LYPD8在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其生物學(xué)功能

錢(qián)峻 嚴(yán)富國(guó) 陳文山 陳允 黃海平 葉明燕

近年來(lái)研究表明，含有Ly6/Plaur結(jié)構(gòu)域的高度糖基化的磷脂酰肌醇錨定蛋白8（Ly6/Plaur domain-containing protein 8，LYPD8）有助于大腸細(xì)菌與腸上皮細(xì)胞的分離[1]。此外，LYPD8在結(jié)腸上皮細(xì)胞中表達(dá)，而在一些潰瘍性結(jié)腸炎患者的結(jié)腸組織中LYPD8表達(dá)有所降低[2]。目前關(guān)于LYPD8在結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）中的生物學(xué)功能有待進(jìn)一步闡明。筆者將CRC組織與相應(yīng)的癌旁組織及正常組織進(jìn)行了比較，檢測(cè)了不同CRC組織中LYPD8的表達(dá)、信號(hào)傳導(dǎo)與活化轉(zhuǎn)錄因子3（signal transducer and activator of transcrip－tion 3，STAT3）/NF-κB p65 的磷酸化作用以及 IL-6/TNF-α的分泌水平；并將LYPD8在CRC細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，研究其對(duì)CRC細(xì)胞增殖和遷移的影響，以探討LYPD8在CRC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料和方法

1.1 組織標(biāo)本 組織標(biāo)本來(lái)自于2015年3月至2016年9月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬新昌醫(yī)院接受CRC根治術(shù)的40例患者，其中男26例，女14例；年齡45～70（56.3±3.4）歲；臨床TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期13例，Ⅳ期6例；所有患者術(shù)前未接受放療、化療和免疫治療。取其手術(shù)切除的CRC組織、正常結(jié)直腸組織（距離癌組織邊緣＞3 cm）和癌旁結(jié)直腸組織（距離癌組織邊緣≤3 cm）進(jìn)行檢測(cè)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有患者簽署知情同意書(shū)。

1.3 組織標(biāo)本病理學(xué)觀察 采用免疫熒光染色法。將組織在4%多聚甲醛溶液中固定過(guò)夜、脫水、石蠟包埋、切片、二甲苯脫蠟，在梯度乙醇中水化，抗原修復(fù)。3% H2O2處理切片后用10%山羊血清封閉切片，4℃下用STAT3抗體（ab68153，英國(guó)Abcam公司）和p65抗體（ab32536，英國(guó)Abcam公司）孵育過(guò)夜，然后二抗溫育 1 h。使用 4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（C1002，中國(guó)碧云天生物技術(shù)公司）對(duì)細(xì)胞核染色5 min，在共聚焦激光顯微鏡（LSM780，德國(guó)ZEISS公司）下觀察染色結(jié)果。……