佛山市順德區孕前優生檢查人群地中海貧血的產前篩查及產前診斷研究

鐘 華，歐陽輝，趙卓姝，吳海燕，劉鳳芝，麥富巨 （廣東醫科大學順德婦女兒童醫院/佛山市順德區婦幼保健院，廣東佛山 528300）

地中海貧血(簡稱地貧)是一種珠蛋白基因的缺失或點突變使珠蛋白基因的表達受到抑制，引起相應的珠蛋白肽鏈合成減少甚至完全不能合成，導致血紅蛋白合成缺陷，紅細胞易破裂從而引起輕重不等的慢性進行性溶血性貧血[1]。本病廣泛分布于世界許多地區，我國的廣東、廣西、海南等省是地中海貧血的高發區，受累人口超過 2 億，是全球最大的單基因遺傳性疾病[2]。由于至今本病尚無法根治，通過產前的血液學表型的篩查、血紅蛋白組分及DNA分析技術對攜帶有同種類型地貧基因的高風險夫婦所孕胎兒進行產前基因診斷以淘汰重癥地貧患兒，是現今預防本病的最有效方法[3]。廣泛開展地中海貧血的產前篩查及早期產前診斷，選擇性終止重型地中海貧血胎兒的妊娠，降低新生兒出生缺陷率，是目前國際上公認的首選辦法，對提高人口素質具有重要社會意義[4]。本文通過調查佛山市順德地區孕前優生檢查人群地中海貧血產前篩查及產前診斷的情況，分析順德區的孕前優生檢查人群地中海貧血的基因類型分布和攜帶率，為我區科學制定適合本地區的地貧防控策略提供重要的數據支持。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選擇2016年1月-2019年10月在我院進行孕前優生檢查的30 868對夫婦(共61 736人)作為研究對象，年齡20～48歲，平均(26.8±4.5)歲。納入標準：(1)佛山順德區戶籍人口或持有順德居住證的非戶籍人口；(2)有完整的人口學資料。排除標準：近期患有急性感染、慢性失血或服用了影響血細胞參數藥物者。本研究符合醫學倫理學規定，所有產前優生系列檢查均經受檢者本人知情同意。

1.2 方法

為方便參加孕前優生檢查的夫婦避免多次抽血，每個受檢對象采集3管抗凝靜脈血，其中1管EDTA-K2抗凝血2 mL，用于血常規分析；另2管枸櫞酸鈉抗凝血各2 mL用于血紅蛋白電泳分析及基因檢測。

1.2.1 地貧血細胞分析篩查 使用邁瑞BC 6600全自動血細胞分析儀對孕前優生檢查的夫婦進行血細胞分析，以平均紅細胞容積(MCV)＜82 fl和平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)＜27 pg作為判斷地貧血液學表型陽性的初篩指標，如受檢夫婦任何一方 MCV＜82 fl和(或)MCH＜27 pg則做血紅蛋白電泳分析。

1.2.2 地貧血紅蛋白電泳篩查 使用法國Sebia CAPILLARY2毛細管電泳儀進行血紅蛋白組分分析，將HbA2＜2.5%(判為α-地貧表型)、HbA2＞3.5%(判為β-地貧表型)、HbF＞2.0%或出現異常血紅蛋白帶(HbH、HbE等)均判定為篩查陽性，對血紅蛋白電泳篩查異常者進行基因檢測。

1.2.3 地貧基因診斷 采用跨躍斷裂點PCR(gap-PCR)檢測 --SEA/、-α3.7/ 、-α4.2/3種 α-珠蛋白基因缺失突變；采用PCR-反向點雜交技術(PCR-RDB)檢測αCSα、αQSα、αWSα 3種非缺失型α地貧基因點突變和17種β-珠蛋白基因突變。對表型異常的疑似少見地貧者進行基因測序，以明確其基因型。地貧基因診斷儀器為德國Biometra PCR 儀、亞能YN-16雜交儀、NextSeq CN500基因測序儀，深圳亞能生物技術有限公司提供地中海貧血基因診斷試劑盒，相關檢測嚴格按照說明書進行操作和結果判斷。

1.3 統計學處理

采用SPSS20.0統計軟件處理數據，計數資料以率(%)表示。

2 結果

2.1 血細胞分析與血紅蛋白電泳的篩查

地貧初篩陽性率為15.46%(9 546/61 736)，其中α-地貧表型7 515例(占78.72%)；β-地貧表型2 031例(占21.28%)。

2.2 地貧基因診斷

通過基因檢測地貧基因攜帶陽性率為14.92%(9 208/61 736)，其中單純α-地貧基因攜帶率為76.25%(7 021/9 208)；單純β-地貧基因攜帶率為22.71%(2 091/9 208)，αβ-復合型地貧基因攜帶率為1.04%(96/9 208)。

2.2.1 單純α-地貧基因檢出結果 單純α-地貧中以--SEA基因類型構成比最高占60.28%(4 232/7 021)，其次為-α3.7 占 20.15%(1 415/7 021)，見表1。

2.2.2 單純β-地貧基因檢出結果 共檢出12種β-地貧基因突變類型，其中以 CD41-42 位點的突變基因構成比最高占36.68%(767/2 091)，其次為β-28占17.50%(366/2 091)，IVS-Ⅱ-654 占17.12%(358/2 091)，詳見表2。

2.2.3 96例αβ-復合型地貧基因檢出結果 共檢出 10種αβ-復合型地貧基因突變類型，其中以--SEA/CD 41-42突變基因構成比最高，占36.46%(35/96)，其次為--SEA/IVS-Ⅱ-654占17.71%(17/96)，詳見表3。

2.3 地貧產前診斷結果

表1 α-地中海貧血基因攜帶率、頻率與構成比 (%)

30 868對夫婦中雙方為同型地貧基因攜帶者且可能生育中、重型地貧兒的高危夫婦共284對(568例)，其中α-地貧214對，β-地貧70對，全部于孕16～22周時行羊膜腔穿刺術取羊水進行胎兒地貧產前診斷，檢出中間型α-地貧18例(3.17%)，重型α-地貧36例(6.34%)，重型β-地貧20例(3.52%)。

3 討論

地中海貧血為單基因遺傳病，根據其臨床特征可分為地中海貧血攜帶者、中間型地中海貧血、重型地中海貧血[5]。地貧攜帶者多數無明顯的臨床癥狀，中間型地貧的癥狀則輕重不一，而重型地貧者可出現嚴重的貧血，并出現黃疸、肝脾腫大、生長發育遲緩等，目前臨床對重型地貧尚無有效治療方法，僅能靠長期輸血并以鐵螯合劑治療，對患兒的家庭以及社會造成沉重的負擔[6-7]。佛山市順德區位于廣東省中心地帶，人口密集，地貧防控形勢嚴峻，因此，進行地中海貧血產前篩查及產前診斷的研究具有重要意義。

本文通過對佛山市順德區61 736人孕前優生檢查者進行血常規加血紅蛋白電泳進行初篩，地貧初篩陽性率為15.46%，其中α-地貧表型占78.72%，β-地貧表型占21.28%。地貧基因攜帶陽性率為14.92%，其中單純α-地貧基因攜帶率為76.25%，以--SEA基因類型構成比最高占60.28%；單純β-地貧基因攜帶率為22.71%，以CD41-42位點的突變基因構成比最高占36.68%；αβ-復合型地貧基因攜帶率為1.04%，以--SEA/CD41-42突變基因構成比最高占36.46%。同時30 868對夫婦中篩查出雙方為同型地貧基因攜帶者且可能生育中、重型地貧兒的高危夫婦共284對，其中α-地貧214對，β-地貧70對，全部行羊膜腔穿刺術取羊水進行胎兒地貧產前診斷，檢出中間型α-地貧18例，重型α-地貧36例，重型β-地貧20例，重型地貧均終止妊娠，流產物基因型分析與羊水相符。上述篩查結果顯示佛山市順德區孕前優生檢查人群地貧基因類型復雜，以單純α、β及αβ-復合型地貧基因為主。96例αβ-復合型地貧的檢出提示在對孕前優生檢查人群進行地貧篩查時，對于β-地貧攜帶者，建議常規篩查α-地貧的相關基因，以防止αβ-復合型地貧的漏檢。特別是對夫婦雙方為同型地貧基因攜帶者且可能生育中、重型地貧兒的高危夫婦追蹤進行胎兒地貧產前診斷，以降低重型地貧患兒的出生率和提高地貧產前診斷的準確性。

表2 β-地中海貧血基因攜帶率、頻率與構成比 (%)

表3 αβ-復合型地中海貧血基因攜帶率、頻率與構成比 (%)