免疫抑制治療對再生障礙性貧血患者血清細胞因子的影響

費炳義

AA 是一種骨髓產生的細胞不足,導致血液中細胞下降的血液系統疾病。據報道,AA 與骨髓造血干細胞損傷相關,當某些刺激物激活其自身免疫反應時機體會釋放VEGF、TNF-α、IFN-γ 等負性調控因子,導致造血干細胞分裂受阻而凋亡［1］。鑒于此,本研究對接受免疫抑制治療及常規治療的AA 患者的血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 濃度進行檢測,以探討免疫抑制治療對AA 患者血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 表達的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016 年7 月～2018 年6 月在本院就診治療的AA 患者56 例,納入標準：①符合AA診斷［2］,并經臨床癥狀及外周血象、骨髓涂片及活檢確診；②年齡11～65 歲；③患者及家屬均知情同意。排除標準：①對本研究所用藥物過敏者；②自身免疫性疾病；③治療依從性差者；④有其他嚴重并發癥。將患者根據隨機數字表法分為觀察組和對照組,每組28 例。觀察組男15 例,女13 例；年齡14～62 歲,平均年齡(28.5±8.6)歲。對照組男14 例,女14 例；年齡13～65 歲,平均年齡(28.9±9.1)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。本研究通過了醫院倫理委員會審核。

1.2 方法 所有患者均行基礎治療,患者入院后,囑其保持絕對臥床休息,并給予補充血小板治療,貧血嚴重者可用同型紅細胞；如合并感染則給予抗感染治療；肝功能不全者則給予保肝治療。在此基礎上,對照組給予雄激素治療,即給予十一酸睪酮膠丸(浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠,國藥準字H10970240,規格：40 mg/粒)40 mg 口服,2 次/d,連續治療6 個月。觀察組給予免疫抑制治療,即口服環孢素軟膠囊(杭州中美華東制藥有限公司,國藥準字H10960122,規格：50 mg/粒)3～5 mg/(kg·d),2 次/d,連續治療6 個月。

1.3 觀察指標 比較兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平及TNF-α 和IFN-γ 表達百分率,相同部位骨髓涂片標本中VEGF 表達差異。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平采用流式細胞儀進行檢測。TNF-α、IFN-γ 檢測采用流式細胞儀獲得2×105個細胞,并計算CD4 陽性細胞數,測定其胞漿中TNF-α 和IFN-γ 陽性表達,以此計算表達百分率。VEGF 表達水平采用原位雜交法檢測。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0 統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差(±s) 表示,采用t 檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平變化情況比較 治療前,兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平比較,差異無統計學意義(P＞0.05)；治療后,觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平均明顯低于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達情況 治療前,兩組VEGF、CD4+/TNF-α和CD4+/IFN-γ 表達水平比較,差異無統計學意義(P＞0.05)；治療后,觀察組VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達水平低于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平變化情況比較(±s)

表1 兩組治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 細胞水平變化情況比較(±s)

注：與對照組比較,aP＜0.05

表2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達情況(±s)

表2 兩組治療前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達情況(±s)

注：與對照組比較,aP＜0.05

3 討論

AA 是各種原因引起骨髓造血干細胞減少、造血功能衰竭所致的一種以全血細胞減少、進行性貧血等為典型特征的臨床綜合征［3］,目前普遍認為是骨髓造血微環境損傷造成的［4］。研究表明,很多AA 患者存在細胞因子調節異常,這可能造成造血干細胞增殖和分化紊亂［5］。由T 淋巴細胞分泌的骨髓抑制性細胞因子是重要的造血負調控因子,如TNF-α、IFN-γ 等［6］。研究發現,TNF-α、IFN-γ 可抑制紅細胞聚集,同時發現AA 患者的TNF-α、IFN-γ 檢出率明顯高于正常人［7］。本研究采用流式細胞儀檢測外周血中淋巴細胞胞漿內的TNF-α、IFN-γ 表達,結果發現兩者均明顯高于對照組,提示AA 引起了造血調控因子失衡,進而導致造血負調控因子異常升高。目前,AA 的治療主要采用免疫抑制治療,特別那些對骨髓移植有禁忌的患者,有效率可達75%［8］。本研究結果顯示,治療后,觀察組VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表達水平明顯低于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。由此說明免疫抑制治療抑制了AA 患者體內T 細胞功能,下調造血調控因子,故利于骨髓造血功能恢復。

通過檢測T 細胞胞漿內TNF-α 和IFN-γ 的表達改變,可為免疫抑制治療療效的評估提供依據。與酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測血清中TNF-α 和IFN-γ 的表達相比,流式細胞術檢測胞漿內的TNF-α和IFN-γ 的表達更接近細胞特異性,可較準確反映T細胞分泌的細胞因子變化,故更準確反映免疫抑制治療后T 淋巴細胞功能改變。VEGF 可在體內誘導血管新生,是高度特異的血管內皮細胞分裂原,且是血小板源性生長因子之一。VEGF 具有維持正常血管密度的作用,且與生理性造血有明顯的關系。

通常腫瘤患者免疫力低下,其CD4+T 細胞減少、CD8+T 細胞增加、CD4+/CD8+比值下降；NK 細胞為機體重要的非特異免疫細胞［9,10］。本研究結果顯示,觀察組VEGF 表達量顯著下調,但治療后上升明顯,說明VEGF 表達下調與AA 密切相關。造血微環境受損引起血管密度變小,骨髓血管生成減少,使骨髓脂肪化,造血組織萎縮,最終影響造血功能。VEGF 表達減少直接影響造血干細胞的生存、分化和發育,可見AA 患者的VEGF 表達下降,從各途徑影響骨髓血管生成和造血干細胞的生存,但其具體機制還需從分子學、基因學方面入手加以研究。

總之,免疫抑制治療能有效降低AA 患者T 細胞胞漿內的TNF-α 和IFN-γ 表達,且能上調VEGF 的表達,利于骨髓血管密度的恢復。