可溶性MerTK在胸腔積液病因?qū)W中的診斷價值

趙海鵬 張珍珍 丁會

(1華北電力大學(xué)醫(yī)院外科，北京 102206；2濰坊市人民醫(yī)院；3吉林大學(xué)第一醫(yī)院)

胸腔積液是多種原因引起的病變，病因不同，胸腔積液的性質(zhì)亦不同，臨床上可分為漏出液和滲出液。漏出液常見于低蛋白血癥、心衰等，臨床上比較容易診斷；然而滲出性的胸水常見于結(jié)核性胸膜炎及惡性腫瘤，但二者都是淋巴細(xì)胞性胸腔積液，鑒別困難，兩者的預(yù)后截然不同，所以兩者的鑒別診斷尤為重要。本文擬檢測結(jié)核性胸腔積液(TPE)與惡性腫瘤性胸腔積液(MPE)中MerTK表達(dá)，以探究其對結(jié)核性與惡性胸水鑒別診斷的價值。

1 資料與方法

1.1研究對象 收集2018年6月至2019年6月吉林大學(xué)第一醫(yī)院呼吸與危重癥學(xué)科，經(jīng)胸腔鏡下胸膜活檢且明確診斷的患者，共104例，其中TPE患者54 例為TPE組；MPE患者50例為MPE組，年齡18～73歲。兩組性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。

1.2標(biāo)本收集 ①用離心管收集患者的第一管胸水，使用離心機(jī)分離上清液。②上述分離出的上清再次進(jìn)行離心，將此上清分裝至9個EP管中，標(biāo)記好保存于-80℃冰箱中。③將首次分離過的上清液分裝好，用分離管底部沉積的細(xì)胞制作玻片標(biāo)本，觀察不同性質(zhì)胸水中細(xì)胞的形態(tài)。

1.3主要試劑及儀器 MerTK試劑盒(Abcam，美國)，酶標(biāo)儀(BioTek，ELx800)

1.4測定方法 (1)解凍上清液，按照酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒說明書步驟進(jìn)行嚴(yán)格的操作來測定蛋白濃度，設(shè)定分光光度值為450 nm，用以測定樣品的OD值，按說明繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計算出各個樣品的濃度值。(2)入組患者的胸水常規(guī)、生化等指標(biāo)由醫(yī)院檢驗科完成。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗，秩和檢驗，受試者工作特征(ROC)曲線分析和Pearson線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組胸腔積液中MerTK的含量 TPE組MerTK濃度〔(5 310.380±2 769.791)ng/L〕明顯高于MPE組〔(904.290±561.547)ng/L，P<0.000 1〕。

2.2MerTK對胸腔積液病因(即結(jié)核與惡性腫瘤)鑒別診斷的價值 MerTK蛋白鑒別TPE組與MPE組的曲線下面積為0.961,敏感度88.9%，特異性98.0%，臨界值為2 178.22 ng/L(P<0.01)。

2.3兩組炎癥因子表達(dá)水平比較 兩組白細(xì)胞介素(IL)-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α濃度差異顯著(P<0.01)。見表1。

表1 兩組一般資料及炎癥因子表達(dá)水平

2.4MerTK表達(dá)與IL-1β、TNF-α水平的相關(guān)性 兩組MerTK表達(dá)與IL-1β、TNF-α水平無相關(guān)性(P>0.05)。見圖1。

圖1 兩組MerTK表達(dá)與IL-1β、TNF-α水平的相關(guān)性

3 討 論

胸腔積液是呼吸科常見疾病，病因主要是結(jié)核與惡性腫瘤〔1〕，而兩者均表現(xiàn)為滲出液，且胸水中有較多的淋巴細(xì)胞，臨床上對兩者的鑒別存在一定難度，且結(jié)核與腫瘤的預(yù)后是完全不一樣的。結(jié)合臨床及實驗室研究，目前有很多方法用以鑒別兩者，但大多都是敏感性與特異性不能同時兼顧。胸腔積液中的一些差異蛋白，對胸水病因的鑒別有較高的臨床價值，MerTK蛋白對結(jié)核性胸水與惡性胸水的鑒別診斷可能具有較為顯著的意義。

MerTK是受體酪氨酸激酶的一種蛋白，在人體中廣泛存在，發(fā)揮許多的功能，生理或者病理發(fā)生的功能〔2〕。酪氨酸激酶通過一系列的通道、機(jī)制參加細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而引起機(jī)體基因水平的變化，最后導(dǎo)致相關(guān)一系列的病理生理改變〔2〕。MerTK受體通常存在于M2巨噬細(xì)胞，可識別凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜配體，從而使巨噬細(xì)胞與凋亡細(xì)胞結(jié)合，進(jìn)而使巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞〔3〕。研究表明〔4〕，凋亡細(xì)胞可通過MerTK來誘導(dǎo)程序性死亡受體(PD)-L1的表達(dá)，可以說明當(dāng)MerTK高水平表達(dá)時，便可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生及生長。文獻(xiàn)中指出，MerTK與一些實體的惡性腫瘤，常見的如胃癌、肺腺癌、肺鱗癌等，與這些腫瘤的產(chǎn)生可能有關(guān)系，所以說可以把MerTK當(dāng)成一個腫瘤靶點研究，可能會有比較有意義的收獲〔5〕。免疫學(xué)研究指出，結(jié)核病的主要保護(hù)機(jī)制是細(xì)胞免疫，當(dāng)人體感染有致病能力的結(jié)核桿菌后，首先是大量巨噬細(xì)胞作出免疫應(yīng)答，其中肺泡的巨噬細(xì)胞會產(chǎn)生大量IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥因子，從而使結(jié)核桿菌感染的部位聚集淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，漸漸形成肉芽腫，進(jìn)而控制結(jié)核抗酸桿菌在體內(nèi)擴(kuò)散，并且殺滅結(jié)核菌。當(dāng)人體受到結(jié)核桿菌的感染時，體內(nèi)可以檢測到與M2型巨噬細(xì)胞激活相關(guān)的因子表達(dá)，比如CD163、Mer(即MerTK)、CD206等，所以說MerTK蛋白也參與了以上結(jié)核桿菌感染時的細(xì)胞免疫機(jī)制〔6〕，相關(guān)實驗發(fā)現(xiàn)，MerTK濃度的高低，可能與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)〔7〕。

本研究中，MerTK在TPE組與MPE組中均有高表達(dá)，并且在TPE組的濃度要明顯高于MPE組，考慮與M2巨噬細(xì)胞在活動性結(jié)核中的活性明顯增強有關(guān)〔8〕。MerTK濃度的測定應(yīng)用于結(jié)核性與惡性胸水的鑒別診斷時，具有較高的靈敏度與特異度，可用于鑒別胸水的病因〔9〕。

本研究存在一定的不足之處，樣本量相對比較少，是單指標(biāo)的試驗研究，可以擴(kuò)大樣本量，聯(lián)合檢測多個指標(biāo)等，使實驗研究得出的數(shù)據(jù)更加嚴(yán)謹(jǐn)、有意義，并進(jìn)一步探討MerTK與結(jié)核性胸腔積液、惡性胸腔積液患者的預(yù)后有無相關(guān)性。