注射制劑輔料甘露醇細菌內毒素檢查法研究

鄧莎 羅潔 張德波 邊原

【摘 要】目的：建立輔料甘露醇的細菌內毒素檢驗方法。方法：按照中國藥典2015年版四部通則1143細菌內毒素檢查方法和中國藥典2015年版四部通則9301注射劑安全性檢查法應用指導原則[2-4]進行試驗，內毒素限值設定為L=1.0EU/g。結果：甘露醇稀釋濃度為0.03g/ml時，對鱟試劑與內毒素反應不產生干擾。結論：輔料甘露醇可以建立細菌內毒素檢查法質量標準。

【關鍵詞】：甘露醇;注射制劑;細菌內毒素;干擾試驗

Abstract： OBJECTIVE To establish a bacterial endotoxin test（BET） for mannitol. METHODS According to Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 1143 and Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 9301. Set the endotoxin limit： L = 1.0 EU/g. RESULTS There was no interference in the agglutinate reaction between the sample and relative TAL with the ethylenediamine concentration of 0.03g/ml. Need to use the sensitivity of 0.03 EU/ml or higher sensitivity TAL. CONCLUSION Mannitol as the excipient of injection preparation can establish the quality standard of bacterial endotoxin test.

Key words： Mannitol; Injection preparation; Bacterial endotoxin; Interference test

【中圖分類號】R927【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）07-21--01

甘露醇，白色針狀結晶體，易溶于水，有類似蔗糖的甜味。可用于治療肝病、糖尿病、艾滋病、心臟病等，在臨床上被廣泛使用[1]。本文研究的甘露醇作為注射制劑生產中添加的輔料，為控制甘露醇細菌內毒素含量，確保相關注射制劑的安全性，研究起草輔料甘露醇細菌內毒素檢查標準。

1 實驗材料

1.1 鱟試劑

標示靈敏度（λ）0.03EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：1804121;標示靈敏度（λ）0.06EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：1808220;標示靈敏度（λ）0.125EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：1806252，湛江安度斯生物有限公司生產。標示靈敏度（λ）0.03EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：17080612;標示靈敏度（λ）0.06EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：17061112;標示靈敏度（λ）0.125EU/ml，規格：0.1ml/支，批號：18050212，福州新北生化工業有限公司生產。

1.2 細菌內毒素檢查用水

規格：100ml/瓶，批號1710260，含細菌內毒素<0.003EU/ml，湛江安度斯生物有限公司生產。

1.3 細菌內毒素工作標準品（凍干）

效價：80EU/支，批號：150601-201784，中國食品藥品檢定研究院。

1.4 藥品

甘露醇，藥用輔料，白色粉末，批號：YPJT1801721-1、YPJT1801721-2、361805024，規格：約5g/支，由企業提供。

1.5 儀器

ZRD-A7140型十段編程鼓風干燥箱，溫度范圍5-300℃;TAL-40試管恒溫儀，控溫精度37±0.2℃，孔間溫差≤0.1℃。ZH-2型孔式旋渦混合儀。

2 方法與結果

2.1 內毒素限值（L）的確定

本品作為藥用輔料，添加于鹽酸帕洛諾司瓊注射液、唑來膦酸注射液中，根據其添加的劑量及兩種注射液臨床用法用量，參考《中國藥典》2015年二部“甘露醇注射液”標準中細菌內毒素檢查項內毒素限值， “取本品，依法檢查（附錄 ⅪE），每1g甘露醇中含內毒素的量應小于1.25EU ”[2]。本著從嚴的原則，確定本品的內毒素限值為L=1.0EU /g 。

2.2 鱟試劑靈敏度復核

以細菌內毒素檢查用水溶解內毒素工作標準品，并配制成含內毒素2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ系列濃度的溶液，依法進行加樣操作。每一濃度平行做4支，同時用細菌內毒素檢查用水做2支陰性對照，記錄結果，并按式λC=antilg（∑X/4）計算λC值，見表1。

表1結果表明：每一批鱟試劑靈敏度測得值均在0.5λ～2.0λ范圍內，符合要求。復核的鱟試劑可按標示靈敏度值使用。

2.3 干擾預試驗

取本品一批（批號：YPJT1801721-2）用細菌內毒素檢查用水溶解并配制含甘露醇0.25g/ml、0.125g/ml、0.06g/ml、0.03g/ml系列濃度。依法操作進行試驗。結果見表2。

表2預試結果顯示：供試品用細菌內毒素檢查用水稀釋制成0.125g/ml及其以下濃度的溶液可能對反應無干擾作用。