沙棘糖漿止咳祛痰作用的實驗研究

梁國棟，吳啟進，娜黑芽

(1.內蒙古盛唐國際蒙醫藥研究院有限公司，內蒙古自治區蒙藥新藥研發企業重點實驗室，內蒙古自治區呼和浩特 010010；2.中國藥科大學，江蘇 南京 211198；3.內蒙古農業大學，內蒙古自治區 呼和浩特 010010)

沙棘糖漿是基于蒙藥古籍《飲膳正要》中赤赤哈納(即沙棘)處方記載，以蒙藥古籍《蒙藥正典》中所述“沙棘祛痰，融化血，治巴達干病”等臨床適應證為研究基礎[1]，通過將沙棘果壓榨成汁，經提取、過濾、濃縮等一系列工序得到藥用沙棘果汁，加入蔗糖漿稀釋，最終形成以沙棘果汁為單方的原研糖漿劑，主治咳嗽痰多，胸悶氣喘，本品在臨床治療支氣管炎引起的咳嗽痰多癥狀過程中發現兒童使用也具有較佳效果[2]。臨床研究發現，小兒呼吸道感染疾病中在常規治療基礎上加入沙棘糖漿可明顯提高治療效果，推薦臨床使用[3]。沙棘糖漿用于1～18歲人群。兒童作為特殊的用藥群體，有自己獨特的生理特點。因此應重視兒童用藥臨床前動物實驗研究，避免因用量劑量不準，而帶來安全隱患[4]。

本研究采用幼齡動物作為實驗對象，對沙棘糖漿的止咳、祛痰功效進行了實驗研究，為其臨床兒童用藥應用提供實驗依據及理論指導。

1 材料

1.1 藥品與試劑 沙棘糖漿(生藥量4.5 g·mL-1，內蒙古大唐藥業股份有限公司，批號：17012101-42)；氨溴特羅口服溶液(1.5 mg·mL-1，北京韓美藥品有限公司，批號：18080028)；苯酚紅(天津市化學試劑研究所有限公司，批號：20181031)；氨水(南京化學試劑股份有限公司，批號：181022827K)；碳酸氫鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20190314)；氯化鈉注射液(安徽雙鶴藥業責任有限公司，批號：1903113C)；烏拉坦(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20190419)；枸櫞酸(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20190409)。

1.2 動物及飼料 SPF級昆明種小鼠100只，雌雄各半，3～4周齡；SPF級Wistar大鼠50只，雌雄各半，3～4周齡；SPF級豚鼠50只，雌雄各半，5～6周齡，均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，生產許可證號：SCXK(京)2016-0011，使用許可證號：SYXK(蘇)2018-0019。所有動物實驗均符合動物倫理委員會標準。大小鼠生長繁殖飼料(江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司，批號：20190331)；SPF豚鼠生長繁殖飼料(北京科澳協力飼料有限公司，批號：19045113)。

1.3 儀器 YLS-8B型小動物霧化給藥儀(濟南益延科技發展有限公司)；2300型多功能酶標儀(PerkElmer公司)；玻璃毛細管(上海醫藥公司總經銷)；TD10001C電子天平(天津天馬衡基儀器有限公司)。

2 方法

2.1 沙棘糖漿止咳作用研究

2.1.1 對幼齡小鼠濃氨水致咳的影響[5]取昆明小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，分別為空白對照組，陽性對照組，沙棘糖漿高、中、低劑量組。以生藥量計算，高、中、低劑量組分別按18、6、2 g·kg-1給藥，陽性對照組灌胃給予氨溴特羅口服液6 mg·kg-1，空白對照組灌胃動物飲用水，上述給藥體積均為10 mL·kg-1，每天1次，連續給藥7 d。于末次給藥前禁食不禁水12 h，末次給藥后1 h進行實驗，用超聲霧化給藥儀霧化氨水，小鼠依次逐個放入噴霧裝置中。噴霧5 s后停止，觀察并記錄小鼠3 min內咳嗽次數和咳嗽潛伏期，以小鼠腹肌收縮(縮胸)同時張大嘴表現為咳嗽觀察指標。

2.1.2 沙棘糖漿對幼齡豚鼠枸櫞酸引咳的影響[6]將豚鼠依次放入小動物霧化給藥儀8 L的密閉玻璃容器內，待其在容器內穩定1 min后，用超聲波霧化吸入器勻速將17.5 g·L-1的枸櫞酸噴入容器內，噴霧時間為60 s，以豚鼠出現第一聲響亮的咳嗽聲為準，開始記錄豚鼠咳嗽潛伏期及5 min內咳嗽次數，咳嗽次數<5次和>50次，潛伏期<10 s和>360 s者給予剔除。篩選出50只豚鼠，隨機分為5組，分別為空白對照組，陽性對照組，沙棘糖漿高、中、低劑量組。以生藥量計算，高、中、低劑量組分別按12、4、2 g·kg-1給藥，陽性對照組灌胃給予氨溴特羅口服液15 mg·kg-1，空白對照組灌胃動物飲用水，上述給藥體積均為10 mL·kg-1，每天1次，連續給藥7 d。于末次給藥前禁食不禁水12 h，末次給藥后1 h將豚鼠放入8 L密閉玻璃容器內，待其在容器內穩定1 min后，用超聲波霧化吸入器勻速將17.5 g·L-1的枸櫞酸噴入容器內，噴霧時間為60 s。記錄豚鼠咳嗽的潛伏期和咳嗽次數。

2.2 沙棘糖漿祛痰作用研究

2.2.1 沙棘糖漿對幼齡小鼠化痰作用的觀察[7]取昆明小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，分組及給藥同“2.1.1”項下。于末次給藥前禁食不禁水12 h，末次給藥后1 h進行實驗。腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液，0.2 mL·(20 g)-1，30 min后脫頸椎處死小鼠，仰位固定于手術臺上，剪開頸正中皮膚，取甲狀軟骨下緣至氣管分叉處的一段氣管，用5%碳酸氫鈉溶液沖洗氣管，連續3次，洗出液合并，置于多功能酶標儀上于546 nm波長處測定吸光度，并根據制定的標準曲線計算出氣管沖洗液中酚紅濃度。

2.2.2 沙棘糖漿對幼齡大鼠毛細玻管排痰量的影響[8-9]取Wistar大鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，分別為空白對照組，陽性對照組，沙棘糖漿高、中、低劑量組。以生藥量計算，高、中、低劑量組分別按18、6、2 g·kg-1給藥，陽性對照組給予氨溴特羅口服液15 mg·kg-1，空白對照組灌胃動物飲用水，上述給藥體積均為10 mL·kg-1，每天1次，連續給藥7 d。于末次給藥前禁食不禁水12 h，以0.8 g·kg-1劑量腹腔注射烏拉坦，待麻醉后，仰位固定，剪開頸中部皮膚，鈍性分離氣管，在甲狀軟骨下緣上正中兩軟骨環之間用尖銳的注射針尖扎一小孔，然后向氣管內向心方向插入玻璃毛細管(內徑為0.5 mm)1根，使毛細管剛好接觸氣管底部表面，以吸取氣管后部的痰液，玻璃毛細管應往頭部傾斜60°。當毛細玻璃管內充滿時，立即另換一根。記錄2 h內毛細管內的吸痰長度。

3 結果

3.1 對小鼠氨水引咳法的咳嗽次數和咳嗽潛伏期的影響 沙棘糖漿對氨水引起小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數的影響見表1，結果顯示各劑量組對小鼠咳嗽潛伏期的影響差異均不顯著；但陽性對照組、沙棘糖漿高劑量組均有減少小鼠咳嗽次數的作用，與空白對照組比較有顯著差異(P<0.01)。實驗結果提示，沙棘糖漿高劑量組對氨水引起小鼠咳嗽有良好的抑制作用。

表1 沙棘糖漿對幼齡小鼠止咳作用

3.2 對幼齡豚鼠枸櫞酸引咳的影響 沙棘糖漿對豚鼠枸櫞酸引咳的影響見表2。與空白對照組比較，各劑量組對豚鼠咳嗽潛伏期均無延長作用，但沙棘糖漿中劑量組和氨溴特羅口服液對豚鼠咳嗽次數有顯著改善(P<0.05)；其他組未見改善，無統計學意義(P>0.05)。

表2 沙棘糖漿對幼齡豚鼠止咳作用

3.3 對幼齡小鼠氣管酚紅排泌的影響 沙棘糖漿對小鼠酚紅排泌的影響見表3。與空白對照組相比，沙棘糖漿低劑量組、中劑量組和陽性對照組小鼠氣管酚紅排泌量均顯著增加(P<0.01和P<0.05)，表明沙棘糖漿低劑量組和中劑量組具有一定的化痰作用。

表3 沙棘糖漿對幼齡小鼠酚紅排痰量的影響

3.4 對幼齡大鼠毛細玻管排痰量的影響 沙棘糖漿對大鼠痰液分泌量影響見表4，結果顯示沙棘糖漿各劑量組以及陽性對照組均可不同程度的增加大鼠痰液分泌量。與空白對照組比較，沙棘糖漿低劑量有顯著差異(P<0.05)，中劑量和高劑量有極顯著差異(P<0.01)，表明沙棘糖漿有較好的祛痰作用。

表4 沙棘糖漿對幼齡大鼠痰液排放量的影響

4 討論

沙棘糖漿是由內蒙古大唐藥業有限公司獨家生產的糖漿劑型道地蒙藥沙棘藥品，處方是沙棘果汁和輔料蔗糖、苯甲酸鈉，具有止咳化痰、消食化滯的作用，用于咳嗽痰多、消化不良、食積腹痛的治療[10]。從中醫角度分析：依據《中成藥臨床用藥指南—兒科分冊》所述，咳嗽痰多以祛痰止咳為治療的基本原則。沙棘藥物性溫，味酸、澀，歸肺經，具有止咳祛痰的作用，對于咳嗽痰多的癥候表現具有很好的辨證治療作用[11]?，F代藥理學研究表明，沙棘藥物中總黃酮所含最主要的3種黃酮類化合物為槲皮素、異鼠李素和山柰酚，這3種物質對炎癥因子—細菌脂多糖(LPS)所誘發的炎癥過程有抑制、調節作用，從而具有抗炎功能，這是其發揮祛痰和治療氣管炎、支氣管炎的重要機制。此外，這3種黃酮類化合物被證明具有保護肺組織、擴張血管、抗菌和抗病毒等功效[12-13]。

本研究采用幼齡動物作為實驗對象，通過幼齡小鼠氨水引咳，幼齡豚鼠枸櫞酸引咳，幼齡小鼠氣管酚紅排泌量，幼齡大鼠毛細玻管排痰量等動物模型的藥效學實驗來綜合評價沙棘糖漿止咳、祛痰作用。研究結果表明，沙棘糖漿可以抑制氨水引起小鼠咳嗽次數，顯著改善枸櫞酸引起豚鼠的咳嗽。同時有效促進酚紅排泌量，顯著增加大鼠痰液分泌量。綜上，通過上述藥理實驗結果，表明沙棘糖漿對兒童群體具有止咳、祛痰作用，本研究為沙棘糖漿的臨床兒童用藥應用及推廣提供了一定的實驗依據。