、3例c.517T>C、2例c.1004C>A、1例c.1360C>T、1例c.592C>T和7種復合突變，見表4。

3 討論

G6PD缺乏癥是目前全球人類最常見的遺傳性酶缺陷病，在全球主要分布在非洲、拉丁美洲、地中海沿岸及東南亞地區;在中國呈“南高北低”分布，主要在云南、廣西、海南、廣東、貴州、四川等南方地區高發[4-5]。據文獻[6-7]報道，廣西地區新生兒G6PD缺乏癥篩查陽性率為7.36%，廣西戶籍新生兒G6PD缺乏癥篩查陽性率為8.37%;云南10個民族G6PD缺乏癥篩查陽性率為0～8.6%[8];海南省新生兒G6PD缺乏癥篩查陽性率為3.17%，確診陽性率為1.46%[9];1988年，杜傳書教授首次報告廣東地區人群G6PD缺乏癥發病率為4.2%[10];廣東省內多個地區人群G6PD缺乏癥篩查陽性率也有相繼報道，江門地區4.14%、廣州4.60%、中山3.6%、梅州5.18%、河源7.371%、珠海3.2%[11-16]。本研究數據顯示，本地區新生兒G6PD缺乏癥篩查陽性率為3.60%，根據確診符合率推算確診發生率為3.02%，低于全省平均水平，但與筆者前期文獻[17]研究數據對比顯示，本地區出生人群G6PD缺乏癥發生率有所上升，可能與本地區人口結構變化及不同地區戶籍人群間婚配生育有關;同時，本次研究樣本基數大，應該更能客觀反映本地區新生兒G6PD缺乏癥發生率情況。按戶籍分類統計分析，本市戶籍新生兒G6PD缺乏癥篩查陽性率低于本省戶籍新生兒，但高于省外戶籍新生兒，說明G6PD缺乏癥在本地區也屬于高發區，符合世界衛生組織（WHO）建議在男性患病率>3%～5%的地區應常規開展G6PD缺乏癥的產前健康教育及新生兒篩查[3]。

G6PD缺乏癥屬于X連鎖不完全顯性遺傳病，由于男性只有1條X染色體而女性有2條X染色體，因此，在基因缺陷上，男性患者只存在半合子形式，女性患者則存在雜合子與純合子兩種形式。男性半合子與女性純合子常出現比較嚴重的酶缺陷而容易被檢出。而女性雜合子，存在缺陷的G6PD基因既可以在失活的X染色體上，也可以在非失活的X染色體上，致使其體內同時存在G6PD缺乏紅細胞和正常紅細胞但非平均分布。不同女性雜合子患者體內G6PD缺乏紅細胞和正常紅細胞比例不同，決定其G6PD活性具有異質性，酶活性即可表現正常、中度缺乏或顯著缺乏。因此，女性雜合子難以單純根據酶活性進行準確診斷[18-19]。李磊等[20]研究顯示，采用酶活性檢測的方法，對攜帶G6PD基因突變的女性，漏檢率達70.2%，漏檢均為單一G6PD基因雜合突變。這可能也是G6PD缺乏癥篩查陽性率女性顯著低于男性的一個重要原因。因此，采用酶活性檢測聯合基因突變檢測的方式，更有利于女性雜合子的檢出。

目前，全世界已報道180多種G6PD基因突變類型[21]，在我國人群中發現的突變有33種，其中最常見的突變類型為c.1388G>A、c.1376G>T、c.95A>G[18]。本文219例確診G6PD缺乏癥新生兒中，檢測出基因突變216例，共檢出10種突變類型和7種復合突變，占比最大的前三種突變類型為c.1376G>T、c.1388G>A、c.871G>A，c.95A>G為第四位，基本與文獻[22]報道相一致。由于條件限制，其余3例基因突變檢測陰性者未能做進一步測序以確定是否存在其他基因突變類型。

G6PD缺乏的早期新生兒高膽紅素血癥發病率高、發病早、程度重，可引起核黃疸[23]，如處理不及時可造成智力低下甚至致死。目前，對G6PD缺乏尚無根治辦法，臨床上僅對癥治療。因此，進行新生兒G6PD篩查非常必要，對篩查出G6PD缺乏的新生兒家長進行健康教育，告知其避免讓新生兒接觸特殊藥品、食品，防止溶血的發生;同時，可對G6PD缺乏新生兒生理性黃疸期納入高危兒管理，有效預防高膽紅素血癥、核黃疸和神經系統后遺癥的發生、提高人口素質。

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（收稿日期：2020-04-03） （本文編輯：張爽）