復方薄荷涂劑中樟腦的含量測定

徐靜娟，栗金權

(南通大學附屬常州兒童醫院，江蘇 常州 213003)

復方薄荷涂劑，為我院的醫療機構制劑(醫院制劑)，是耳鼻喉科常用的鼻用涂劑，主要由薄荷腦、樟腦、桉葉油等成分組成，用于治療萎縮性鼻炎、鼻黏膜干燥等癥。該制劑安全性高、療效確切，在兒童中應用廣泛，并被收載于《江蘇省醫療機構制劑規程》第一冊。

樟腦有消炎、抗菌(白色念珠菌、金黃色葡萄球菌等)作用，對薄荷腦有促滲透的作用[1]，是復方薄荷涂劑中的重要組分。為保障兒童用藥安全，進一步加強制劑的質量控制，本文建立方法對制劑中樟腦的含量進行測定，并做了系統的方法學研究。本文采用的高效液相色譜法(HPLC)測定樟腦含量，專屬性高、結果準確可靠，為復方薄荷涂劑的質量評價提供重要依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

沃特世高效液相色譜儀(型號E2695)，沃特世PDA檢測器(型號2998)，梅特勒萬分之一電子天平(型號AG245)。

1.2 藥品與試劑

樟腦對照品(110747-201409)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；復方薄荷涂劑(常州市兒童醫院自制)；缺樟腦的復方薄荷涂劑(常州市兒童醫院自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm，5μm)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75∶25)為流動相；進樣量：25μL；檢測波長：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

精密稱取樟腦對照品10.14mg，置10ml量瓶中，加無水乙醇使溶解并稀釋至刻度作為貯備液。精密量取貯備液2ml置10ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2供試品溶液的制備

精密量取復方薄荷涂劑2ml，置100ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備

按復方薄荷涂劑處方量取樟腦以外的其余原輔料，同法制備得到缺樟腦的復方薄荷涂劑，即陰性制劑，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法，取陰性制劑2ml，置100ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得陰性對照溶液。

2.3 專屬性

以“2.1”項下的色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各25μL，注入色譜柱，采集色譜圖(見圖1)。

由圖1可知，供試品溶液與對照品在保留時間(tR)為6.2min處出現色譜峰，陰性對照無此峰，我們認為tR=6.2min處的色譜峰為樟腦色譜峰，分離效果良好，供試品溶液中樟腦色譜峰與相鄰色譜峰分離度均大于1.5，理論塔板數以樟腦計大于8000。

2.4 線性關系與線性范圍考察

精密稱取樟腦對照品10.14mg，置10ml量瓶中，加無水乙醇使溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取貯備液適量，加無水乙醇配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、1.0mg·mL-1的系列對照品溶液。吸取上述各濃度對照品溶液25μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積。以濃度C(mg·mL-1)為橫坐標，樟腦峰面積(A)為縱坐標，進行線性回歸，得到線性回歸方程：Y=664401X-726.6，r=0.9999。結果表明，樟腦在0.05～1.00mg·mL-1濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取濃度為0.6084mg·mL-1的樟腦對照品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，重復進樣6次，計算峰面積的相對標準偏差RSD(n=6)為0.4%，小于2%，本實驗的精密度滿足要求。

2.6 重復性試驗

按“2.2.2”項下操作，平行配制6份供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算樟腦含量。結果樟腦含量的平均值(n=6)為10.1250mg·mL-1，RSD為0.6%，小于2%，表明該方法重復性良好。

2.7 溶液穩定性

取同一供試品溶液，按上述色譜條件在0h，2h，4h，6h，8h，12h，24h進行測定，樟腦色譜峰無明顯變化，其峰面積的RSD為0.6%，表明樣品溶液在24h內是穩定的。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知樟腦含量的樣品(9.2550mg·mL-1)1ml，平行取6份，分別置于100ml量瓶中，加入3.0646mg/ml樟腦對照品溶液3ml，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，備用。吸取上述續濾液25μL注入高效液相色譜儀，在實驗色譜條件下進行測定，用外標法計算含量，并計算加樣回收率。樟腦的平均回收率為100.36%，RSD為0.73%，見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.2.2”項下操作，制備供試品溶液，在上述色譜條件下，每份進樣2次，測定峰面積，并計算復方薄荷涂劑中樟腦的含量，見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 結論

本試驗采用PAD HPLC色譜法測定復方薄荷涂劑中樟腦的含量，精密度高(RSD=0.4%)、重復性好(RSD=0.6%)，在0.05～1.0mg·mL-1濃度范圍內與峰面積線性關系良好。加樣回收率在98%～102%之間，RSD小于2%，表明該方法準確度高。所以，該法適用于復方薄荷涂劑中樟腦的含量測定。

4 討論

4.1 波長的選擇

建立檢測方法的初期，波長的選擇至關重要。使用沃特世PDA檢測器對樟腦對照品溶液在200～400nm波長范圍內掃描，得到其波長掃描圖譜(沃特世PAD檢測器命名為光譜指數圖)，顯示對照品溶液在287.7nm處有吸收峰。另外，樣品中處方中的各個輔料，根據處方量配制相同濃度的輔料供試品溶液，同法在200～400nm波長范圍內進行掃描，在288nm波長處無吸收，表明輔料在288nm處無干擾，故選擇288nm為測定波長。

4.2 流動相比例的考察

文獻中HPLC法測定樟腦含量多采用甲醇-水體系[2-7]為流動相，所以本文直接考察了甲醇-水的比例，如甲醇-水為(80∶20)、(75∶25)、(70∶30)、(60∶40)，結果顯示有機相(甲醇)比例越低，出峰時間越晚，色譜峰之間的距離越大，峰寬越大，干擾峰出盡所需時間越長，如圖4。綜合考慮保留時間、峰型、峰面積和分離度，最終選取甲醇-水體積比為75∶25作為流動相。

4.3 柱溫的選擇

同等色譜條件下，不同柱溫可能會對保留時間、峰型有影響，所以分別在柱溫為25℃、30℃、35℃時進行了考察，結果顯示保留時間分別為6.2min、6.1min、5.9min，表明隨著柱溫升高，出峰時間越早，但是峰型和峰面積無明顯變化，含量測定結果也無明顯差異。考慮到環境溫度隨季節性的變化，30℃比較容易控制，所以選擇柱溫為30℃。