姜黃素對應激小鼠抗焦慮作用的研究

李亞茹 王思婷 馬 行*

隨著各種應激因素的增加，焦慮癥已經成為現代社會的常見病。在臨床上，焦慮癥主要表現為病人主觀不安和害怕，同時伴有肌緊張、自主神經系統活動增高等軀體癥狀。中藥方劑"逍遙散"具有疏肝解郁、養血健脾之功效，姜黃是逍遙散的藥味之一，其主要有效成分為姜黃素。研究已證實姜黃素具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降血脂和神經保護等多種藥理作用[1-4]，但姜黃素是否具有抗焦慮作用未見報道。本研究擬采用應激焦慮動物模型，研究姜黃素的抗焦慮作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物昆明小鼠，雄性（20-25 克），由徐州醫科大學實驗動物中心提供，每籠10 只，飼養室溫（22±1℃），濕度（50±10%），自然光照。實驗前12 小時禁食不禁水。

1.1.2 藥品和儀器

姜黃素（curcumin，儲存于棕色瓶中，使用前用花生油溶解配成所需濃度）和地西泮（diazapam）均購于美國sigma 公司。DigBeh-EPM 型高臺十字迷宮（上海吉量軟件科技有限公司），SN－2202 型數字測溫儀（北師大司南儀器廠），JZZ98－CM 型自主活動儀（中國醫學科學院藥物研究所）。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與造模

昆明小鼠60 只，隨機分成6 組：對照組、姜黃素組（5 mg·kg-1，10 mg·kg-1，20 mg·kg-1，40 mg·kg-1）、陽性對照地西泮組（2.5 mg·kg-1）10 只/組。每只小鼠單獨放置于體積約12 cm×18 cm×13 cm 的鼠籠中，各組實驗動物灌胃相應濃度的藥物，對照組灌予同體積的生理鹽水。連續給藥7d。

1.2.2 體溫測量

預先用少許硅油涂擦電子體溫計小段距離，將體溫計探頭輕柔插入小鼠肛門2 cm，當溫度顯示穩定后記錄讀數。對每只實驗動物末次給藥后1 h進行體溫測量，記為T1，再過10 min 測得體溫記為T2，T1與T2之間的差值即為ΔT。

1.2.3 自主活動測試

將小鼠放入自主活動儀中，對其進行給藥前后5min 的自主活動測試。

1.2.4 高臺十字迷宮

該實驗裝置由兩個開放臂和兩個閉合臂構成一個類似“十”字形的迷宮，迷宮高離地面50 cm。末次給藥后1 h 將小鼠置于迷宮中央，頭朝開臂，觀察者距離迷宮中心至少1 m。分別記錄實驗期（通常為5 min）內大鼠進入開臂和閉臂的次數和在兩臂滯留時間（進出臂標準應嚴格界定，以四肢全部入臂或兩只前爪出臂為準）。計算大鼠進入開臂次數和在開臂滯留時間分別占總次數（進入開臂和閉臂次數之和）和總時間（在開臂與閉臂滯留時間之和）的百分比，以此作為評價焦慮的指標。

1.2.5 統計學處理

實驗數據均以均數±標準差表示，用SPSS 11.5 統計軟件進行檢驗，分析各組間結果的差異。

2 結果

2.1 姜黃素對孤養應激小鼠體溫的影響

由圖1 結果看出，對照組小鼠兩次檢測的體溫變化為0.97±0.05 ℃，姜黃素組和地西泮組給藥前后的體溫變化差別較小，與對照組相比，姜黃素組和地西泮組兩次檢測的體溫變化有顯著差異。

圖1 姜黃素對孤養應激小鼠體溫的影響（n=10）與對照組比較： *P ＜0.05

2.2 姜黃素對孤養應激小鼠行為學的影響

2.2.1 自主活動

表2 各組小鼠在高臺十字迷宮中開臂次數和開臂時間百分比的比較（n=10）

與對照組相比，各藥物組的自主活動次數無顯著差異，具體見表1。

表1 姜黃素對小鼠自主活動的影響（n=10）

2.2.2 高架十字迷宮

3 討論

孤養應激是一個經典的焦慮模型，該模型操作簡單、快捷，廣泛應用于抗焦慮藥的研究中。各種應激，如捉拿等刺激均可引起動物體溫升高[5]。這種應激反應現象與人類焦慮癥狀相似。目前的研究顯示，孤養應激引起的焦慮主要和下丘腦-垂體-腎上腺軸功能失調有關，導致機體免疫功能下降，本次研究結果發現，姜黃素和地西泮均可降低由孤養應激引起的體溫升高，提示姜黃素有可能通過免疫調節而對抗孤養應激所激發的體溫升高，但具體機制有待進一步研究。

高臺十字迷宮是常用的焦慮行為學之一，在高臺十字迷宮中，主要是利用動物對新奇環境的探究習性和對高懸開臂的恐懼來形成動物的矛盾沖突狀態，從而反映動物的焦慮狀態。本實驗結果顯示，姜黃素20 和40 mg·kg-1劑量組可以均可以增加動物開臂次數和開臂時間的百分比，提示姜黃素可改善孤養應激引起的焦慮作用。