靶向配體DPE-PEG₂₀₀₀-TAT的合成

王姣?牟萍?李培峰

摘要：目的：將TAT修飾在DSPE-PEG2000-NHS長鏈的末端，反應合成靶向化合物DSPE-PEG2000-TAT，來提高藥物靶向性。結果：采用此方法能夠很好的制得功能性磷脂共軛化合物DSPE-PEG2000-TAT，并且操作簡單，用時少，減少浪費節約成本。

關鍵詞：穿膜肽;靶向配體

將藥物制成靶向制劑，不但可以提高藥物在腫瘤部位的濃度，使藥物的功效增大;還可以降低其他部位的血藥濃度，使藥物的副作用降低，從而使藥物的利用率大大增加[1]。細胞穿膜肽幾乎能夠穿過所有與之相接觸的細胞胞膜，并且對細胞膜沒有損傷作用[2]。最理想的方法是將靶頭與PEG長鏈的末端相連，既可以起到長循環的作用，又可以有效的靶向作用到腫瘤細胞[3， 4]。

1 試驗方法

按照摩爾比為1：1的比例稱取功能化磷脂材料DSPE-PEG2000-NHS和TAT各2mg置于西林瓶中，加入2ml的無水DMF溶解，利用N-甲基嗎啉調節酸堿度至pH值為9.0。室溫攪拌36小時后轉移至透析袋中（MWCO， 3500 Da），用去離子水透析36小時，除去反應溶劑，將樣品冷凍干燥后放于-20℃冰箱中保存備用。

2 試驗結果

2.1 MALDI-TOF-MS測定

本試驗通過MALDI-TOF-MS測定產物的分子量，進而來確定產物。本試驗使用2， 5-二羥基苯甲酸作為MALDI-TOF-MS法的基質。結果見圖1。

如Figure 1 A和 Figure 1 B所示，DSPE-PEG2000-NHS的平均相對分子質量約為2895.35 Da，反應產物中DSPE-PEG2000-TAT的平均相對分子質量約為4290.54 Da。

2.2討論

基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）簡稱飛行時間質譜常用于混合物、生物大分子的測定[5]。通過上述方法測得了DSPE-PEG2000-NHS與DSPE-PEG2000-TAT的平均相對分子質量，由反應路線可知，合成產物的分子量計算公式如下：MDSPE-PEG-TAT=MDSPE-PEG-NHS + MTAT-MNHS。DSPE-PEG2000-TAT與DSPE-PEG2000-NHS之間的分子量差約為1395.19Da，再考慮到發生合成反應時有基團-NHS離去，與TAT的分子質量1555.16 Da相近而吻合，從而判定TAT與DSPE-PEG2000-NHS發生反應的摩爾比例是1：1。

3.結果

本試驗成功合成了一種靶向性載體材料DSPE-PEG2000-TAT，可將其修飾于脂質體表面作為靶向分子，制備TAT修飾他莫昔芬與紫杉醇脂質體。通過MALDI-TOF-MS對合成產物DSPE-PEG2000-TAT進行測定，結果符合實際操作的要求，可以證明本試驗采用此方法操作簡單，用時少，減少浪費節約成本，能夠很好的制得功能性磷脂共軛化合物DSPE-PEG2000-TAT。

參考文獻：

[1]孫春萌.細胞穿膜肽的研究進展[J].中國藥學雜志.2013，48（14）：1143-1147.

[2]范博.細胞穿膜肽在藥物遞送系統中的研究進展[J].藥學學報.2016，51（2）：264?271.

[3] Shin M C，Zhang J，Min K A，et al.Combination of antibody targetingand PTD-mediated intracellular toxin delivery for colorectal cancer therapy[J].J Control Release，2014，194：197-210.

[4] Dietz G P，B?hr M.Delivery of bioactive molecules into the cell：the Trojan horse approach[J].Mol Cell Neurosci，2004，27（2）：85-131.

[5] Lee ES，Gao Z，Kim D，et al.Super pH-sensitive multifunctional polymeric micelle for tumor pH（e）specific TAT exposure and multidrug resistance[J].J Control Release，2008，129：228?236.

通訊作者：牟萍