不同免疫檢測法在檢測乙肝血清學標志物(HBsAg)中的價值對比

廣東省茂名市電白區人民醫院（525400）張北華 潘偉光

乙型肝炎病毒一種嗜肝細胞病毒，可引起乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）導致肝臟的病變，最終可發展成肝癌[1]。當乙型肝炎病毒復制活躍時，具有極強傳染性，可通過血液和接觸破損的皮膚黏膜等傳染，嚴重危害人們的健康[2]。目前，臨床實驗室主要檢查乙肝血清學標志物作為診斷依據之一，主要以HBsAg指標協助早期的診斷。為了及時、準確的發現乙型肝炎病毒的感染，通過早發現繼而早診斷并得到最佳的治療以改善患者的預后，選擇最佳的檢測方法是實驗室檢查值得探討的問題。本文旨在研究不同免疫檢測法在檢測乙肝血清學標志物(HBsAg)中的價值對比。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年7月～2018年6月我院就診于肝病門診患者的血液標本共500例，其中男267例，女233例，年齡17～75歲，平均（46.23±6.72）歲。參考《WS299-2008乙型病毒性肝炎診斷標準》為診斷標準[3]，經病理確診275例。納入標準：患者及家屬自愿簽訂知情同意書；配合臨床檢查者。排除標準：合并腫瘤及嚴重肝腎功能不全疾病者；不依從檢查者。研究方案報經醫院倫理委員會審議通過。

1.2 方法 于清晨空腹采集門診患者靜脈血10mL，離心、分離血清，將血清均分為三份，儲存待檢。采用酶聯免疫法、免疫膠體金法、化學發光免疫分析法分別測定乙肝五項血清標志物，均嚴格按照標準步驟操作。酶聯免疫法采用北京萬泰生物藥業股份有限公司生產的ELISA試劑盒；免疫膠體金法采用珠海麗珠試劑股份有限公司的膠體金免疫層析法試紙條；化學發光免疫分析法采用邁克全自動化學發光測定儀IS1200全自動化學發光測定儀及配套試劑。

1.3 觀察指標 比較三種不同方法檢測乙肝五項（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）血清標志物的陽性率，參考標準[4]：HBsAg＞0.2ng/mL時，HBeAb＞0.2PEIU/mL，HBeAg＞0.5PEIU/mL，HBsAb＞0.5ng/mL，HBcAb＞0.9PEIU/mL為陽性；比較三種不同方法檢測乙肝血清學標志物（HBsAg）的靈敏度和特異性。

1.4 統計學處理 采用SPSS22.0進行統計分析，計數資料n(%)表示，行χ2檢驗比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2 結果

2.1 三種方法檢測結果比較 乙肝五項血清標志物陽性率從高到低依次是：化學發光免疫分析法、酶聯免疫法、免疫膠體金法，差異有統計學意義（P＜0.05）。見附表1。

2.2 三種檢測方法靈敏度和特異性比較 靈敏度：化學發光免疫分析法高于酶聯免疫法（χ2=21.626，P=0.000），酶聯免疫法高于免疫膠體金法（χ2=4.849，P=0.028）差異有統計學意義（P＜0.05）；特異性：化學發光免疫分析法高于酶聯免疫法（χ2=2.438，P=0.118），酶聯免疫法高于免疫膠體金法（χ2=2.957，P=0.086）差異無統計學意義（P＞0.05）。見附表2。

3 討論

乙型病毒性肝炎是一種以肝臟病變為特征的傳染性疾病，乙肝病毒(HBV)為主要致病病毒，通過血液、性傳播，成為全球性共同面臨的傳染性疾病。有報道顯示[5]，與世界各國相比，在我國乙型病毒性肝炎疾病負擔最為嚴重。新發和慢性乙型病毒感染者依然很多，仍然面臨著預防、篩選、治療等問題，因此要高度重視乙肝的防治工作。臨床實驗室的準確檢測對于早期篩查和臨床診斷，指導其治療，有非常重要的臨床價值。目前實驗室乙肝五項血清學檢測結果是作為臨床診斷乙肝病毒、判斷傳染病性及病程的主要依據。人體感染乙肝病毒后，其病毒DNA經過轉錄、復制、翻譯等系列變化，最早暴露出乙型肝炎表面抗原（HBsAg），通過檢測HBsAg反映乙肝病毒的感染情況[6]。目前臨床實驗室常采用酶聯免疫法、免疫膠體金法、化學發光免疫分析法等方法進行檢測。

酶聯免疫法是運用放射免疫技術來檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法。它的原理是讓受檢標本與抗原或抗體和酶連接成具有保持其免疫活性的酶標抗原或抗體結合，使其結合物與固相載體表面的抗原或抗體反應，通過洗滌的方法分離形成的抗原抗體復合物，再加入底物后，經酶的催化作用變為有色產物，通過觀察顏色的深淺多少來定性或者定量的分析。酶聯免疫法因其檢測費用實惠，靈敏度和特異度較高等優點，廣泛應用于乙型肝炎病毒的臨床檢測。但是也有步驟較多，操作時間長，操作過程可能會發生不穩定因素導致感染，影響其靈敏度和特異性，具有一定的局限性[7]。

附表1 三種檢測方法檢測結果比較[n(%)]

附表2 三種檢測方法靈敏度、特異性比較

免疫膠體金法是以膠體金標記與抗原抗體反應相結合的免疫標記技術。該檢測方法具有操作簡便，時間短，成本低廉且膠體金本身為紅色，不需加上色劑，對人體安全的優點。有臨床研究提示[8]，免疫膠體金法對于濃度低呈弱陽性的標本檢測力不夠，容易出現假陰性的結果。

化學發光免疫分析法是運用化學發光物質經氧化等化學反應后形成激發態中間體通過免疫反應系統標記在被檢測標本上，再用化學方法測定從激發態到基態狀態發出的光子量的方法。此方法結合了的化學發光測定技術的高靈敏度與免疫反應的高特異性等優勢，檢測范圍更廣，是目前應用極為廣泛，最為先進的標記免疫測定技術，尤其對于定量的檢測。

本次研究通過以上三種方法檢測乙肝血清學標志物（HBsAg），以病例確診為金標準，進行準確度對比。結果顯示，乙肝五項血清標志物陽性率最高為化學發光免疫分析法，最低為免疫膠體金法；化學發光免疫分析法的靈敏度均高于酶聯免疫法和免疫膠體金法，有統計學差異；特異性方面，化學發光免疫分析法均高于酶聯免疫法和免疫膠體金法，無統計學差異。說明對乙肝病毒血清學標志物檢測中的靈敏性和檢出率化學發光免疫分析法高于酶聯免疫法和免疫膠體金法，可早期、準確的反應乙型肝炎病毒感染程度。化學發光免疫分析法出特有的靈敏度和特異度外，因實行全自動化，有配套的試劑，且彌補了酶聯免疫法操作繁雜等問題，減少了環節誤差，對檢測結果具有很高的檢出率，對于進行定量的檢測，可極大的避免假陰性率，提高了靈敏度，對于避免漏診、誤診有重要的意義[9]。因此檢測乙肝血清學標志物的臨床價值均高于酶聯免疫法和免疫膠體金法。同時其費用也較高。通過本研究結果發現，三種方法在特異度方面相差不大，對于免疫膠體金法，其操作簡便，快速等優點可用于急診等需快速出結果的檢測中。有研究報道[10]，酶聯免疫法價格低，與化學發光免疫分析法相比，其高靈敏度和特異性，用于大批量檢測標本有優勢。

綜上所述，三種方法中以化學發光免疫分析法檢測乙肝血清學標志物（HBsAg）效果最佳，價值高。但在臨床中還需根據具體情況結合三種方法的優勢進行檢測。