血漿miR-144-5p水平在動脈粥樣硬化診斷中的臨床意義

畢靜 白曉雪 劉方方

(1湖北省陽新縣人民醫院心內科，湖北 陽新 435200;2吉林大學第一醫院干部病房;3吉林市中心醫院神經內科)

動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性進行性疾病，特征在于脂質和纖維成分的積累和沉積及導致病變發展的炎癥反應〔1〕。高脂血癥、高血糖癥、高血壓和炎癥引起血管內皮細胞損傷后，大中型動脈的內膜內會發生病變。AS病變發展的最早臨床標志是充滿脂質的巨噬細胞(稱為泡沫細胞)聚集，形成“脂肪條紋”。微小RNA(miRNA)是哺乳動物內源性高度保守的短鏈非編碼RNA，與炎癥、腫瘤、干細胞分化等多種生命進程有著密切的聯系，正在成為多種疾病重要的臨床生物標志物和治療的靶標〔2〕。本研究探討血漿miR-144-5p在AS診斷中臨床意義。

1 資料與方法

1.1研究對象 吉林市中心醫院募集2015～2019年84例無癥狀AS患者和72名健康對照者，均無吸煙史。根據歐洲高血壓學會和歐洲心臟病學會的動脈高血壓管理工作組發布的2007年動脈高血壓管理指南診斷無癥狀AS。排除心血管和腦血管疾病、糖尿病、腫瘤、風濕免疫性疾病、急性感染疾病或藥物治療史。所有受試者血漿總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和C反應蛋白(CRP)由吉林市中心醫院檢驗科提供，另抽取空腹靜脈血5 ml，離心后留取血漿。

1.2主要試劑和儀器 qRT-PCR儀(Biorad，美國)，逆轉錄試劑盒和sybrgreen mix(全式金，中國)。

1.3血漿miRNA提取 新鮮抽取抗凝血經短暫離心后，取400 μl血漿加入200 μl三氯甲烷，在室溫下孵育10 min。樣品以14 000 r/min離心15 min，分離出上層水相，并加入500 μl異丙醇，然后在室溫下孵育15 min。溫育后，將樣品再次離心以沉淀總RNA。將沉淀完全干燥并溶于無RNA酶的純水中。使用Nanodrop測量RNA濃度后保存于-80℃待用。

1.4qRT-PCR檢測血漿miR-144-5p水平 使用逆轉錄試劑盒對樣品中的總RNA進行逆轉錄。取逆轉錄產物加入引物、SYBR mix、脫氧核糖核酸(dNTP)和水進行qPCR。使用U6作為定量miR-144-5p水平的內參，通過公式2-ΔΔCT確定相對miRNA表達水平。

1.5統計學分析 采用SPSS15.0軟件進行t檢驗，Spearman相關分析。

2 結 果

2.1一般資料 兩組年齡和性別構成上無明顯差異，體重指數(BMI)、總膽固醇、三酰甘油、HDL-C、LDL-C、心率和血壓無顯著差異(均P>0.05)。與對照組相比，AS組CRP水平顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料

2.2血漿miR-144-5p水平 與對照組(1.12±0.37)相比，AS組血漿中miR-144-5p表達(3.24±0.51)明顯增高(P<0.001)。

2.3血漿miR-144-5p水平與血脂和CRP的相關性 AS患者血漿miR-144-5p水平與外周血中總膽固醇、三酰甘油、HDL-C和LDL-C水平無明顯相關性(P>0.05)，但與CRP呈正相關(r=0.625，P<0.01)。

2.4miR-144-5p用于AS診斷的敏感性和特異性 受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)為0.82，可作為診斷AS風險的潛在生物標記。miR-144-5p檢測AS的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值和優勢比分別為78.6%，83.2%，74.0%，84.3%和11.7%。

3 討 論

miRNA在許多生理和病理生理過程中廣泛發揮功能，例如胚胎發育、干細胞分化、炎癥和腫瘤〔3〕。研究表明，miRNA可以用作包括AS在內的各種人類疾病的診斷標記〔2〕。既往發現，miR-144-3p可以作為疾病中的有效生物標志物。例如，Satoh等人報道稱，與健康人相比，阿爾茨海默氏病患者血液樣本中miR-144-5p和其他26種miRNA的表達失調，這可能與神經元突觸功能有關〔4〕。與健康對照組相比，抑郁/焦慮癥患者的血漿miR-144-5p水平顯著降低，并且與抑郁評分呈負相關〔5〕。在各種類型的腫瘤中也發現了異常的miR-144-5p表達〔6～8〕。本研究表明，miR-144-5p在AS的發病機制中可能起著非常重要的作用。

AS被認為是由炎癥反應驅動的多因素疾病，炎癥反應在急性AS血栓形成事件的發生中也起到了重要的促進作用〔9〕。CRP是一種急性期蛋白，其在血清中的濃度反映了機體的系統性炎癥狀態。既往研究發現，CRP水平與心血管疾病密切相關，并可作為預測心肌梗死和腦卒中的可靠標志物〔10〕。CRP可能會促進AS斑塊的進展和(或)不穩定〔11〕。本研究表明miR-144-5p可以用來反映AS患者系統性炎癥的嚴重程度，可以作為監測AS病情變化或進展的潛在性標志物。