湖羊長期冷凍精液和胚胎復蘇繁育研究

章曉煒 劉莉君 馬敏彪 劉雅麗

摘要：近年來，浙江省湖羊保種以活體保種為主，種羊場選種選育方向較為單一，羔皮特性逐漸減弱，公羊血統擴充困難。為進一步做好湖羊種質資源保護工作，浙江省專門向農業農村部畜牧業司申請使用湖羊冷凍精液和胚胎，在國家級保種場浙江華麗牧業有限公司和省級保種場長興永盛牧業有限公司開展了湖羊冷凍精液和冷凍胚胎試驗，共產羔羊103只，其中活羔95只。成功復蘇繁育出冷凍羊，有較高的胚胎復蘇產羔成功率、冷凍精液受孕分娩率及羔羊成活率，從冷凍羊初生鑒定和生產性能等結果，成功驗證了生物保種保存技術的可行性。

關鍵詞：湖羊;遺傳物質;冷凍保存;復蘇與繁育

湖羊是我國特有的優良地方品種，也是浙江省優勢特色畜牧產業，因湖羊養殖具有節糧、綠色、低排放等優點，已成為現代畜牧業轉型升級的領頭羊、推進畜牧業供給側結構性改革的重要突破口。2013年，浙江省啟動實施了“湖羊產業振興計劃”，2015年，浙江省農業廳印發了《湖羊、兔、蜜蜂等特色優勢畜牧業提升發展三年行動計劃（2015—2017年）》，全省各級農業部門以實施提質增量、秸稈換肉、種業提升和精品培育四大行動為主要抓手，強力推進湖羊特色產業提升發展，取得了明顯成效。但受市場需求影響，近年來湖羊種羊場選種選育方向較為單一，羔皮特性逐漸減弱，公羊血統擴充困難。為進一步做好湖羊種質資源保護工作，浙江省專門向農業農村部畜牧業司申請使用湖羊冷凍精液和胚胎，在國家級保種場浙江華麗牧業有限公司和省級保種場長興永盛牧業有限公司開展了湖羊冷凍精液和冷凍胚胎試驗，共產羔羊103只，其中活羔95只。

1? 申請使用湖羊遺傳物質

2018年2月，浙江省向農業農村部畜牧業司申請使用湖羊遺傳物質，農業農村部全國畜牧總站先后兩次派專家考察試驗點試驗條件，最終批復浙江使用1998年3只公羊的75劑凍精、1988年5只公羊的27劑凍精、1998年的4對公母羊的24枚胚胎。經查找歷史檔案，本次在浙江使用的凍精來自8只公羊，其中1988年制作的安瓿凍精27劑，來自5只公羊，無系譜檔案，按5個血統計算;1998年制作的細管凍精75劑，來自余杭湖羊場（現為浙江華麗牧業有限公司）的3只公羊， 3只公羊為2個家系。冷凍胚胎24枚分別來自4對不同的公羊和母羊，其中2對采集吳興區種羊場，2對采集于浙江華麗牧業有限公司。

2 商定湖羊凍精和胚胎繁育及復蘇試驗實施方案

在前期多次湖羊保種場實地考察調研的基礎上，2月份浙江省畜牧獸醫局組織召開湖羊凍精和胚胎試驗論證會，與會專家詳細分析了湖羊凍精和胚胎的系譜檔案，1988年采集制作的凍精由于歷史悠久，無詳細檔案（僅專家回憶采集于湖州吳興區），1998年制作的凍精和胚胎采集于我省湖州吳興區和杭州余杭區（現浙江華麗牧業有限公司）。綜合考慮凍精和胚胎的采集歷史、采集地點、公羊系譜、現有保種場試驗條件和母羊狀況等因素，最終確定湖羊凍精和胚胎試驗選擇在國家級保種場浙江華麗牧業有限公司和省級保種場長興永盛牧業有限公司。

3 開展湖羊凍精和胚胎試驗復蘇繁育實驗

3.1 挑選受體母羊并單獨組群

邀請省內湖羊專家進場挑選受體母羊，選擇遺傳背景盡量一致，系譜記錄完善，家系不同，健康，繁殖性能好（母性好），年齡在2～4胎的母羊。經專家挑選，永盛牧業選擇10個家系60只母羊;華麗牧業選擇7個家系90只母羊。

3.2 胚胎移植和凍精配種操作

在前期同期發情處理的基礎上，從4月11日開始，由全國畜牧總站邀請國內專家采用內窺鏡子宮角輸精手術操作方式進行胚胎移植和凍精配種。本次實驗24枚胚胎共移植到9只母羊（胚胎解凍鏡檢發現有2枚胚胎為不可用胚胎，9只母羊種4只母羊移植了3枚胚胎，5只母羊移植了2枚胚胎）;凍精配種共計79只母羊，其中華麗牧業配種46只，永盛牧業配種33只;鮮精對照組配種共計40只母羊，其中華麗牧業配種20只，永盛牧業配種20只。

3.3 B超妊娠檢查

6月4～5日，在凍精配種和胚胎移植55天左右，邀請省農科院專家對所有凍精配種和胚胎移植的母羊開展妊娠檢查，B超妊娠初步檢查結果，永盛牧業凍精配種母羊懷孕10只，待確定8只;華麗牧業凍精配種母羊懷孕22只，待確定1只;胚胎移植母羊懷孕2只，對確認懷孕的母羊個體拍照存檔。8月24日，產前肉眼觀察，再次確認妊娠結果，永盛牧業凍精配種母羊33只，懷孕25只;華麗牧業凍精配種母羊46只，懷孕23只;華麗牧業胚胎配種母羊9只，懷孕6只，補拍了懷孕母羊個體照片存檔。

3.4 凍精配種和胚胎移植羔羊出生

從8月29日至9月14日，凍精配種和胚胎移植的羔羊陸續出生，胚胎移植的母羊6只分娩，共出生9只，活羔8只;凍精配種的母羊48只分娩，共出生94只，活羔87只。鮮精對照組懷孕分娩母羊30只（永盛牧業16只，華麗牧業14只），出生羔羊共計68只，存活64只。

3.5 凍精和胚胎羔羊初生鑒定

羔羊出生后，邀請專家對小羔羊進行初生鑒定，按照湖羊國標要求，對羔羊初生重、花紋類型、花紋面積、花紋寬度、毛長、花紋緊密度、羔皮等級進行鑒定。

4 結果與分析

4.1 初生重

8只胚胎活羔的羔羊平均初生重3.59公斤;87只凍精活羔羊平均初生重3.28公斤，其中1988年凍精活羔平均初生重2.98公斤，1998年凍精活羔初生重3.48公斤;對照組鮮精的64只活羔羊平均初生重2.98公斤。

4.2? 性別比例

對95只活羔羊公母進行鑒定，其中公53只，母42只，公母比1.26∶1（胚胎羔羊公母比0.6∶1，1988年凍精羔羊公母比0.96∶1;1998年凍精羔羊公母比2.56∶1）;對照組鮮精公羊37只，母羊27只，公母比1.37∶1。

4.3? 優質羔皮羊比率

對湖羊凍精和胚胎95只活羔羔皮邀請專家進行鑒定，其中甲級羔皮羔羊32只、甲級羔皮占比34%（胚胎羔羊中甲級羔皮羊3只，甲級羔皮占比38%;1988年凍精甲級羔皮羔羊22只，甲級羔皮占比40%;1998年凍精甲級羔皮羔羊7只，甲級羔皮占比22%）。對照組64只活羔羊，其中甲級羔皮羔羊7只、甲級羔皮占比11%。

4.4? 分娩率

本次凍精配種和胚胎移植試驗羊母羊共計88只（其中胚胎移植9只，凍精配種79只），受孕分娩54只（胚胎6只，凍精48只），分娩率61%（其中胚胎移植母羊6只受孕分娩，受孕分娩率67%）;1988年凍精配種50只，受孕分娩32只，受孕分娩率為64%;1998年凍精配種29只，受孕分娩16只，受孕分娩率55%;對照組配種40只，受孕分娩30只，受孕分娩率75%。

4.5? 凍精配種產羔率

湖羊凍精生出羔羊共計94只，受孕分娩母羊平均產羔1.96只，產羔率196%（其中1988年凍精羔羊出生61只，平均產羔1.91只，產羔率191%;1998年凍精羔羊出生33只，平均產羔2.13只，產羔率213%），對照組產羔68只，平均產羔2.27只，產羔率227%。

4.6 胚胎移植復蘇產羔成功率

胚胎移植24枚（其中2枚不可用），復蘇成功產羔9只，胚胎復蘇產羔成功率38%。

4.7? 活羔率

湖羊凍精和胚胎羔羊共計產活羔95只，活羔率92%，其中胚胎活羔羊8只，活羔率89%;1988年凍精活羔羊55只，活羔率90%;1998年凍精活羔33只，活羔率97%;對照組活羔64只，活羔率94%。