松郁安神方對對氯苯丙氨酸致失眠大鼠血漿中前列腺素D₂的影響

曾雪愛 周春權 張一帆

摘要?目的：觀察松郁安神方對對氯苯丙氨酸（Para-chlorophenylalanine，PCPA）致失眠模型大鼠血漿中內源性睡眠促進物質前列腺素D2（Prostaglandin?D2，PGD2）的影響。方法：采用腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）建立失眠大鼠模型，用高、中、低劑量松郁安神方進行治療，通過酶聯免疫吸附法（ELISA）測定大鼠血漿中前列腺素D2（PGD2）的含量。結果：中、高劑量松郁安神方可提高PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量（P<0.05或P<0.01）。結論：松郁安神方改善睡眠的機制之一可能是通過調節內源性睡眠促進物質PGD2發揮作用。

關鍵詞?失眠;內源性睡眠促進物質;前列腺素D2;松郁安神方

Effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?Levels?of?Plasma?Prostaglandin?D2?（PGD2?）?in?Insomnia?Rats?Induced?by?Para-chlorophenylalanine（PCPA）

ZENG?Xueai，ZHOU?Chunquan，ZHANG?Yifan，WANG?Xiufeng，ZHANG?Yu，HUANG?Junshan

（Fujian?Academy?of?Traditional?Chinese?Medicine，Fuzhou?350003，China）

Abstract?Objective：To?observe?the?effect?of?Songyu?Anshen?Formula?on?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2?in?the?plasma?of?insomnia?rats?induced?by?PCPA.Methods：The?rat?model?of?insomnia?was?established?by?intraperitoneal?injection?of?PCPA.?The?rats?were?given?Songyu?Anshen?formula?intragastrically，?and?the?content?of?PGD2?in?plasma?was?determined?by?enzyme-linked?immunosorbent?assay?（ELISA）.?Results：The?content?of?PGD2?in?the?plasma?of?PCPA?could?be?increased?by?the?middle?and?high?dose?of?Songyu?Anshen?formula?（P<0.05?or?P<0.01?）?.?Conclusion：One?of?the?mechanisms?of?Songyu?Anshen?in?improving?sleep?quality?may?be?through?the?regulation?of?the?endogenous?sleep-promoting?substance?PGD2.

Keywords?Insomnia;?Endogenous?sleep-promoting?substances;?Prostaglandin?D2;?Songyu?Anshen?formula

中圖分類號：R256.23文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.2095-7130.2020.01.003

睡眠和覺醒的發生及轉換可能是通過腦內神經遞質和內源性睡眠促進物質共同作用調節的。其中前列腺素D2（PGD2）和腺苷是最強效的內源性睡眠促進物質，參與生理性睡眠覺醒調節[1]。松郁安神方根據疏肝安神法，以甘松、郁金、玫瑰花為君藥，配伍酸棗仁、首烏藤、丹參、生龍骨、珍珠母、合歡皮組方，具有重鎮安神之功效，在臨床上治療失眠療效顯著[2-3]。本試驗通過觀察松郁安神方對內源性睡眠促進物質PGD2的影響，探討松郁安神方改善睡眠的作用機制。

1?材料

1.1?試驗動物?清潔級SD大鼠36只，雄性，體質量（230±10）g，購自上海斯萊克試驗動物有限責任公司（生產許可證號：SCXK（滬）2017-0005;合格證編號：20170005004461）。動物置于安靜、恒溫、恒濕、12?h/12?h明暗光照環境中飼養，每天給予充足食物和水。試驗前采用隨機數字法將大鼠分為6組，分別為空白對照組、PCPA失眠組、中藥高、中、低劑量組、酸棗仁湯陽性對照組，每組6只。

1.2?主要試劑與儀器?Rat?PGD2?ELISA?Kit（上海酶聯生物科技有限公司，批號：Dec2018）;對氯苯丙氨酸（PCPA）（Sigma公司，批號：SHBH7873）;中藥飲片（福建鷺燕藥業股份有限公司）;酶標儀（美國BioTek，800TS）。

2?方法

2.1?PCPA失眠模型建立?參考文獻[4]方法，于臨用前將PCPA溶于弱堿性生理鹽水，配成混懸液，大鼠腹腔注射PCPA（300?mg/kg），1次/d，連續2?d。若大鼠晝夜節律消失，白天活動增多，睡眠減少甚至消失，飲水量增加，表明造模成功。

2.2?給藥方法?PCPA造模第1天開始灌胃中藥。松郁安神方組成：甘松10?g、郁金15?g、玫瑰花10?g、丹參15?g、酸棗仁15?g、首烏藤30?g、珍珠母30?g、生龍骨30?g、合歡皮15?g，藥物經煎煮及過濾濃縮至3.4?g/mL備用。中藥低、中、高劑量組分別按8.5?g/kg、17?g/kg、34?g/kg體質量灌胃給藥，陽性對照組灌胃酸棗仁湯（14.4?g/kg），空白對照組和失眠模型組均灌胃同等體積蒸餾水，1次/d，共7?d。

2.3?酶聯免疫吸附測定?試驗結束后，在麻醉狀態下腹主動脈取血，置于EDTA抗凝管中，靜置30?min后，2500×g離心10?min，取上層血漿進行檢測。PGD2含量檢測方法依據ELISA檢測試劑盒操作說明進行。

2.4?統計學方法?采用SPSS?16.0統計軟件進行統計分析。計量資料以（±s）進行描述，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

3?結果

3.1?動物一般狀態觀察?空白對照組大鼠精神狀態良好，毛發有光澤，晝夜節律規律，每天體質量逐漸增加。注射PCPA后，大鼠晝夜節律消失，白天活動增多，易激惹，毛發豎起且無光澤，飲水明顯增多，體質量下降。不同劑量松郁安神方干預后，中、高劑量組大鼠精神狀態、反應情況、體質量等一般狀態較失眠模型組明顯改善。

3.2?松郁安神方對PCPA失眠模型大鼠血漿中PGD2含量的影響?如圖1所示，與空白對照組比較，PCPA失眠組大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05），給予不同劑量松郁安神方治療7?d后，PGD2含量均有所增加，與PCPA失眠組比較，高、中劑量松郁安神方組差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01），與酸棗仁湯陽性對照組比較差異無統計學意義。其中，標準曲線結果顯示吸光度與PGD2濃度具有良好的線性關系（R2=0.998?6）。見圖2。

3?討論

失眠的病因病機復雜，五臟功能失調皆可導致失眠，其中以肝為首。結合古代醫書和前人經驗，我們認為失眠病機應以肝郁為主。我們前期臨床觀察也發現肝郁化火型失眠占多數，運用松郁安神方治療在臨床中取得明顯療效[2-3]。

PGD2是目前公認的內源性睡眠促進物質[1]，已有研究發現，在睡眠相關腦區注射PGD2，能增加大鼠非快動眼和快動眼期睡眠，且睡眠性質與生理性睡眠相似[5]。本研究觀察到PCPA致失眠后，大鼠血漿中PGD2含量明顯降低，給予不同劑量松郁安神方治療后，血漿中PGD2含量均有不同程度增加，中、高劑量松郁安神方組與失眠模型組比較均有統計學意義，表明松郁安神方可調節失眠大鼠血漿中PGD2含量，這一結果提示，松郁安神方改善失眠的作用機制可能與提高失眠大鼠血漿中內源性睡眠促進物質PGD2含量有關。本試驗結果也提示，血漿中內源性睡眠促進物質的變化可以在一定程度上反映大鼠的睡眠狀況，可作為臨床診斷失眠的輔助指標。

參考文獻

[1]岳小芳，邱梅紅，曲衛敏，等.內源性睡眠促進物質研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學，2011，16（6）：672-678.

[2]黃俊山，曾雪愛，黃兆遷，等.松郁安神方對不同中醫證型失眠患者血漿中5-羥色胺及多巴胺水平的影響[J].中醫雜志，2011，52（24）：2119-2124.

[3]黃俊山，吳文寶，曾雪愛，等.針刺合松郁安神方治療肝郁化火型不寐40例療效觀察[J].福建中醫藥大學學報，2012，22（3）：1-2.

[4]肖成榮，馬增春，李海靜，等.PCPA失眠大鼠模型的制作及其機制[J].毒理學雜志，2007，21（4）：326.

[5]Inoue?S，Honda?K，Komoda?Y，et?al.Differential?sleep-promoting?effects?of?five?sleep?substances?nocturnally?infused?in?unrestrained?rats[J].Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1984，81（19）：6240-6244.