不同外植體和激素對喜樹愈傷組織誘導的影響

葉水英

摘 要：為了探索喜樹組織培養愈傷組織誘導的最佳配方，利用喜樹不同外植體（帶腋芽莖段、側芽和葉片），在MS培養基中添加不同激素（2，4-D，6-BA和NAA）的不同濃度和不同配比，進行愈傷組織的誘導。結果表明：在MS培養基中培養，帶腋芽莖段添加NAA 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ 2，4-D 2mg/L，愈傷組織誘導效果最佳，愈傷組織的誘導率達到了60%。

關鍵詞：喜樹;外植體;激素;愈傷組織;誘導率

中圖分類號 S79文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2020）19-0029-02

喜樹（學名：Camptotheca acuminate），別名旱蓮、水栗、水桐樹、天梓樹、旱蓮子、千丈樹、野芭蕉、水漠子，屬藍果樹科、喜樹屬落葉喬木，高可達20～30m，樹干端直。喜樹是我國特有的樹種，其根、樹皮、枝葉及種子中含喜樹堿，具有極高的藥用價值。

喜樹主產我國江蘇南部、浙江、福建、江西、湖北、湖南、四川、貴州、廣東、廣西、云南等省區，在四川西部成都平原和江西東南部均較為常見。為暖地速生樹種，喜光，不耐嚴寒干燥。從其果、皮、葉中分離出來的生物堿喜樹具堿有很強的抗癌活性，是制備高級抗癌藥的原料。另外，喜樹還具有綠化觀賞及生態防護等多種價值。1999年8月，經中華人民共和國國務院批準，喜樹被列為第一批國家重點保護野生植物，保護級別為Ⅱ級。

如果僅依靠直接從采伐喜樹中提取喜樹堿，既破壞生態環境又滿足不了需求，而通過化學合成喜樹堿非常困難，導致喜樹堿提取物價格昂貴，供應緊張。為了保護喜樹資源，可以通過組織培養產物不斷產生喜樹堿以及高產喜樹堿植株來解決喜樹堿原料不足的問題。近幾十年來，關于喜樹組織培養的研究有很多，主要包括愈傷組織的誘導、喜樹植株再生方法的研究、喜樹細胞培養和喜樹毛狀根的誘導培養等。其中，采用的外植體種類有幼葉、莖段、莖尖、帶芽莖段、葉柄、離體胚、胚軸等，并且已能利用幼葉、莖段、莖尖和離體胚培養獲得再生植株。本研究以不同外植體為試驗對象，在MS培養基中添加不同激素的濃度和配比，探究其對喜樹組織培養愈傷組織誘導率的影響，以期為喜樹組織培養提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 外植體及其消毒 2019年4月份，在景德鎮學院老校區，選擇生長健壯、無病蟲害的喜樹植株，取當年生帶腋芽的莖段、側芽和葉片作為外植體。將喜樹外植體材料在實驗室的水龍頭下沖洗干凈。將處理帶腋芽的莖段、側芽和葉片先用流動的自來水沖洗干凈，再分別放于500mL燒杯中，10%用雙氧水浸泡6min，無菌水清洗3～4遍，然后用70%的酒精溶液浸泡1min，無菌水沖洗。接著用飽和的漂白粉溶液浸泡8min，用無菌水沖洗3～5遍。最后用0.1%升汞溶液（加入吐溫2滴）浸泡10min，期間不斷搖動溶液，用無菌水洗滌3～5遍待用。將外植體切成1.5cm左右小段進行接種。

1.2 試驗方法 使用MS培養基培養，pH5.8。激素分別用NAA、2，4-D、6-BA。外植體用帶腋芽的莖段、側芽和葉片。開展單獨添加激素2，4-D、6-BA、NAA，NAA與6-BA2種激素不同濃度配比，以及NAA、2，4-D、6-BA3種激素不同濃度配比3組試驗。培養條件：培養溫度為（25±2）℃;每天光照12h;光照度1500～2000Lx。

2 結果與分析

2.1 不同激素對愈傷組織誘導的影響 在MS培養基中使用不同的外植體在添加1種激素條件下進行培養，其中用到的激素濃度分別是0.5mg/L2，4-D、1.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA，每種激素培養的每種外植體做4組試驗，每組接種數均為20個，24d后觀察外植體的生長情況如表1所示。由表1可知，3種外植體在添加1.0mg/L 6-BA的MS培養基中成活率最高，其中以帶腋芽的莖段在添加1.0mg/L 6-BA的MS培養基中成活率最高為38.3%。

2.2 不同激素濃度配比對愈傷組織誘導的影響

2.2.1 2種激素濃度配比 利用NAA和6-BA不同濃度配比對不同外植體進行愈傷組織的誘導，24d后進行觀察試驗情況，其結果見表2。由表2可知，在MS培養基中添加0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA激素配比條件下對外植體的愈傷化效果最好，對帶腋芽莖段的愈傷率最高，愈傷率達45%，葉片的愈傷率也達到25%，側芽的愈傷率為10.5%。愈傷率最低的是添加0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA激素，帶腋芽莖段的愈傷率為15%，葉片的愈傷率12.5%，側芽的愈傷率為0.05%。

2.2.2 3種不同激素濃度配比 利用NAA、6-BA和2，4-D不同濃度配比對不同外植體進行愈傷組織的誘導，24d后進行觀察試驗情況，其結果見表3。由表3可知，添加0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D的激素，愈傷率最高，其中以帶腋芽莖段作為外植體，愈傷率最高，達到60%。而添加1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D的愈傷率最低，以帶腋芽莖段作為外植體，愈傷率在這組中較高，也只達到43%。

3 結論與討論

本試驗結果表明：帶腋芽莖段在MS培養基中添加0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D激素中的愈傷化最高，最高可達60%。在MS培養基中添加3種激素不同濃度配比愈傷組織的誘導率，比添加2種不同激素濃度配比愈傷組織的誘導率高。外植體以選用帶腋芽的莖段誘導愈傷率高。

本試驗所用的外植體是在室外采取，增加了消毒的難度，特別是葉片消毒難度大，如果葉片較嫩，消毒易致死，葉片的褐變率也較高，這對試驗的結果有一定的影響。另外，不同培養基添加不同激素對喜樹愈傷組織的誘導有待于進一步研究。

參考文獻

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（責編：張宏民）