蓮柏外洗液熏洗對尖銳濕疣患者外陰Ki-67蛋白表達(dá)的影響

關(guān)健纓 葛 炎 鄭永平 陳苑湲

尖銳濕疣由HPV感染引起，具有強(qiáng)傳染性及易反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)，對患者的日常生活及性生活質(zhì)量均造成不同程度的影響[1]，高危HPV感染還是導(dǎo)致腫瘤發(fā)病因素之一。嚴(yán)重影響患者身心健康，導(dǎo)致其生活質(zhì)量下降[2]。容易產(chǎn)生抑郁、缺乏安全感，怕傳染家人等高壓心理情緒，也降低了尋找性與愛的機(jī)會。我院采用蓮柏外洗液熏洗治療通過有效調(diào)節(jié)外陰濕熱環(huán)境，改善(陰道)內(nèi)環(huán)境，對女性陰道炎等疾病臨床療效顯著，同時亦有效減少尖銳濕疣患者激光治療次數(shù)，緩解患者抑郁、焦慮情緒、提高患者性生活滿意度的作用。國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究方面均報(bào)道Ki-67作為增殖細(xì)胞具有較強(qiáng)靈敏度，其半衰期短，檢測假陰性或假陽性結(jié)果低，可用于檢測濕疣發(fā)展與預(yù)后[3]。本研究旨在通過研究中藥熏洗對Ki-67蛋白表達(dá)的影響，探討中藥熏洗對HPV病毒復(fù)制機(jī)制的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料所有患者均為我院門診患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為治療組25例，對照組25例，均為女性患者，治療組年齡27～42歲；平均35.2歲；發(fā)病時間0.2～6.3個月，平均3.5個月。對照組年齡25～38歲，平均32.7歲；發(fā)病時間0.3～7.5個月，平均3.2個月。2組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)均經(jīng)組織病理學(xué)檢查及患者臨床表現(xiàn)，符合《安德魯斯皮膚病學(xué)》[4]中診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。

1.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)①符合診斷標(biāo)準(zhǔn)患者；②均為初治患者；③入組前4周未使用過抗病毒類或免疫抑制類藥物；④排除嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病和免疫性疾病患者；⑤排除哺乳或孕娠期患者；⑥能按醫(yī)囑執(zhí)行中藥熏洗治療患者。

1.4 治療方法治療組：治療前女性患者取外陰皮損作病理及免疫組化Ki-67檢查，并予激光治療外陰尖銳濕疣，治療后予蓮柏外洗液(組成：苦參30 g，穿心蓮30 g，黃柏20 g，地膚子20 g，毛冬青20 g，百部10 g，土茯苓10 g，白鮮皮10 g，荊芥穗10 g，紫花地丁10 g等。煎煮2次，每次1.5 h，每2劑配成150 ml。由中山市中醫(yī)院制劑室提供)熏洗治療外陰，每天1次，每次15～20min。1個月為一個療程復(fù)診，取藥外用，隨診發(fā)現(xiàn)疣體再現(xiàn)者，記錄、計(jì)算疣體大小個數(shù)后，予激光治療。3個療程后取外陰皮損作免疫組化Ki-67檢查。對照組：治療前女性患者取外陰皮損作病理及免疫組化Ki-67檢查，予激光治療外陰尖銳濕疣；每個月復(fù)診1次，隨診發(fā)現(xiàn)疣體再現(xiàn)者，記錄、計(jì)算疣體大小個數(shù)后，予激光治療。治療3個月后取外陰皮損作免疫組化Ki-67檢查。

1.5 觀察指標(biāo)采用單個疣體大小及數(shù)量量化評分法[3]進(jìn)行，即單個疣體<1mm為1分，1 mm≤單個疣體≤5 mm為2分，單個疣體>5 mm為3分，單個患者各個疣體中分值為該患者皮損評分。Ki-67陽性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn)：光鏡下觀察，正常Ki-67陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞核出現(xiàn)綜黃色顆粒，著色范圍以百分率計(jì)分(在10×104高倍鏡下隨機(jī)選取10個視野，計(jì)數(shù)染色陽性表皮角質(zhì)形成細(xì)胞所占百分比均值)。表達(dá)強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn)：以4級定量法評估陽性反應(yīng)強(qiáng)度，陰性(-)：陽性細(xì)胞數(shù)<5%；弱陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%；陽性(++)：陽性細(xì)胞數(shù)26%～75%；陽性(+++)：陽性細(xì)胞數(shù)>75%；(-)為陰性表達(dá)，(+)—(++)為低表達(dá)，(+++)為過度表達(dá)。復(fù)發(fā)情況：囑患者3個月內(nèi)隨診，調(diào)查患者復(fù)發(fā)情況，發(fā)現(xiàn)于皮損部位或周圍出現(xiàn)新皮損(包括可疑皮損、冰醋酸試驗(yàn)陽性者)判為復(fù)發(fā)。

1.6 療效評定標(biāo)準(zhǔn)痊愈：皮損全部消退；顯效：皮損消退90%以上；有效：皮損消退50%以上；無效：皮損不消退或反而增多[5]。

2 結(jié)果

2.1 2組患者療效比較治療組總有效率為96.0%，高于對照組的84.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者療效比較 (例，%)

2.2 2組患者復(fù)發(fā)情況比較治療組總復(fù)發(fā)率為56.0%，低于對照組的80.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者復(fù)發(fā)情況比較 (例，%)

2.3 2組患者ki-67陽性表達(dá)比較治療前，治療組ki-67蛋白檢測的陽性率為88.0%，治療后為68.0%；治療前，對照組ki-67蛋白檢測的陽性率為92.0%，治療后為88.0%。治療組陽性率明顯低于對照(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者Ki-67陽性表達(dá)比較 (例，%)

3 討論

尖銳濕疣由HPV感染引起，具有強(qiáng)傳染性及易反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)，目前發(fā)現(xiàn)的HPV病毒疣120多種，其中的高危HPV感染還是導(dǎo)致腫瘤發(fā)病因素之一，尖銳濕疣多采用激光、冷凍等破壞性方法，治療時局部疼痛、容易出血或損毀疣體正常組織，術(shù)后容易復(fù)發(fā)、感染、遺留瘢痕等，給患者帶來極大精神創(chuàng)傷和心理壓力[6]。

Ki-67抗原定位于細(xì)胞核，是一組與細(xì)胞增殖相關(guān)的非組核蛋白，編碼Ki-67的基因定位位于第10號染色體長臂上，由15個外顯組成，有2種變異體，主要功能與細(xì)胞代謝相關(guān)，除G0、G1早期外，其余均有表達(dá)，M期最高，Ki-67半衰期短，細(xì)胞脫離增殖周期后迅速下降，故Ki-67能準(zhǔn)確反映細(xì)胞增殖活性，其優(yōu)勢高于PCNA指數(shù)、DNA指數(shù)、DNA倍體含量等表示細(xì)胞增殖的指標(biāo)[7]。

國內(nèi)外報(bào)道多種惡性腫瘤中均存在Ki-67的過度表達(dá)，推測Ki-67可能是一種原癌基因[8],其過度表達(dá)能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

隨著宮頸癌防癌篩查工作開展，宮頸癌的檢出逐年增加并有年輕化趨勢，隨著時代變遷，女性生育年齡越來越晚，因此部分女性尚未完成生育，則感染HPV病毒，故尋找一種對HPV有一定抑制作用的安全臨床用藥方法對臨床工作提出挑戰(zhàn)。

蓮柏外洗液由苦參30 g，穿心蓮30 g，黃柏20 g，地膚子20 g，毛冬青20 g，百部10 g，土茯苓10 g，白鮮皮10 g，荊芥穗10 g，紫花地丁10 g等組成。方中苦參、黃柏、白鮮皮清熱燥濕、解毒祛風(fēng)、瀉火；穿心蓮、毛冬青清熱解毒，活血消腫；土茯苓、地膚子主治濕熱下注[9，10]；百部抗菌殺蟲；荊芥穗解表、透疹、消瘡；地膚子祛風(fēng)止癢。西醫(yī)藥理證明，地膚子具有抗菌、提高抵抗力，能有效抑制各種有害病菌，對口腔、腸道、咽喉等黏膜內(nèi)環(huán)境有抗菌抑菌功效；苦參中含有的苦參醚有抗菌、抑菌作用，苦參堿具有抗腫瘤作用；百部、荊芥穗西醫(yī)藥理顯示具有抗菌、抗病毒作用；紫花地丁含多種微量元素，可促進(jìn)上皮細(xì)胞修復(fù)、增強(qiáng)細(xì)胞活性，通過酶系統(tǒng)，對生物機(jī)體的代謝及免疫功能發(fā)揮調(diào)節(jié)和控制，起到抗病毒作用；土茯苓具有抗腫瘤、抑制致敏T淋巴細(xì)胞；白鮮皮中含有白鮮堿、梣皮酮也具有抑制真菌、細(xì)菌及抗腫瘤作用[11，12]。

研究證明，蓮柏外洗液純中藥制造，研究證明其具有抑制陰道菌群數(shù)，改善陰道內(nèi)環(huán)境，從而有效抑制基底細(xì)胞Ki-67過度增殖作用，有效抑制HPV病毒繁殖，對縮短尖銳濕疣病程，減少尖銳濕疣復(fù)發(fā)療效確切。方中標(biāo)本兼顧，功補(bǔ)兼施，能有效提高機(jī)體免疫平衡，防治濕疣復(fù)發(fā)，使用方便、安全，值得臨床推廣。