楊子明,張 利,劉金磊,李典鵬,黃仕訓
(廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所,廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室,廣西桂林 541006)
石筆木(Tutcheriachampioni)屬于杜鵑花目山茶科石筆木屬[1],廣西是其主產地之一。研究表明,石筆木葉含有多糖、黃酮、多肽、氨基酸、蛋白質、還原糖、內脂、有機酸、蒽醌類、甾體類、三萜類、生物堿類和揮發油類等多種成分,具有較好的生理活性[2-5]。在民間,石筆木的幼嫩莖葉通常被加工成茶飲,不僅能提神,還具有治療傷風感冒、腸胃不適、腸胃炎或痢疾等功效。石筆木花色淡黃,外觀和“茶族皇后”金花茶非常相似[6],具備較好的園林觀賞價值,已經被大面積推廣種植。雖然民間認為石筆木茶飲有許多治病和保健功能,但未見相關的實驗研究報道。為深度開發和利用石筆木的植物資源,本研究首次在小鼠身上實驗探討石筆木茶水對小鼠機體的影響,以期為石筆木在醫藥、保健品或健康產品方面的開發和利用提供理論依據。
本實驗所用的新鮮石筆木葉購自廣西壯族自治區靖西市集市(采摘時間為2017年5月15日),烘干后存放,經廣西植物研究所園林園藝研究中心鑒定為山茶科石筆木屬植物石筆木的葉。
SPF級昆明小鼠,體重18—22 g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,實驗動物生產許可證號:SCXK(湘)2017-0004。
半自動生化分析儀(RT-9100型)購自深圳雷社生命科學股份有限公司,臺式高速冷凍離心機(TGL-16R型)購自珠海黑馬實驗設備有限公司,電子恒溫不銹鋼水浴鍋(H22-1型)購自上海宜昌儀器紗篩廠,電子天平(METTLER AT200型)購自上海菁海有限公司。
白蛋白(Alb)測試盒、總蛋白(TP)測試盒、葡萄糖(Glu)測試盒、肌酐(Cr)測試盒、血尿素氮(BUN)測試盒、谷丙轉氨酶(ALT)測試盒、谷草轉氨酶(AST)測試盒均購自南京建成生物工程研究所,甘油三酯(TG)測試盒、總膽固醇(T-CHO)測試盒購自長春匯力生物技術有限公司。
選取SPF級昆明小鼠72只,雌雄各半,隨機分成4組,雌雄分開飼養。將4組小鼠隨機分為石筆木茶水低、中、高劑量組以及空白對照組,待其適應環境后開始實驗。低、中、高劑量組投喂相應濃度的石筆木茶水,空白組投喂等量的蒸餾水,小鼠自由飲用,連續90 d。石筆木茶水制作方法:分別稱取2.5,5.0,10.0 g烘干后的石筆木葉,加100℃純凈水1 000 g,室溫浸泡60 min,過濾取上清液即為低、中、高濃度的茶水。
每天觀察小鼠的外觀、行為、活動、精神狀態等,記錄每組小鼠飲食量和飲水量,按時稱量小鼠體重,計算小鼠的食物利用率。最后一次給藥后,小鼠禁食不禁水一晚,進行眼球取血,解剖后獲得心臟、肝臟、脾臟、腎臟并稱重,計算臟器指數。計算公式:臟器指數=器官重量(mg)/體重(g)。樣品血液離心后獲得血清,利用試劑盒測量血清中Glu、TP、Alb、T-CHO、TG、Cr、BUN、ALT、AST的含量及活性。

小鼠體重的變化在一定程度上可以反映小鼠生長發育情況[7],也在一定程度上間接反映了飲用石筆木茶水對小鼠機體的影響。由表1可知,實驗開始時,小鼠隨機分配到各組中,與空白對照組比較,各石筆木茶水組的體重沒有顯著性差異。經過90 d投喂石筆木茶水,各組小鼠體重都顯著增加,但與空白對照組比較,各石筆木茶水組的體重沒有顯著性差異。

表1 石筆木茶水對小鼠體重的影響
小鼠飲食量、飲水量的變化在一定程度上可以反映小鼠生理狀況[8],本研究中也在一定程度上間接地反映了飲用石筆木茶水對小鼠機體的影響。由表2可知,在90 d實驗期間,各組小鼠都正常飲食飲水,沒有異常情況出現,體重增加也在合理范圍內;與空白對照組比較,各石筆木飲茶組的飲食量、體重增加量以及食物利用率都沒有顯著性改變;石筆木飲茶低、中、高劑量組飲水量均低于空白組飲水量,且具有統計學意義。

表2 石筆木茶水對小鼠飲食飲水量以及食物利用率的影響
肝臟、腎臟、心臟、脾臟是動物機體的重要器官,肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數可以在一定程度上反映小鼠機體的損害情況[9]。由表3可知,各組小鼠的肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數都在正常范圍內;與空白對照組比較,各石筆木茶水組的肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數都沒有顯著性差異。

表3 石筆木茶水對小鼠主要臟器指數的影響
ALT、AST是反映肝臟損傷最常用的,也是較敏感的指標,如果ALT、AST升高,說明肝臟可能受到了損害[10]。TP、Alb在一定程度上也可以反映肝臟功能變化,TP、Alb降低表明肝功能可能受損[11]。由表4可知,各組小鼠的ALT、AST、TP、Alb都在正常范圍內;與空白對照組比較,各石筆木茶水組的ALT、AST、TP、Alb都沒有顯著性差異。

表4 石筆木茶水對小鼠肝功能的影響
Cr、BUN是反應腎臟損傷最常用指標;Cr是肌酸的代謝產物,其生成、代謝與排出受腎外因素影響較少,能較客觀地反映腎臟功能,是較為理想的指標[12];BUN是蛋白質代謝產生的氨在肝臟經鳥氨酸循環生成的終產物,BUN增高見于急慢性腎炎、各種原因所致急慢性腎功能障礙、心衰、休克、燒傷等[13]。由表5可知,各組小鼠的Cr、BUN都在正常范圍內;與空白對照組比較,各石筆木茶水組的Cr、BUN都沒有顯著性差異。
血糖、血脂是反應機體健康狀況的最常用指標[14],血糖、血脂的異常升高或降低都指示機體代謝出了問題。由表6可知,各組小鼠的TG、T-CHO、Glu都在正常范圍內;與空白對照組比較,各石筆木茶水組的TG、T-CHO、Glu都沒有顯著性差異。

表5 石筆木茶水對小鼠腎功能的影響

表6 石筆木葉茶水對小鼠血脂血糖的影響
由本研究結果可知,各劑量組飲用石筆木茶水后對小鼠體重增加量、飲食量以及食物利用率都沒有影響,說明石筆木茶水對小鼠機體沒有傷害。在平時的飼養觀察中也發現石筆木茶水各劑量組小鼠行為及毛色等各方面均表現正常,與空白對照組小鼠一致。石筆木茶水各劑量組飲茶水量顯著低于空白組飲水量,其原因可能是石筆木茶水口感不好,小鼠不喜歡飲用或者因為石筆木茶水具有生津解渴的作用。各劑量組小鼠飲用石筆木茶水后,肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數都沒有顯著性變化,說明石筆木茶水對小鼠重要器官沒有顯著影響;ALT、AST、TP、Alb、Cr、BUN沒有發生顯著性變化,說明飲用石筆木茶水不會損害小鼠肝臟、腎臟;TG、T-CHO、Glu沒有發生顯著性變化,說明飲用石筆木茶水不影響小鼠機體正常代謝。本研究結果為石筆木茶飲產品開發提供了一定安全依據。