基于液相色譜-質譜技術的乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選

霍紅旗，呂佰瑞，王海東，劉愛民

【摘要】目的：研究液相色譜-質譜技術在乳腺癌轉移相關代謝標志物篩選方面的應用效果。方法：從本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中選擇80例納入觀察組（40例發生轉移與40例未發生轉移），同時選擇40名乳腺健康體檢者納入對照組，均實施液相色譜-質譜技術的乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選，分析篩查結果。結果：通過構建模型與分析，從健康人員到乳腺癌未轉移、乳腺癌轉移者，有8項相關代謝標志物出現明顯升高。結論：基于液相色譜-質譜技術可構建模型，并通過乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選為乳腺癌轉移提供依據。

【關鍵詞】乳腺癌;病灶轉移;液相色譜-質譜技術;模型;代謝標志物

【中圖分類號】R587.2;R741.044 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6525（2020）08-0-01

乳腺癌在女性惡性腫瘤中有較高的發病率，也是嚴重威脅患者生存質量的重大疾病。盡管關于乳腺癌的研究較多，但是乳腺癌發病率、死亡率仍然較高[1]。本研究通過基于液相色譜-質譜技術的乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選模型建立與分析，旨在為乳腺癌轉移預測與干預提供依據，現就相關資料分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料

從本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中選擇80例納入觀察組（40例發生轉移與40例未發生轉移），同時選擇40名乳腺健康體檢者納入對照組，均為女性。觀察組轉移者：年齡32-74歲、平均年齡（45.59±4.25）歲，其中：12例肺轉移、18例肝轉移、6例骨轉移，4例出現兩個以及兩個部位以上轉移。觀察組未轉移者：年齡30-75歲、平均年齡（45.45±4.28）歲。對照組：年齡31-76歲、平均年齡（45.55±4.23）歲。乳腺癌患者預測生存期≥3個月，三組人員年齡資料差異較小，滿足可比性（P>0.05）。

1.2方法

檢查儀器與試劑有：質譜儀、高效液相色譜儀、甲酸、乙腈、蒸餾水、相關標準質控品等。

將100μL血清標本解凍，然后與400μL甲醇混合，離心處理后，將上層清液真空離心蒸干，獲取干粉。等樣本體積水和乙腈混合（V/V=95/5），然后溶解干粉，離心處理，通過0.22μm濾膜對上清液過濾，樣本檢測。將不同標本上樣液等體積混合后的溶液作為質控品。

樣品分析：色譜柱為選擇Thermo Hypersil GOLD柱（50mm×2.1mm×1.9μm），0.1%甲酸的水溶液為流動相A，含0.1%甲酸的乙腈溶液為流動相B，設置流速200μL/min，之后按程序完成梯度洗脫，進樣量10μL，4℃，質控溶液中10個進行連續檢測，其余則隨機插入樣品中進行分析。分析過的樣品則使用空白代替。獲取數據后可進行模型建立，利用MZmine 2.7.2 軟件，SIMCA14.1軟件，建立模型后實施潛在標志物的鑒定與分析。

1.3觀察指標

不同樣本組合對應的OPLS-DA模型以標志物鑒定。

2結果

不同組合對應OPLS-DA模型構建情況見表1，通過對代謝標志物進行篩查，篩查后按照實驗步驟進行代謝標志物的鑒定。對比標準譜圖和二級質譜圖搜索，乳腺癌未轉移者與健康對照組有31項指標有差異，而乳腺癌轉移組與乳腺癌未轉移組則有23個代謝標志物存在差異，經鑒定，共有8個代謝物可作為病情發展的參考指標，包括溶血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰膽堿（18∶0）、膽堿、溶血磷脂酰膽堿（20∶3）、磷酸二羥丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氫化乳清酸。

3討論

引起乳腺癌患者死亡率較高的一個重要原因便是乳腺癌轉移，通過對乳腺癌轉移的早期預測與干預對延長乳腺癌患者生存時間至關重要[2]。

隨著對乳腺癌研究的深入，代謝異常同乳腺癌患者病情發生、進展等存在密切相關性。常規腫瘤標志物檢測對乳腺癌轉移的特異性與靈敏度較低[3]。代謝組織學研究進展為乳腺癌轉移提供了更多依據[3]。通過代謝學指標對健康人員、乳腺癌未轉移者、乳腺癌轉移者指標進行分析，進一步鑒定發現血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰膽堿（18∶0）、膽堿、溶血磷脂酰膽堿（20∶3）、磷酸二羥丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氫化乳清酸等表達同乳腺癌轉移以及病情發展密切相關，其水平升高者出現乳腺癌轉移。與吳靜等[4]研究結論一致。關于不同代謝標志物的具體作用機制以及實際應用價值還需進一步加大研究。

綜上所述，基于液相色譜-質譜技術可構建模型，并通過乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選為乳腺癌轉移提供依據。

參考文獻：

[1]成祥君，楊璐，張偉，等.不同分子分型乳腺癌血清腫瘤標志物的表達差異與腫瘤復發轉移的影響因素[J].臨床檢驗雜志，2019，37（12）：893-896.

[2]廖東亮.曲妥珠單抗、吉西他濱聯合紫杉醇治療轉移性乳腺癌對患者血清腫瘤標志物的影響[J].名醫，2019（10）：259.

[3]韓麗喬，張喬軒，黃憲章.液相色譜串聯質譜技術定量檢測的臨床應用現狀與挑戰[J].中華檢驗醫學雜志，2020，43（10）：945-950.

[4]吳靜，楊睿，張磊，等.基于液相色譜-質譜技術的乳腺癌轉移相關代謝標志物的篩選[J].天津醫藥，2018，46（10）：1033-1038.

基金項目：河北省衛健委醫學研究課題（編號：20191861）

通訊作者簡介：呂佰瑞（1984-），男，河北邯鄲人，主管檢驗師，碩士，主要從事腫瘤的基礎研究。