冠心病患者miR-126、sVCAM-1水平變化及臨床意義

楊南然 王曉群 劉曉暉

[摘要] 目的 探討冠心病（CHD）患者血漿miR-126、可溶性血管細胞黏附分子-1（sVCAM-1）水平變化及臨床意義。 方法 選擇2018年2月—2019年12月在廣東省普寧市人民醫院住院的CHD患者103例，依據診斷標準分為急性冠脈綜合征（ACS）組（58例）和穩定型心絞痛（SAP）組（45例），另選取非CHD體檢者55例為對照組。所有患者接受冠狀動脈造影術，并采用冠狀動脈狹窄程度積分（Gensini）法評價冠狀動脈狹窄，檢測血漿miR-126和sVCAM-1水平，采用Pearson相關系數進行相關性分析。 結果 ACS組患者sVCAM-1水平、Genisi評分顯著高于SAP組和對照組，miR-126均低于SAP組和對照組（均P < 0.05），且SAP組miR-126水平低于對照組，Gensini評分高于對照組（均P < 0.05）;冠狀動脈多支病變和中重度病變患者miR-126分別低于單支病變和輕度病變患者（P < 0.05），多支病變和中重度病變患者sVCAM-1分別高于單支病變和輕度病變患者（P < 0.05）;相關性分析顯示，CHD患者miR-126與病變冠狀動脈支數（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini評分（r = -0.574，P = 0.015）均呈負相關，sVCAM-1與病變冠狀動脈支數（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini評分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相關，miR-126與sVCAM-1呈負相關（r = -0.685，P = 0.000）。 結論 CHD患者存在明顯的miR-126表達下調和sVCAM-1表達上調，且上述指標與冠狀動脈病變程度密切相關，或許可作為CHD診斷和治療的參考指標。

[關鍵詞] 冠心病;miR-126;血管細胞黏附分子-1

[中圖分類號] R541.4 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）08（b）-0041-04

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of plasma miR-126 and soluble vascular cell adhesion molecule-1 （sVCAM-1） levels in patients with coronary artery heart disease （CHD）. Methods One hundred and three cases of CHD patients hospitalized in Puning People′s Hospital of Guangdong Province from February 2018 to December 2019 were selected. They were divided into acute coronary syndrome （ACS） of 58 cases and stable angina pectoris （SAP） of 45 cases according to the diagnostic criteria， and 55 non-CHD patients were selected as the control group. All patients underwent coronary angiography and the Gensini′s degree integral method was used to evaluate coronary artery stenosis. The plasma miR-126 and sVCAM-1 levels were measured， and Pearson correlation coefficient was used for correlation analysis. Results The levels of sVCAM-1 and Gensini′s degree integral score in ACS group were significantly higher than those of SAP group and control group， the levels of miR-126 were all lower than those of SAP group and control group （P < 0.05）. And the level of miR-126 in SAP group was lower than that of control group， the Gensini′s degree integral score was higher than that of control group （P < 0.05）. The levels of miR-126 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively lower than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. The levels of sVCAM-1 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively higher than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. Correlation analysis showed that miR-126 was negatively correlated with the number of coronary artery lesions （r = -0.536， P = 0.007） and Gensini′s degree integral score （r = -0.574， P = 0.015）. sVCAM-1 was positively correlated with the number of coronary artery lesions （r = 0.619， P = 0.000） and Gensini′s degree integral score （r = 0.644， P = 0.000）. miR-126 was negatively correlated with sVCAM-1 （r = -0.685， P = 0.000）. Conclusion There are significant down-regulation of miR-126 expression and up-regulation of sVCAM-1 expression in CHD patients， and the indexes are closely related to the degree of coronary lesions， which may be used as reference indicators for the diagnosis and treatment of CHD.

[Key words] Coronary artery heart disease; miR-126; Vascular cell adhesion molecule-1

冠心病（CHD）是當今世界上死亡率最高的疾病之一，目前多數學者認為CHD主要是脂質代謝異常導致脂質浸入動脈內膜，沉積形成脂質斑塊，即動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）病變，引起動脈管壁增厚、動脈彈性降低，導致血流受阻、心肌缺血，表現為心絞痛、心肌梗死、猝死等，嚴重影響人類的生活質量[1-2]。近年來CHD的發病率逐年上升，并且呈現年輕化趨勢。尋找一個可靠的預測因子在早期指導CHD的發生、發展乃至預后中具有十分重要的意義[3]。微小RNA（microRNAs，miRNA）在心血管疾病中的作用是近年來的研究熱點，廣泛參與體內多種生理過程，在血漿中相對穩定，便于檢測。miR-126是一種內皮特異表達的miRNA，研究中發現其參與了AS及高血壓病的發生發展[4-5]。血管細胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）能夠促進淋巴細胞、血小板黏附在血管內皮上，在AS斑塊的形成中發揮了重要作用[6-7]。本研究探討CHD患者血漿miR-126和VCAM-1的變化水平及臨床意義。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月—2019年12月在廣東省普寧市人民醫院住院的CHD患者103例，男61例，女42例;年齡34～76歲，平均（58.23±13.25）歲。依據疾病類型分為急性冠脈綜合征（ACS）組（58例）和穩定型心絞痛（SAP）組（45例）。納入標準：①接受冠狀動脈造影術，并確診為CHD;②病歷信息完整無缺漏，完善相關檢查;③患者或家屬知情同意，簽署知情同意書。排除標準：①既往有心肌病、嚴重心律失常、心功能衰竭、心臟瓣膜病病史;②自身免疫性疾病、惡性腫瘤、嚴重感染;③嚴重肝腎功能不全、周圍血管病;④近期使用免疫調節藥物，如腎上腺皮質激素、抗感染類藥物;⑤懷孕婦女。另選同期接受冠狀動脈造影且排除CHD的55例體檢者為對照組，男35例，女20例;年齡31～75歲，平均（57.82±14.27）歲。通過病歷和詢問采集研究對象一般資料：年齡、性別、體重、身高、高血壓病、糖尿病、心腦血管疾病史、吸煙史、既往用藥史，計算體重指數（body mass index，BMI）=體重（kg）/身高的平方（m2）。本研究經過醫院醫學倫理委員會審查通過。

1.2 診斷標準

依據《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》[8]和《非ST段抬高型急性冠脈綜合征管理指南》[9]進行診斷和分型。ACS包括急性心肌梗死和不穩定型心絞痛，癥狀為典型胸痛發作，疼痛劇烈可有瀕死感，含服硝酸甘油可緩解或無緩解，心電圖可見相鄰ST段抬高或異常Q波，或ST段壓低或T波倒置，也可無ST段改變，心肌酶水平高于正常上限2倍以上，冠狀動脈造影顯示前降支、回旋支、右冠狀動脈中至少一支血管狹窄且狹窄≥50%。SAP是固定誘因的心絞痛發作，疼痛性質穩定，含服硝酸甘油可緩解，冠狀動脈造影顯示前降支、回旋支、右冠狀動脈中至少一支血管狹窄且狹窄至50%。對照組：無心肌缺血證據，冠狀動脈造影未發現有意義的血管狹窄。

1.3 觀察指標

1.3.1 冠狀動脈造影術 ?所有患者在入院后行冠狀動脈造影術檢查，由至少兩名心血管內科介入醫師采用Judkins法進行穿刺，行冠狀動脈造影，并進行造影結果判定，單支血管狹窄≥50%即認定為病變血管，記錄病變血管支數。冠狀動脈狹窄程度評價采用Gensini法，根據冠狀動脈血管狹窄程度分別計1、2、4、8、16、32分[10]。將各血管的狹窄程度得分乘以系數再求和得到總分。依據病變血管支數將患者分為單支病變者（病變血管支數為1）和多支病變者（病變血管支數>1），依據Gensini評分將患者分為輕度病變者（Gensini≤26分）和中重度病變者（Gensini>26分）[11]。

1.3.2 血液學指標 ?患者入院后次日清晨采集靜脈血5 mL，使用羅氏P800全自動分析儀測定三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C），試劑盒購自上海一基實業有限公司（貨號：FS15696）。另采集2 mL血液，靜置后取血漿置于-80℃冰箱備用，采用雙抗體夾心法檢查可溶性VCAM-1（sVCAM-1）的濃度，采用美國R&D公司的試劑盒（批號：20171026），嚴格按照說明書操作。采用熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）法檢測血漿中的miR-126，使用Trizol法提取血漿標本總RNA，使用美國Bio-Rad公司的實時逆轉錄PCR試劑盒（批號：20171205）合成模板DNA，采用SYBR定量PCR試劑盒（美國賽默飛世爾科技公司，批號：20170519）檢測miR-126的表達，表達水平采用2-ΔΔCt法進行計算，引物序列為，F：5′-GGGGTGGTACCGTT-3′，R：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′。內參基因序列為，F：5′-GACTTCATCACCGGGTGTAAATC-3′，R：5′-TATCG-TTGTTCTCCACT-CCTTGAC-3′。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0對所得數據進行統計分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;多組計量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗;計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗;相關性分析采用Pearson相關分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組一般資料比較

三組患者年齡、性別、BMI、吸煙史、高血壓病、糖尿病病史及一般生化指標比較差異均無統計學意義（均P > 0.05），ACS組sVCAM-1水平、Gensini評分顯著高于SAP組和對照組，miR-126均低于SAP組和對照組（均P < 0.05），SAP組miR-126水平低于對照組，Gensini評分高于對照組組（P < 0.05）。見表1。

2.2 冠狀動脈病變分支與miR-126及sVCAM-1的關系

多支病變者miR-126水平低于單支病變者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于單支病變者（P < 0.05）;中重度病變者miR-126水平低于輕度病變者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于輕度病變者（P < 0.05）。見表2～3。

2.3 CHD患者miR-126及sVCAM-1與冠狀動脈病變的相關性

Pearson相關分析顯示，miR-126與病變冠狀動脈支數（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini評分（r = -0.574，P = 0.015）均呈負相關，sVCAM-1與病變冠狀動脈支數（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini評分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相關，miR-126與sVCAM-1呈負相關（r = -0.685，P = 0.000）。

3 討論

CHD的主要原因是AS，它形成的過程是一個慢性炎癥過程，而細胞黏附分子是調節單核細胞、淋巴細胞與血管內皮細胞發生黏附，觸發早期血管炎癥的關鍵因子。當炎癥細胞浸潤到內皮細胞時，又會激活內皮細胞分泌各種細胞因子，加速局部炎癥反應，形成粥樣斑塊，這是介導細胞與細胞、細胞外基質黏附的關鍵[12-14]。VCAM-1是細胞黏附分子的一種，主要在血管內皮細胞上表達，使循環中的白細胞與激活的血管內皮細胞緊密結合，當炎癥激活血管內皮細胞后，大量分泌VCAM-1，促進淋巴細胞、單核細胞黏附在血管內皮上，并可加速白細胞穿透內皮細胞間的空隙向血管內皮下浸潤，進而轉化為泡沫細胞，加速血管內皮損傷[15-16]。這一過程可以給淋巴細胞提供抗原，誘導局部免疫反應，釋放多種炎性細胞因子，促進平滑肌細胞表型改變，形成纖維斑塊[17-18]。sVCAM-1是由內皮上脫落的VCAM-1溶解于血漿中形成的，其濃度可反映內皮細胞表達的VCAM-1含量，并且在冠狀動脈腔內與外周血中的濃度幾乎一致，可通過檢測sVCAM-1代替VCAM-1[19]。本研究結果顯示，ACS組患者sVCAM-1水平顯著高于SAP組和對照組，提示sVCAM-1與心肌缺血嚴重程度有關;進一步對不同病變支數和不同Gensini評分患者sVCAM-1的相關性進行分析，結果顯示sVCAM-1與病變冠狀動脈支數、Gensini評分呈正相關，提示sVCAM-1與冠心病患者冠狀動脈病變程度有關，對于評價冠心病嚴重性具有積極意義。

miRNA是一類高度保守的非編碼小分子RNA，在轉錄水平上調節基因的表達，因其廣泛存在于血液中，近年來將其作為新型標志物在心血管疾病、腫瘤、糖尿病中都進行了大量研究[20-22]。miR-126參與調控血管炎癥過程，能夠抑制VCAM-1的表達[23-24]。本研究結果顯示miR-126與sVCAM-1呈負相關，SAP組miR-126水平高于ACS組，多支病變患者miR-126低于單支病變患者，中重度病變患者miR-126低于輕度病變患者，提示miR-126與冠狀動脈病變有關。相關性分析也顯示miR-126與病變冠狀動脈支數及Gensini評分均呈負相關，提示miR-126可能是冠狀動脈病變程度的保護因子。有研究通過敲除小鼠miR-126基因，發現血管內皮細胞受損，證實miR-126具有抵抗AS進展的作用[25]。

綜上所述，CHD患者存在明顯的miR-126表達下調和sVCAM-1表達上調，且上述指標與冠狀動脈病變程度密切相關，或許可作為CHD診斷和治療的參考指標。

[參考文獻]

[1] ?申文祥，李琚平，牛鎖成，等.阿托伐他汀治療冠心病前后患者血漿黏附因子濃度變化的觀察[J].臨床醫學，2017， 37（1）：17-18.

[2] ?王彩蕊，任鳳學，劉祎秀，等.冠心病患者冠狀動脈病變進展的相關危險因素的探討[J].心肺血管病雜志，2020， 39（1）：14-18.

[3] ?陳秋霞，姜醒華.冠心病生物標志物的研究進展[J].醫學綜述，2015，21（2）：222-224.

[4] ?馮曉敏，劉玉薇，萬楠.miR-126與冠心病關系研究進展[J].臨床軍醫雜志，2018，46（7）： 848-850.

[5] ?曾萍，楊簡.miRNA在冠心病檢測中的研究新進展[J].中國老年學雜志，2017，37（1）：233-235.

[6] ?楊莉，何燕，楊文慧，等.雙源螺旋CT結合外周血管超聲和炎性標志物評價老年2型糖尿病合并冠心病患者冠脈斑塊的穩定性[J].中國老年學雜志，2015，35（7）：1747-1749.

[7] ?梁芳，馬玉梅，魏德芝，等.穩消方對頸動脈粥樣硬化不穩定斑塊MCP-1、VCAM-1表達、脂質代謝、踝臂指數的影響[J].現代中西醫結合雜志，2015，24（22）：2400-2402，2427.

[8] ?中華醫學會心血管病學分會，中華心血管病雜志編輯委員會.急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南[J].中華心血管病雜志，2015，38（8）：675-690.

[9] ?Amsterdam EA，Wenger NK，Brindis RG，et al. 2014 AHA/ACC guideline for the management of patients with non-ST-elevation acute coronary syndromes：a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines [J]. Circulation，2014，130（25）：e344-e426.

[10] ?中華醫學會心血管病學分會，中華心血管病雜志編輯委員會.中國心血管病預防指南[J].柳州醫學，2012，5（4）：263-279.

[11] ?朱小莉，周云，孫曉靖.冠心病危險因素分析及其與冠狀動脈狹窄程度的關系[J].中國循證心血管醫學雜志，2017，9（12）：1513-1515.

[12] ?金鵬，周琪，康美麗，等.高遷移率族蛋白B1與冠心病病變程度和斑塊易損性相關性[J].中華實用診斷與治療雜志，2017，31（6）：574-576.

[13] ?王陽，米樹華，楊關林.動脈粥樣硬化機制研究進展[J].中國醫藥，2017，12（4）：619-623.

[14] ?田海萍，趙冠南，鄭俊華，等.脂聯素、血管內皮細胞黏附分子1和同型半胱氨酸水平與冠心病患者冠狀動脈粥樣硬化斑塊類型的相關性研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2018，26（1）：22-26.

[15] ?耿馳，陶夢醒，劉瑩.血管細胞黏附分子-1在心血管疾病中的研究進展[J].心血管病學進展，2019，40（2）：222-226.

[16] ?方葉青，謝培益，王磊，等.冠心病患者循環內皮祖細胞變化及功能的研究[J].中國動脈硬化雜志，2019，27（8）：694-699.

[17] ?Brown RA，Shantsila E，Varma C，et al. Current Understanding of Atherogenesis [J]. Am J Med，2017，130（3）：268-282.

[18] ?趙雨軒，徐赟晟，倪晶宇，等.血管細胞黏附分子-1與動脈粥樣硬化機制的研究現狀[J].中國臨床藥理學雜志，2018，34（12）：1481-1483.

[19] ?周立賓，薛紅，劉娟.冠心病患者外周血miR-126與sVCAM-1表達及相關性研究[J].臨床和實驗醫學雜志，2019，18（9）：923-926.

[20] ?Lu TX，Rothenberg ME. MicroRNA [J]. J Allergy Clin Immunol，2018，141（4）：1202-1207.

[21] ?Feinberg MW，Moore KJ. MicroRNA Regulation of Ather-osclerosis [J]. Circ Res，2016，118（4）：703-720.

[22] ?李亞麗，姜皓，艾麗萍，等.循環microRNAs在冠心病中的診斷作用[J].中國實驗診斷學，2018，22（9）：1665-1667.

[23] ?Wu H，Zhang J. miR-126 in Peripheral Blood Mononuclear Cells Negatively Correlates with Risk and Severity and is Associated with Inflammatory Cytokines as well as Intercellular Adhesion Molecule-1 in Patients with Coronary Artery Disease [J]. Cardiology，2018，139（2）：110-118.

[24] ?李云，宋銀宏，呂云波.miR-126與血管的研究進展[J].基礎醫學與臨床，2015，35（2）：257-261.

[25] ?Tian HS，Zhou QG，Shao F. Relationship between arterial atheromatous plaque morphology and platelet-associated miR-126 and miR-223 expressions [J]. Asian Pac J Trop Med，2015，8（4）：309-314.

（收稿日期：2020-05-19）