主動(dòng)脈夾層合并急性肺損傷與血清CRP、MCP-1、MMP9的相關(guān)性

劉 健，宋 然，宋朝國(guó)，張 健

(1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院心血管外科，河北 邯鄲 056000；2.河北省邯鄲市第一醫(yī)院呼吸科，河北 邯鄲 056000)

主動(dòng)脈夾層(aortic dissection，AD)是臨床上常見(jiàn)的主動(dòng)脈疾病，病理學(xué)特征為主動(dòng)脈中層出現(xiàn)囊樣退行性改變，其年發(fā)病率為2.6～3.6/10萬(wàn)，若治療不及時(shí)，約有90%患者在1年內(nèi)死亡，嚴(yán)重威脅患者生命健康[1]。急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是AD常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，病死率高，并直接影響AD患者預(yù)后[2]。AD常伴有嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，而C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)是重要炎性標(biāo)記物，有研究報(bào)道CRP在AD患者血清中表達(dá)水平升高[3]。單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)是趨化性細(xì)胞因子，能促進(jìn)肺部炎癥反應(yīng)及肺纖維化[4]。基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP9)能降解AD患者主動(dòng)脈壁細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，促進(jìn)血管重構(gòu)，是AD早期診斷標(biāo)志物[5]。但關(guān)于CRP、MCP-1、MMP9在AD合并ALI患者血清中表達(dá)水平及相關(guān)性研究報(bào)道較少。因此，本研究旨在探討AD合并ALI患者血清CRP、MCP-1、MMP9表達(dá)水平及相關(guān)性，尋找ALI早期診斷生物標(biāo)記物。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年10月-2019年3月邯鄲市中心醫(yī)院收治的AD患者92例，其中發(fā)生ALI患者42例為ALI組，無(wú)發(fā)生ALI患者50例為非ALI組，選取同期體檢健康者50例為對(duì)照組。ALI組男性32例，女性10例；年齡40～65歲，平均(48.43±4.25)歲；Stanford 分型為A型19例，B型23例；合并癥為合并高血壓者24例，合并糖尿病者9例。非ALI組男性34例，女性16例；年齡42～64歲，平均(47.35±2.70)歲；Stanford分型為A型22例，B型28例；合并癥為合并高血壓者28例，合并糖尿病者11例。對(duì)照組男性36例，女性14例，年齡41～68歲，平均(48.96±4.05)歲。3組受試者性別、年齡、Stanford分型和合并癥比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。所有受試者均知情并簽署知情同意書(shū)。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)動(dòng)脈CT血管成像確診為AD；②符合ALI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：急性起病，氧合指數(shù)≤300 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，肺動(dòng)脈嵌頓壓<18 mmHg即為ALI。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心臟功能衰竭者；②合并肺炎、間質(zhì)性肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病者；③合并肺癌及其他部位惡性腫瘤者；④近期內(nèi)使用抗炎藥或激素類藥物者；⑤合并嚴(yán)重肝、腎功能障礙者。

1.3樣本采集 受試者入院后采集早晨空腹肘靜脈血5 mL于離心管中，室溫靜止20 min，2 800 r/min，離心10 min，取上清，-80 ℃凍存?zhèn)溆么龣z。

1.4檢測(cè)方法 酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清CRP、MCP-1、MMP9、白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，CRP、MCP-1、MMP9、IL-6、IL-10、TNF-α試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾公司。具體步驟如下：①稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，酶標(biāo)板上設(shè)置待檢樣品孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔，各孔加入對(duì)應(yīng)樣品，混勻，37 ℃孵育40 min；②洗滌液反復(fù)洗板4～5次，吸水紙上拍干；③加一抗工作液(空白孔除外)，混勻，37 ℃孵育20 min；④洗滌液反復(fù)洗板4～5次，吸水紙上拍干；⑤各孔均加入酶標(biāo)二抗工作液，混勻，37 ℃孵育10 min；⑥洗滌液反復(fù)洗板4～5次，吸水紙上拍干；⑦各孔均加入底物工作液，37 ℃避光反應(yīng)15 min；⑧各孔均加終止液終止反應(yīng)；⑨采用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測(cè)，計(jì)算各待檢樣品濃度。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析，預(yù)測(cè)CRP、MCP-1、MMP9對(duì)ADALI的診斷價(jià)值采用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC曲線)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13組血清CRP、MCP-1、MMP9水平比較 非ALI組和ALI組血清CRP、MCP-1、MMP9水平均高于對(duì)照組，ALI組高于非ALI組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組血清CRP、MCP-1、MMP9水平比較Table 1 Comparison of serum CRP,MCP-1 and MMP9 levels in three groups

2.23組患者炎癥因子比較 非ALI組和ALI組血清IL-6、TNF-α水平均高于對(duì)照組，ALI組均高于非ALI組；非ALI組和ALI組血清IL-10均低于對(duì)照組，且ALI組低于非ALI組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組患者血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比較Table 2 Comparison of serum levels of IL-6,IL-10 and TNF-alpha in three groups

2.3ALI組血清CRP、MCP-1、MMP9表達(dá)相關(guān)性 通過(guò)Pearson相關(guān)性分析顯示，ALI組血清CRP與MCP-1、MMP9呈正相關(guān)性(r=0.827，P<0.001；r=0.868，P<0.001)，MCP-1與MMP9呈正相關(guān)性(r=0.741，P<0.001)。

2.4血清CRP、MCP-1、MMP9對(duì)ALI患者診斷價(jià)值 分別以ALI組血清CRP、MCP-1、MMP9表達(dá)水平繪制ROC曲線顯示，CRP的AUC為0.856，截?cái)嘀?26.85 mg/L，診斷敏感度為66.70%，特異度為88.00%，95%CI：0.768～0.921，約登指數(shù)為0.5467；MCP-1的AUC為0.769，截?cái)嘀?122.57 ng/L，診斷敏感度為69.00%，特異度為76.00%，95%CI：0.670～0.851，約登指數(shù)為0.4505，MMP9的AUC為0.884，截?cái)嘀?651.87 μg/L，診斷敏感度為81.00%，特異度為90.00%，95%CI：0.801～0.942，約登指數(shù)為0.7095，三者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.930，診斷敏感度為83.30%，特異度為90.00%，95%CI：0.857～0.972，約登指數(shù)為0.7333。

3 討 論

AD是威脅生命的嚴(yán)重心血管急癥之一，高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、胸主動(dòng)脈瘤、創(chuàng)傷、感染等皆為其發(fā)病危險(xiǎn)因素，隨著高血壓發(fā)病率不斷升高，其發(fā)病率呈明顯增加趨勢(shì)[7]。AD病變廣泛，可累及心、腎、肺等多個(gè)器官，而ALI發(fā)生可明顯增加AD治療風(fēng)險(xiǎn)，且易引發(fā)患者術(shù)后呼吸衰竭，導(dǎo)致預(yù)后不良[8]。因此，如何預(yù)防及治療AD合并ALI成為當(dāng)今心血管科醫(yī)生面臨的難點(diǎn)和急需解決的問(wèn)題。

CRP、MCP-1、MMP9均為臨床常見(jiàn)的炎癥標(biāo)記物物。CRP又稱為急性期反應(yīng)蛋白，由肝細(xì)胞合成分泌，當(dāng)機(jī)體受微生物侵入、組織損傷等刺激時(shí)，機(jī)體內(nèi)CRP急劇增加，可反應(yīng)患者炎癥程度和炎癥組織活動(dòng)性，是一種非特異性、臨床應(yīng)用廣泛的炎癥反應(yīng)標(biāo)記物。有研究報(bào)道AD患者肺氧合損傷和機(jī)體凝血功能紊亂、炎癥反應(yīng)相關(guān)，CRP水平越高，患者肺氧合損傷過(guò)程中炎癥反應(yīng)越嚴(yán)重，預(yù)后較差[9]。MCP-1為典型的C-C家族趨化因子，其能趨化及激活單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集，促進(jìn)血管生成，氣道平滑肌增生，肺纖維化發(fā)生，廣泛參與局部損傷及炎癥反應(yīng)[10]。MMP9是一種蛋白水解酶，其能降解ECM中的Ⅳ型膠原、Ⅴ型膠原及明膠，即可降解肺毛細(xì)血管ECM和基底膜，破壞肺泡-毛細(xì)血管屏障，增加肺毛細(xì)血管通透性，引起肺水腫，導(dǎo)致肺損傷形成[11]。Liao等[12]研究顯示MMP9在動(dòng)脈夾層患者單核細(xì)胞中表達(dá)升高，并經(jīng)miR-320調(diào)節(jié)干擾動(dòng)脈夾層發(fā)育。本研究結(jié)果顯示，ALI組、非ALI組血清CRP、MCP-1、MMP9水平均高于對(duì)照組，且ALI組明顯高于非ALI組，與Wu等[13]研究結(jié)果相似，提示AD合并ALI患者血清CRP、MCP-1、MMP9水平升高，即存在嚴(yán)重系統(tǒng)炎癥反應(yīng)。進(jìn)一步分析顯示，ALI組、非ALI組血清IL-6、TNF-α水平均高于對(duì)照組，ALI組高于非ALI組；ALI組、非ALI組IL-10低于對(duì)照組，且ALI組低于非ALI組，與Vianello等[14]研究結(jié)果相似，提示AD合并ALI患者出現(xiàn)炎癥和抗炎平衡失調(diào)。IL-6、TNF-α為促炎因子，IL-10為抗炎因子，IL-10表達(dá)可抑制IL-6、TNF-α表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)[15]。通過(guò)相關(guān)性分析顯示，ALI患者血清CRP與MCP-1、MMP9呈正相關(guān)性，MCP-1與MMP9呈正相關(guān)性，與賴永坤等[16]研究相似，提示血清CRP、MCP-1、MMP9可能通過(guò)相互協(xié)同作用參與AD合并ALI患者發(fā)生發(fā)展。可能是AD患者發(fā)生系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)，CRP水平上升，加重炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致血液中MCP-1與MMP9濃度增加，通過(guò)肺循環(huán)參與肺損傷，同時(shí)隨著MCP-1與MMP9水平升高進(jìn)一步加重肺損傷程度，加重炎癥反應(yīng)。

本研究與李懿等[17]研究結(jié)果相似，提示血清CRP、MCP-1、MMP9對(duì)AD合并ALI均有較高敏感度和特異度，而三者聯(lián)合診斷高敏感度和特異度更高，對(duì)AD合并ALI預(yù)測(cè)具有較高臨床價(jià)值。

綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)AD合并ALI患者血清CRP、MCP-1、MMP9水平檢測(cè)結(jié)果顯示，患者血清CRP、MCP-1、MMP9水平升高，3者呈正相關(guān)性，有明顯炎癥反應(yīng)，CRP、MCP-1、MMP9聯(lián)合診斷敏感度和特異度都較高，對(duì)AD合并ALI具有較高診斷價(jià)值。由于本研究樣本量有限，單中心研究，研究結(jié)果可能具有一定誤差，在進(jìn)一步研究中盡可能擴(kuò)大樣本量，開(kāi)展多中心研究，以驗(yàn)證三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AD合并ALI診斷價(jià)值。