頭頸部鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞系的建立以及順鉑耐藥與Notch1的關(guān)系

盛李明 崔曉穎 程蕾 陳影 杜向慧

順鉑為基礎(chǔ)的同步放化療是局部晚期頭頸部鱗癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法，但由于患者對(duì)順鉑存在耐藥現(xiàn)象，同步放化療后的生存情況仍不理想，如何克服順鉑耐藥是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一，深入理解耐藥機(jī)制是當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題[1-2]。穩(wěn)定的頭頸部鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞系是研究耐藥機(jī)制的主要對(duì)象，但目前尚缺乏成熟的順鉑耐藥細(xì)胞系。本研究以頭頸部鱗癌細(xì)胞系FaDu、UD-SCC-4及UM-SCC-22B為基礎(chǔ)對(duì)象，采用順鉑濃度遞增、間歇誘導(dǎo)的方法獲取頭頸部鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞系，鑒定順鉑耐藥特性，同時(shí)探討順鉑耐藥與細(xì)胞表面受體編碼基因Notch1表達(dá)的關(guān)系，以初步明確Notch1信號(hào)通路在頭頸部鱗癌順鉑耐藥過(guò)程中的作用及其機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞系 人頭頸部鱗癌細(xì)胞系FaDu購(gòu)自美國(guó)ATCC公司，UD-SCC-4、UM-SCC-22B分別來(lái)自于德國(guó)Dusseldorlf大學(xué)和美國(guó)Michigan大學(xué)的頭頸部鱗癌實(shí)驗(yàn)室。

1.2 主要藥品和試劑 順鉑購(gòu)自德國(guó)Sigma-Aldrich公司。MEM培養(yǎng)基和10% FBS均購(gòu)自美國(guó)GIBCO公司，噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)自美國(guó) Roth公司，Notch1抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，內(nèi)參蛋白Vinculin抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司，高純RNA分離試劑盒購(gòu)自美國(guó)Roch公司，F(xiàn)irst strand cDNA synthesis Omniscript RT試劑盒購(gòu)自美國(guó)Qiagen公司。

1.3 頭頸部鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞系的建立 將頭頸部鱗癌細(xì)胞系FaDu、UD-SCC-4和UM-SCC-22B培養(yǎng)于含10% FBS的MEM培養(yǎng)基中，置于5% CO2、37℃、潮濕環(huán)境的培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鱗癌細(xì)胞，然后接種至含一定濃度順鉑的MEM培養(yǎng)基中處理2～4 h，棄上清液，加入新的MEM培養(yǎng)基，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，待其恢復(fù)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，重復(fù)上述操作，但順鉑的濃度逐漸增加，歷時(shí)4～9個(gè)月（各細(xì)胞系需要的順鉑濃度和時(shí)間均不一樣）。……