液相色譜法測定筍制品中阿斯巴甜的含量

王朝杰，陳艷茹，張友青，趙佳麗，陳睿軒，張惠君

(浙江省杭州市臨安區產品質量監測中心，浙江 臨安 311300)

阿斯巴甜(Aspartame)是由天冬氨酸和苯丙氨酸結合而成的縮二氨酸的甲基酯，作為新型甜味劑逐漸被人們所熟悉，且其在體內迅速代謝為天冬氨酸、苯丙氨酸和甲醇，甲醇在體內代謝為甲醛，進而氧化為甲酸，以甲酸形態在體內停留時間最長，因此被認為是甲醇毒性的作用機理，但是阿斯巴甜中含有苯丙胺酸，不適用于苯丙酮尿癥患者，因此采取科學方法準確測定食品中阿斯巴甜的含量至關重要[1]。

目前行業內對阿斯巴甜的檢測，已經有比較多的報道，有對阿斯巴甜單獨的研究[2]，也有針對多種甜味劑的檢測方法[3-6]，本文針對自身實驗室實情與臨安地區筍制品的抽檢情況，結合國標[7]開發一種快速、節約、環保的方法，提高工作效率的同時，盡量減少了有機試劑的使用，并且取得良好的效果，使本方法具有一定的使用價值。

1 實 驗

1.1 儀器和設備

LC-20AD液相色譜儀，配光電二極管陣列紫外可見光檢測器；HC-3018高速離心機；Think-lab超純水機，METTLER TOLEDO電子天平，FLUKO均質器。

1.2 試 劑

阿斯巴甜標準物質(97.7%)，阿斯巴甜標準儲備液(1 mg/mL)；阿斯巴甜標準使用液系列濃度為5、10、25、50、100 mg/L；乙腈(色譜純)；乙酸銨(色譜純)。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

醬腌菜類筍制品：取適量樣品經組織搗碎機打碎后，稱取5 g打碎樣品至100 mL離心管中(精確至0.001)，加入50 mL超純水，用均質器打成勻漿狀態，離心取上清液過濾，濾液經0.45 μm水系濾膜過濾后上機分析。

筍干制品：取適量樣品剪成顆粒狀后混勻，稱取5 g混勻樣品至100 mL離心管(精確至0.001)，加入50 mL超純水，蓋上蓋子過夜泡脹，然后用均質器打成勻漿狀態，離心取上清液過濾，濾液經0.45 μm水系濾膜過濾后上機分析。

1.3.2 高效液相色譜條件

色譜柱：納譜分析ChromCore C18-P柱(5 μm，4.6×250 mm)；柱溫為30 ℃；進樣量10 μL；流速0.8 mL/min；流動為乙腈：20 mmol/L乙酸銨(20:80)；檢測波長210 nm。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

本實驗采用光電二極管紫外可見光檢測器，在波長190～400 nm范圍內對阿斯巴甜標準系列使用液進行掃描，結果發現在210 nm處，達到最高響應值。

2.2 流動相的選擇

考慮到甲醇和乙腈的價格和國標中甲醇-水(40:60)和乙腈-水(20:80)的比例，以及乙腈作為流動相，阿斯巴甜保留時間更早，綜合計算下還是乙腈-水更加節約有機試劑和成本。

在使用乙腈-水流動相中，發現本實驗室色譜柱有峰寬過寬以及拖尾的問題，故選擇加入緩沖鹽改善峰形，查閱相關文獻[7]和實際試用后，以及考慮到檢測醬腌菜中其它添加劑指標的便利性，最終選擇20 mmol/L的乙酸銨溶液作為緩沖液流動相。

此色譜條件下，阿斯巴甜標準圖譜如圖1所示。

圖1 阿斯巴甜標準溶液(濃度5 μg/mL)在210 nm波長下的色譜圖Fig.1 Chromatogram of aspartame standard solution (concentration 5 μg/mL) at 210 nm wavelength

2.3 樣品前處理方法的選擇

阿斯巴甜是一種易溶于水的甜味劑。筍制品打碎后稱樣至離心管中，再進行勻漿處理，即可均勻提取出阿斯巴甜，相比較國標，去除了甲醇的使用，該處理方法快速環保，處理液也可以繼續上機做醬腌菜的其它添加劑指標，大大節約了人力物力。

2.4 線性范圍、精密度和檢出限

在本實驗色譜條件下對一系列不同質量濃度的標準系列使用液進行上機測定，以各組分的峰面積(A)對質量濃度(C(μg/mL))繪制標準曲線，其線性關系、相關系數、檢出限(RSN=3)和相對標準偏差見表1。結果表明，阿斯巴甜在5～100 μg/mL范圍內有良好線性，可以滿足定量分析的需要。

表1 線性關系、精密度和檢出限Table 1 Linearity, precision and detection limit

2.5 樣品加標回收實驗

筍制品和筍干制品各取適量陰性樣品制樣，做加標實驗，各加3個濃度，每個濃度做3個平行，結果見表2。結果顯示該方法回收率范圍在94.2%～98.6%，RSD為1.39%，可以適用于日常筍制品中阿斯巴甜的檢測。

表2 陰性樣品加標回收率Table 2 Recovery rate of negative sample

2.6 實際樣品的測定

隨機抽檢臨安地區上市的筍制品20個批次，其中阿斯巴甜檢出2個批次，較多檢出甜蜜素和糖精鈉，添加量都在GB 2760-2014規定的限量值以內。

3 結 論

本方法測定筍制品中的阿斯巴甜，相對于國標對阿斯巴甜的檢測，具有快速、節約、環保的優點，處理液也可進行其它添加劑指標的測定，節省了人力物力。實驗數據證明，該方法具有較好的線性和較高的準確度、精密度和靈敏度，能夠滿足筍制品的國內市場監管和進出口檢測要求，此方法的應用具有一定的實用價值。